Desorption Elektrospray-Ionisations-Massenspektrometrie (DESI-MS) ist eine Methode, mit der Umgebungsluft Proben, einschließlich biologischen Geweben, mit minimaler Probenvorbereitung abgebildet werden kann. Durch Rastern der Probe unterhalb der Ionisationselektrode, bietet dieses Spray-basierte Technik ausreichender räumlicher Auflösung auf molekularen Eigenschaften von Interesse in Gewebeschnitten zu erkennen.
Massenspektrometrie Imaging (MSI) bietet ungezielte molekularen Informationen mit der höchsten Spezifität und räumlicher Auflösung für die Untersuchung von biologischen Geweben zu den hundert bis zehn Mikrometer-Skala. Wenn unter Umgebungsbedingungen durchgeführt wird Probe Vorbehandlung überflüssig und vereinfacht damit das Protokoll unter Beibehaltung der hohen Qualität der erhaltenen Informationen. Desorption Elektrospray-Ionisation (DESI) ist ein Spray auf Umgebungstemperatur MSI Technik, die für die direkte Entnahme von Oberflächen im Freien, auch in vivo ermöglicht. In Verbindung mit einem Software-gesteuerten Probentisch verwendet, wird die Probe unter der DESI Ionisationselektrode gerastert und in den Zeitbereich, m / z Informationen mit der chemischen Spezies räumliche Verteilung korreliert. Die Genauigkeit der DESI-MSI Ausgang hängt von der Quelle Ausrichtung und Positionierung in Bezug auf die Probenoberfläche und Massenspektrometer Einlass. Hier prüfen wir, wie man Gewebeschnitte für DESI vorzubereiten imaging und zusätzlichen experimentellen Bedingungen, die direkt auf die Bildqualität. Insbesondere beschreiben wir das Protokoll für die Bildgebung von Rattenhirn Gewebeschnitten durch DESI-MSI.
Untargeted Bildgebung mittels Massenspektrometrie ermöglicht die Übernahme von chemischen Informationen für die Entdeckung und Hypothesen-generierenden Anwendungen. Gezielte Bildgebung eines bekannten chemischen von Interesse auf der anderen Seite kann eine erhöhte Empfindlichkeit und Selektivität durch spezifische Verfahren Entwicklung zu erleichtern. Massenspektrometrie Imaging (MSI) wird am häufigsten auf Gewebe mit MALDI, 1 Sekundärionen-Massenspektrometrie (SIMS), 2 und Umgebungstemperatur Ionisation Techniken, einschließlich Desorption Elektrospray-Ionisation (DESI), 3 Laserablation-Elektrospray-Ionisation (LAESI), 4 durchgeführt, 5 und flüssigen Mikro-junction-Oberfläche Probenahmesonde (LMJ-SSP). 6 In MALDI und SIMS, müssen die Proben physikalisch aus der Probe entfernt werden, und müssen flach und dünn, wie sie im Hochvakuum analysiert. MALDI erfordert Beschichtung der Probe mit einer Strahlung absorbierenden Matrix, das Hinzufügen einer zusätzlichen und umständlich Schritt zur Probenvorbereitung. SIMShat die höchste laterale Auflösung, aber Beschuss mit hochenergetischen Teilchen verursacht umfangreiche molekulare Fragmentierung. Deshalb füllen MSI durch Umgebungslicht Methoden eine Nische, wo weiche Analyse mit minimaler Probenvorbereitung ist wünschenswert. Doch bis heute werden alle Methoden noch durch das Erfordernis der flachen Probe Flächen begrenzt.
