Summary

Détection simultanée de c-Fos Activation de Sites de récompense dopaminergique mésolimbique et mésocortical Après Naive sucre et de graisse Ingestion chez le rat

Published: August 24, 2016
doi:

Summary

Le but de cette étude est d'identifier les réseaux cérébraux distribués liés à la récompense en délimitant une technique immunohistochimique fiable en utilisant l'activation de c-fos cellulaire pour mesurer les changements simultanés dans les voies de la dopamine et sites terminaux après nouvelle ingestion de gras et de sucre chez les rats.

Abstract

Cette étude utilise l'activation de c-fos cellulaire pour évaluer les effets de l'ingestion de nouvelles graisses et de sucre sur le cerveau de la dopamine (DA) voies chez les rats. Apports de sucres et de graisses sont médiés par leurs attractions innées ainsi que les préférences apprises. dopamine du cerveau, en particulier méso-limbique et projections méso-corticale de l'aire tegmentale ventrale (VTA), a été impliqué dans ces deux réponses désappris et apprises. Le concept de réseaux cérébraux distribués, dans lequel plusieurs sites et systèmes émetteurs / peptides interagissent, a été proposé à la médiation apport alimentaire acceptable, mais il y a peu de preuves démontrant empiriquement ces actions. Ainsi, la consommation de sucre provoque immunoréactivité DA libération et augmente c-fos-like (FLI) à partir de chaque zones de projection VTA DA, y compris le noyau accumbens (NAC), amygdale (AMY) et médiale cortex préfrontal (CPFm), ainsi que le striatum dorsal. En outre, l'administration centrale des antagonistes sélectifs des récepteurs de DA dans ces sitess différentiellement réduire l'acquisition et l'expression des préférences gustatives conditionnées provoquées par des sucres ou de graisses. Une approche permettant de déterminer si ces sites ont interagi en tant que réseau de cerveau distribué en réponse à sucre ou la consommation de graisses serait simultanée évaluer si le VTA et ses principales zones de projection mesotelencephalic de DA (prélimbique et infralimbic CPFm, noyau et l'enveloppe du NAc, basolatéral et le centre-cortico-médial AMY), ainsi que le striatum dorsal afficherait coordonné et activation FLI simultanée après orale, l'apport inconditionnée d'huile de maïs (3,5%), le glucose (8%), le fructose (8%) et la saccharine (0,2 %) solutions. Cette approche est une première étape réussie dans l'identification de la possibilité d'utiliser l'activation de c-fos cellulaire simultanément sur les sites du cerveau pertinents pour étudier l'apprentissage récompense liée à l'ingestion d'aliments agréables au goût chez les rongeurs.

Introduction

Cerveau dopamine (DA) a été impliquée dans les réponses centrales à la consommation de sucres par un goût agréable proposé hédonique 1,2, 3 et l' habitude à base de 4,5 mécanismes d'action liée à l' effort. La voie DA primaire impliquée dans ces effets provient de l'aire tegmentale ventrale (VTA), et les projets vers le noyau accumbens de noyau (NAC) et la coquille, l'amygdale basolatérale et du centre-cortico-médial (AMY), et le prélimbique et médial infralimbic cortex préfrontal (CPFm) (voir les commentaires 6,7). Le VTA a été impliquée dans la prise de saccharose 8,9, et la libération de DA est observé la consommation de sucre suivant dans le NAC 10-15, AMY 16,17 et CPFm 18-20. La grosse prise stimule également DA NAC release 21, et un autre DA riche zone de projection du striatum dorsal (caudé-putamen) a également été associée à DA médiée alimentation 22,23. Kelley 24-27 a proposé que ces projets multipleszones d'ions de ce système DA médiée formé un réseau intégré et interactif cerveau distribués par le biais d' interconnexions étendues et intimes 28-34.

En plus de la capacité de DA D1 et D2 antagonistes des récepteurs pour réduire la consommation de sucres et de matières grasses 35-37 38-40, la signalisation DA a également été impliquée dans la médiation de la capacité des sucres et des graisses pour produire des préférences gustatives conditionnées (PCP) 41- 46. Microinjections d'un antagoniste des récepteurs de DA D1 dans le NAC, AMY ou CPFm 47-49 éliminent l' acquisition de la PCP induite par le glucose intragastrique. Considérant que microinjections de DA soit D1 ou D2 antagonistes des récepteurs dans le CPFm élimine l' acquisition de fructose-PCP 50, l'acquisition et l' expression de fructose-PCP sont différentiellement bloqués par les antagonistes de DA dans le CNA et AMY 51,52.

La technique 53,54 c-fos a été employée pour étudier activatio neuronaln induite par une consommation acceptable et de l'activation neuronale. Le terme «activation de c-fos" sera utilisé tout au long du manuscrit, et est défini sur le plan opérationnel par une augmentation de la transcription de c-Fos pendant la dépolarisation neuronale. L' apport de sucrose a augmenté fos-like immunoréactivité (FLI) dans le noyau de AMY central, le VTA ainsi que la coque, mais pas de base, du CNA 55-57. Alors que la consommation de saccharose chez les rats sham-alimentation a augmenté de manière significative FLI dans le AMY et le CNA, mais pas le VTA 58, saccharose ou glucose infusions intragastrique ont augmenté de manière significative FLI dans le CNA et les noyaux centraux et basolatéral de la AMY 59,60. Addition répétée de saccharose à l' accès chow prévu a augmenté FLI dans le CPFm ainsi que la coque du CNA et le noyau 61. Un paradigme concentration de rétrogradage sucrose a révélé que les plus grands FLI augmentations se sont produites dans la AMY basolatérale et NAC, mais pas le VTA 62. Après conditionnement, extinction de rewa naturelle liée au sucrerd comportements ont augmenté FLI dans le AMY basolatéral et le CNA 63. En outre, l' appariement la disponibilité du sucre à un ton abouti à la tonalité augmentant ensuite les niveaux FLI dans le AMY basolatérale 64. Un apport élevé en matières grasses a également augmenté FLI dans les sites du CNA et MPFC 65-67.

