Methode voor het verkrijgen van Primary eierstokkankercellen Van Solid Exemplaren
Summary
Deze studie beschrijft een gedetailleerde methode voor de isolatie en karakterisering van primaire eierstokkanker cellen van vaste klinische monsters. Eierstokkanker klinische monsters worden onderworpen aan enzymatische vertering om levensvatbare, fibroblast gratis ovariumcarcinoom (EOC) cellen zeer geschikt voor verdere toepassingen te verkrijgen.
Abstract
Betrouwbare instrumenten voor het onderzoeken van eierstokkanker initiatie en progressie zijn dringend nodig. Hoewel het gebruik van eierstokkanker cellijnen een waardevol hulpmiddel voor het begrijpen van eierstokkanker, het gebruik ervan heeft vele beperkingen. Deze omvatten het gebrek aan heterogeniteit en de overvloed aan genetische veranderingen geassocieerd met uitgebreide in vitro passage. Hier beschrijven we een werkwijze die zorgt voor een snelle vaststelling van primaire eierstokkanker cellen vormen vaste klinische monsters verzameld op het moment van de operatie. De methode worden klinische specimens enzymatische digestie gedurende 30 minuten. De geïsoleerde celsuspensie wordt toegestaan om te groeien en kan worden gebruikt voor stroomafwaartse toepassing waaronder drug discovery. Het voordeel van primaire eierstokkanker cellijnen vastgesteld eierstokkanker cellijnen is dat ze representatief zijn voor de oorspronkelijke specifieke klinische monsters die afkomstig zijn van en kunnen worden afgeleid van verschillende locaties of primary of uitgezaaide eierstokkanker.
Introduction
Ondanks de relatief lage incidentie, eierstokkanker is de dodelijkste van de gynaecologische aandoeningen en de vijfde belangrijkste oorzaak van sterfgevallen door kanker onder vrouwen 1,2. Dit is voornamelijk te wijten aan het gebrek aan betrouwbare instrumenten en modellen die trouw recapituleren de initiatie en progressie van de ziekte 3. De meeste van onze huidige kennis over eierstokkanker is mogelijk door het gebruik van geïmmortaliseerde ovariële oppervlak epitheelcellen (IOSEs), eierstokkanker cellijnen en primaire eierstokkanker cellen gewonnen uit ascitisvloeistof 4-7. Helaas is het gebruik ervan heeft verschillende beperkingen waaronder een aantal genetische en fenotypische veranderingen in verband met immortalisatie proces of in vitro passages en de heterogeniteit van de bevolking voortvloeien uit ascitisvloeistof bereiding.
Daarom primaire eierstokkanker cellen afkomstig van herkenbare en specifieke stevige exemplaren van eierstokkanker vertegenwoordigen een unique hulpmiddel voor het bestuderen van de eierstokken progressie van kanker.
De belangrijkste moeilijkheden bij het verkrijgen van deze kwaadaardige cellen zijn te wijten aan een overmatige groei van stromale cellen of fibroblasten, samen met het verlies van levensvatbaarheid en voortijdige gebrek aan proliferatieve capaciteit in de cultuur van deze EOC cellen. Verschillende methoden om eencellige suspensies Om vanaf solide tumoren bestaat, door mechanische middelen of enzymatische dissociatie, maar bepaalde technieken leveren een grotere hoeveelheid van de gewenste uitkomst 8. Hier laten we zien dat enzymatische digestie met dispase II resulteert in een effectief herstel van levensvatbare,-fibroblast gratis EOC cellen. De aldus verkregen EOC culturen zeer gevoelig voor genetische manipulatie en zijn ook bruikbaar in drug tests; die EOC culturen zijn geschikt voor vele verdere toepassingen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Een beter begrip van eierstokkanker etiologie en ontwikkeling is cruciaal voor het verbeteren van de uitkomst van de vrouwen die door deze verwoestende ziekte. In deze context is het gebruik van gevestigde en "commercieel verkrijgbaar" eierstokkanker cellijn ongetwijfeld enorm nuttig. Echter, vandaag weten we dat kanker cellijnen zijn niet representatief voor de menselijke tumor ze afkomstig zijn uit in vele aspecten, waaronder het gebrek aan heterogeniteit 9,10.