DESI verwendet eine pneumatisch unterstützte aufgeladen Lösungsmittel Spray an der Probenoberfläche gerichtet zu desorbieren und zu ionisieren Analyten. 7 Das Arbeitsmodell für die Desorption und anschließende Ionisation durch DESI als "Tropfen Pick-up-Modell" bekannt ist. 8-10 Die geladenen primären Tröpfchen hergestellt von der DESI Sonde mit der Oberfläche kollidiert, Benetzung und Ausbildung einer Dünnschicht, in die der Analyt durch eine Fest-Flüssig-microextraction Mechanismus 8 Nachfolgende Tröpfchenkollisionen ergeben Impulsübertragung und Start des zweiten Tröpfchen, die das Material von der Oberfläche entnommen wird aufgelöst . 9,10 Letztlich GasPhase Ionen sind vermutlich durch ESI Fortsätze nach dem Ionenverdampfung, Ladung Rückstand Modelle oder andere Modelle, 11 hergestellt werden, wobei der genaue Ionenbildung Verfahren DESI erst noch zu experimentell bewiesen. 12 DESI Empfindlichkeit ist stark abhängig von der Löslichkeit der Analyt in dem Solvens, wie Desorption beruht auf der lokalisierten microextraction. 13
In Verbindung mit einem Software-gesteuerten Probentisch verwendet, wird die Probe mit unidirektional Spur Schrittmotors unter der DESI Ionisationselektrode abgetastet und durch den Zeitbereich, m / z Informationen mit der chemischen Spezies räumliche Verteilung (Fig. 1) korreliert. Seit dem ersten proof of principle DESI-MSI Experiment von Van Berkel und Kertesz im Jahr 2006 berichtet, hat 14 die Technik deutlich gereift 15 mit gemeldeten Anwendungen in der Analyse von Lipiden, 3,16 Drogenmetaboliten 17,18 disease Biomarker, 19 Hirngewebe, 3,18,20 Lungengewebe, 18 Nierengewebe, 18 Hodengewebe, 18 Nebennieren, 17 Dünnschichtchromatographieplatten, 21 und Algen Oberflächen. 22. Die Routine Auflösung von Bildern von DESI-MSI erhaltene 100-200 um, die letztlich durch die wirksame Fläche durch das Spray extrahiert wird bestimmt, sondern Auflösungen so niedrig wie 40 um berichtet worden. 23-25 Solche Auflösung und einfache Analyse macht DESI-MSI geeignet für die schnelle und einfache Analyse von biologischen Gewebeproben mit Oberflächen im Bereich 0,5-5 cm 2, so dass der Erwerb von wertvollen Geodaten besser zu verstehen biologischen Prozessen 26. Hier wird als ein Beispiel für eine typische DESI-MSI-Anwendung, überprüfen wir die Einzelheiten des Verfahrens für die Durchführung einer erfolgreichen Experiment mit bildgebenden von Lipiden im Rattenhirn Gewebe. Die beiden wichtigsten Schritte in dem Protokoll sind dieGewebepräparation 27 und DESI Optimierung der Ionenquelle, wie unten beschrieben.
Die Optimierung der DESI Quellgeometrie ist entscheidend für eine erfolgreiche MSI Experimente. Die mehreren Variablen, die zur Ausrichtung des Systems unmittelbar auf Empfindlichkeit und Auflösung. Wenn während der Optimierung, hat der Experimentator Schwierigkeiten bei der Beschaffung Signal, empfehlen wir die Verwendung rot Sharpie Stelle auf der Folie als Maßstab gezeichnet; der Farbstoff Rhodamin 6G, m / z 443, erzeugt ein starkes Signal in der positiven Ionen-Modus und kann verwendet werden für anfängliche O…
The authors have nothing to disclose.
Diese Arbeit wird durch ARRA NSF MRI Instrument Development Grant # 0923179 zu FMF unterstützt. Wir danken Aqua Asberry, Lab-Koordinator für die Parker H. Petit Institut für Bioengineering und Biowissenschaften Histologie Kern, für die Unterstützung bei Gewebe Schnitte.
Reagents | |||
Tissue-Tek O.C.T. Compound | Sakura-Finetek | 4583 | http://www.sakuraeu.com/products/showitem.asp?cat=11&subcat=48 |
Acetonitrile | EMD | AX0156-6 | OmniSolv, LC-MS Grade |
Acetic Acid | Sigma Aldrich | 695092-500 ml | |
Equipment | |||
Cryostat microtome | Thermo Scientific | CryoStar* NX70 | Any available microtome can be used for tissue sectioning http://www.thermoscientific.com/ecomm/servlet/productsdetail?productId=13958375&groupType=PRODUCT&searchType=0&storeId=11152&from=search&ca=cryostar |
Omni Spray;DESI Spray Head | Prosolia Inc. | Can also use the 2-D Omni Spray; Source kit instead of assembling components of imaging experiment http://www.prosolia.com/sources.php | |
High Voltage Power Supply | Stanford Research Systems, Inc. | PS350/5000V-25W | http://www.thinksrs.com/products/PS300.htm |
Rope heater, RTD, controller | Omega | http://www.omega.com/toc_asp/subsectionSC.asp?subsection=M02&book=Heaters | |
Labview | National Instruments | Version 7.1 | |
Translational stage | Prior Scientific | Optiscan II | http://www.prior.com/productinfo_auto_motorized_optiscan.html |
AccuTOF Mass Spectrometer | JEOL | JMS-T100LC | Can use any mass spectrometer equipped with an extended capillary atmospheric pressure interface |