Verfahren zur Gewinnung von Primäreierstockkrebszellen von Solid Proben
Summary
Diese Studie beschreibt eine detaillierte Methode zur Isolierung und Charakterisierung von primären Eierstockkrebszellen aus soliden klinischen Proben. Eierstockkrebs klinischen Proben werden enzymatische Verdauung unterzogen, um lebensfähig, Fibroblasten frei epithelialen Eierstockkrebs (EOC) Zellen sehr gut für Downstream-Anwendungen zu erhalten.
Abstract
Zuverlässige Werkzeuge für die Untersuchung von Eierstockkrebs Initiierung und Progression sind dringend erforderlich. Während die Verwendung von Eierstock-Krebszelllinien bleibt ein wertvolles Werkzeug für das Verständnis von Eierstock-Krebs hat ihr Einsatz viele Einschränkungen. Dazu gehören der Mangel an Heterogenität und die Fülle von genetischen Veränderungen mit erweiterten In-vitro-Passage verbunden. Hier beschreiben wir eine Methode, die für eine schnelle Einrichtung der primären Eierstockkrebszellen bilden können feste klinischen Proben zum Zeitpunkt der Operation gesammelt. Das Verfahren besteht aus der klinischen Proben zur enzymatischen Verdau für 30 min. Die isolierten Zellsuspension wird erlaubt, zu wachsen und kann für Folgeanwendungen einschließlich Arzneimittel-Screening verwendet werden. Der Vorteil der primären Eierstockkrebszelllinien gegenüber etablierten Eierstock-Krebszelllinien ist, dass sie repräsentativ für die ursprünglichen spezifischen klinischen Proben sie von abgeleitet und kann von verschiedenen Stellen abgeleitet werden, ob es primary oder metastasierenden Eierstockkrebs.
Introduction
Trotz seiner relativ geringen Inzidenz, Eierstockkrebs ist die tödlichste der gynäkologischen Krankheiten und die fünfthäufigste Ursache für Todesfälle durch Krebs bei Frauen 1,2. Dies ist vor allem auf den Mangel an zuverlässigen Tools und Modelle, die treu zu rekapitulieren die Initiierung und Progression der Erkrankung 3. Die meisten unserer heutigen Wissen über Eierstockkrebs wurde durch die Verwendung von Eierstock verewigt Oberfläche Epithelzellen (IOSen), Eierstockkrebs-Zelllinien und primären Eierstockkrebszellen aus Aszites 4-7 gewonnen möglich. Leider hat die Verwendung mehrere Einschränkungen, einschließlich einer Reihe von genetischen und phänotypischen Änderungen Immortalisierung Verfahren oder in vitro-Durchgänge zugeordnet ist, und die Heterogenität der Population von Aszitesflüssigkeit Herstellung resultieren.
Daher primären Eierstockkrebszellen aus identifizierbaren und spezifischen festen Proben von Eierstockkrebs abgeleitet sind eine unique Werkzeug für die Untersuchung Eierstockkrebs Progression.
Die Hauptschwierigkeiten in den Erhalt dieser bösartigen Zellen beteiligt sind auf ein übermäßiges Wachstum von Stromazellen oder Fibroblasten mit Verlust der Lebensfähigkeit und vorzeitige fehlende Proliferationskapazität in der Kultur dieser Zellen EOC. Verschiedene Methoden zur Einzelzellsuspensionen aus soliden Tumoren zu erstellen derzeit existiert, durch mechanische Mittel oder enzymatische Dissoziation jedoch bestimmte Techniken ergeben eine größere Menge des bevorzugten Ergebnis 8. Hier zeigen wir, dass die enzymatische Verdauung mit Dispase II führt zu einer effektiven Wiederherstellung lebensfähiger, Fibroblasten frei EOC-Zellen. Die so erhaltenen Kulturen EOC sind sehr anfällig für genetische Manipulation und sind in Arzneimittel-Screening-Tests, was anzeigt, dass diese EOC Kulturen sind für viele Anwendungen abwärts.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ein besseres Verständnis der Ätiologie und Eierstockkrebs-Entwicklung ist entscheidend für die Verbesserung der Ergebnisse der Frauen, die von dieser schweren Krankheit betroffen. In diesem Zusammenhang ist der Einsatz von etablierten und "handelsüblichen" Eierstockkrebs-Zelllinie ist zweifellos enorm nützlich. Doch heute wissen wir, dass Krebszelllinien sind nicht repräsentativ für den menschlichen Tumor sie aus in viele Aspekte, einschließlich der Mangel an Heterogenität 9,10 entstanden. …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir möchten uns für die Unterstützung bei Patienten Gewebeproben Sammlung danke den Mitarbeitern des Tissue Beschaffungsmöglichkeiten der Universität von Minnesota. Diese Arbeit wurde durch das Department of Defense Eierstockkrebs-Forschungsprogramm (OCRP) OC093424 zu MB, die von der Randy Shaver Krebsforschung und Gemeinschaftsfonds zur MB, von der Minnesota-Eierstockkrebs-Allianz zu MB und durch die Gynäkologische Onkologie Abteilungs Fonds MB. Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung zur Veröffentlichung oder der Zubereitung des Manuskripts.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| REAGENTS: | |||
| 1X PBS, sterile | Invitrogen | 14190-144 | |
| Screw lid, polypropylene specimen container, sterile (Thermoscientific) | Thermoscientific | 02 1090 | |
| DMEM medium, sterile | Invitrogen | 11995-065 | |
| Fetal bovine serum, sterile | Thermo Scientific Hyclone | SH30396.03 | |
| 100x penicillin-streptomycin, liquid (Invitrogen) | Invitrogen | 15140-122 | |
| Dispase II, sterile (Roche) | Roche | 04942 078 001 | |
| Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile | Fisher Scientific | forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D | |
| Small dissecting scissors, sterile | Fisher Scientific | 08-945 | |
| 15 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon) | BD, Falcon | 352097 | |
| 50 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon) | BD, Falcon | 352027 | |
| 10 ml serological pipette, sterile | Corning | 13-678-11E | |
| 6 ml syringe plunger, sterile | Tyco Healthcare | 8881516911 | |
| Nylon filter (70 μm ) cell strainer, sterile (BD Falcon) | BD Falcon | 352350 | |
| 5-cm Petri dish, sterile | Corning | 430166 | |
| 10-cm Petri dish, sterile | Corning | 430167 |
Referências
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