Hier me…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We zouden graag de medewerkers van de Tissue Procurement Facility van de Universiteit van Minnesota bedanken voor hulp met de patiënt weefselmonsters collectie. Dit werk werd ondersteund door het Ministerie van Defensie eierstokkanker Research Program (OCRP) OC093424 naar MB, door Randy Shaver Kankeronderzoek en de communautaire Fonds MB, door de Minnesota eierstokkanker Alliance MB en door de Gynaecologische Oncologie Departementale fonds MB. De financiers hadden geen rol in onderzoeksopzet, gegevensverzameling en-analyse, besluit tot publicatie of voorbereiding van het manuscript.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| REAGENTS: | |||
| 1X PBS, sterile | Invitrogen | 14190-144 | |
| Screw lid, polypropylene specimen container, sterile (Thermoscientific) | Thermoscientific | 02 1090 | |
| DMEM medium, sterile | Invitrogen | 11995-065 | |
| Fetal bovine serum, sterile | Thermo Scientific Hyclone | SH30396.03 | |
| 100x penicillin-streptomycin, liquid (Invitrogen) | Invitrogen | 15140-122 | |
| Dispase II, sterile (Roche) | Roche | 04942 078 001 | |
| Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile | Fisher Scientific | forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D | |
| Small dissecting scissors, sterile | Fisher Scientific | 08-945 | |
| 15 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon) | BD, Falcon | 352097 | |
| 50 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon) | BD, Falcon | 352027 | |
| 10 ml serological pipette, sterile | Corning | 13-678-11E | |
| 6 ml syringe plunger, sterile | Tyco Healthcare | 8881516911 | |
| Nylon filter (70 μm ) cell strainer, sterile (BD Falcon) | BD Falcon | 352350 | |
| 5-cm Petri dish, sterile | Corning | 430166 | |
| 10-cm Petri dish, sterile | Corning | 430167 |
Referências
- Kurman, R. J., Visvanathan, K., Roden, R., Wu, T. C., Ie M, S. h. i. h. Early detection and treatment of ovarian cancer: shifting from early stage to minimal volume of disease based on a new model of carcinogenesis. Am. J. Obstet. Gynecol. 198 (4), 351-356 (2008).
- Kuhn, E., Kurman, R. J., Shih, I. M. Ovarian Cancer Is an Imported Disease: Fact or Fiction. Curr. Obstet. Gynecol. Rep. 1 (1), 1-9 (2012).
- Sarojini, S., et al. Early detection biomarkers for ovarian. J. Oncol. , (2012).
- Shepherd, T. G., Theriault, B. L., Campbell, E. J. Nachtigal M.W. Primary culture of ovarian surface epithelial cells and ascites-derived ovarian cancer cells from patients. Nat. Protoc. 1 (6), 2643-2649 (2006).
- Tsao, S. W., et al. Characterization of human ovarian surface epithelial cells immortalized by human papilloma viral oncogenes (HPV-E6E7 ORFs). Exp. Cell. Res. 218 (2), 499-507 (1995).
- Auersperg, N., Maines-Bandiera, S. L., Dyck, H. G., Kruk, P. A. Characterization of cultured human ovarian surface epithelial cells: phenotypic plasticity and premalignant changes. Lab. Invest. 71 (4), 510-518 (1994).
- Brewer, M., et al. In vitro model of normal, immortalized ovarian surface epithelial and ovarian cancer cells for chemoprevention of ovarian cancer. Gynecol. Oncol. 98 (2), 182-192 (2005).
- Sueblinvong, T., et al. Establishment, characterization and downstream application of primary ovarian cancer cells derived from solid tumors. PLoS One. 7 (11), (2012).
- Rockwell, S. In vivo-in vitro tumour cell lines: characteristics and limitations as models for human cancer. Br. J. Cancer Suppl. 41 (4), 118-122 (1980).
- Wong, C., Chen, S. The development, application and limitations of breast cancer cell lines to study tamoxifen and aromatase inhibitor resistance. J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 131 (3-5), 83-92 (2012).