La plupart des études citées précédemment examiné le sucre et les effets de graisse sur l' activation de c-fos dans des sites uniques qui ne fournissent pas d' informations sur l' identification des réseaux cérébraux distribués liés récompense-24-27. En outre, la plupart des études ont également ne pas délimiter les contributions relatives des sous-régions du CNA (noyau et l'enveloppe), AMY (basolatérale et central-cortico-médial) et CPFm (prélimbique et infralimbic) qui pourraient être examinées par le avantage d'excellent, seule cellule de résolution spatiale dans c-Fos cartographie 68. Notre laboratoire 69 a récemment utilisé l' activation de c-fos et les modifications mesurées simultanément dans la voie VTA DA et son proprojec- zones (NAC, AMY et MPFC) après nouvelle ingestion de graisses et de sucres chez le rat. La présente étude décrit les étapes procédurales et méthodologiques pour analyser simultanément si l'exposition aiguë à six solutions différentes (huile de maïs, le glucose, le fructose, la saccharine, l'eau et un contrôle d'émulsion de graisse) serait différentiellement activer FLI dans les sous-régions du CNA, AMY, CPFm ainsi que le striatum dorsal. Cette détection simultanée des différences a permis la confirmation des effets significatifs sur FLI dans chaque site et déterminer si les changements dans un site particulier en corrélation avec les changements dans les sites connexes, fournissant ainsi un soutien pour un réseau de cerveau distribué 24-27. Ces procédures testées si le VTA, le prélimbique et infralimbic CPFm, le noyau et l'enveloppe du CNA, et AMY basolatéral et le centre-cortico-médial), ainsi que le striatum dorsal afficherait coordonné et activation FLI simultanée après orale, l'apport inconditionnée de glucose (8%), le fructose (8%), huile de maïs (3,5%) et de la saccharine (0,2%), des solutions.

Protocol

Ces protocoles expérimentaux ont été approuvés par le Comité soin et l'utilisation des animaux institutionnels attestant que tous les sujets et les procédures sont en conformité avec les National Institutes of Health Guide pour les soins et l'utilisation des animaux de laboratoire. 1. Sujets Achat et / ou de la race des rats mâles Sprague-Dawley (260-300 g). rats Maison individuellement dans des cages grillagées. Maintenir les sur une 12:12 h cycle lumière / obscurité avec…

Representative Results

Tous les résultats représentatifs décrits ci – dessous ont été publiés précédemment 69, et sont présentés de nouveau ici pour soutenir "preuve de concept" en indiquant l'efficacité de la technique. Apports Solution Des différences significatives dans les apports de la saccharine de base ont été observées au cours des quatre premiers jours pour tous les animaux (F …

Discussion

Le but de l'étude était de déterminer si la source (VTA) et des objectifs de projection de prosencéphale (NAC, AMY, CPFm) des neurones liés à la récompense-DA ont été simultanément activées après nouvelle ingestion de gras et de sucre chez les rats en utilisant la technique de c-fos cellulaire . La présente étude est une description détaillée des protocoles d'une étude publiée précédemment 69. Il a émis l' hypothèse que l'ADV, ses principales zones de projection à l'…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Merci à Diana Icaza-Culaki, Cristal Sampson et Theologia Karagiorgis pour leur travail acharné sur ce projet.

Materials

Equipment
Sprague-Dawley rats Charles River Laboratories CD-1
Wire Mesh Cages Lab Products, Seaford, DE 30-Cage rack
Rat Chow PMI Nutrition International 5001
Taut Metal Spring Lab Products, Seaford, DE n/a
Rat Weighing Scale Fisher Scientific Company n/a
Nalgene Centrifuge Tubes Lab Products, Seaford, DE 10-0501
Rubber Stopper Lab Products, Seaford, DE n/a
Metal Sippers Lab Products, Seaford, DE n/a
Saccharin Sigma Chemical Co 82385-42-0
Kool-Aid, Cherry Kool-Aid Commerical
Kool-Aid, Grape Kool-Aid Commercial
Fructose Sigma Chemical Co F0127
Glucose Sigma Chemical Co G8270
Corn Oil Mazzola Commerical
Xanthan Gum Sigma Chemical Co 11138-66-2
Sliding Microtome Microm International n/a
Neurolucida Camera MBF Bioscience Software application
Gelatin-coated Slides Fisher Scientific Company 12-550-343
Cover glass Fisher Scientific Company 12-545-M
Golden Nylon Brushes Loew-Cornell  2037
Natural Hair Sable  Loew-Cornell  2022
24 Well Plates Fisher Scientific 3527
6 Well Plates Fisher Scientific 3506
1L Pyrex bottles Fisher Scientific 1395-1L
Tissue insert (tissue strainer) Fisher Scientific 7200214
Eagle pipettes  World Precision Instruments E10 for 1-10ul 
Eagle pipettes  World Precision Instruments E100 for 20-100ul
Eagle pipettes  World Precision Instruments E200 for 50-200ul
Eagle pipettes  World Precision Instruments E1000 for 100-1000ul
Eagle pipettes  World Precision Instruments E5000 for 1000-5000ul 
Universal Tips .1-10ul World Precision Instruments 500192
Universal Tips 5-200ul World Precision Instruments 500194
Universal Tips 500-5000ul World Precision Instruments 500198
Blade Vibroslice 100 World Precision Instruments BLADE
DPX Mounting Medium  Electron Microscopy  13510
15mL centrifuge tubes Biologix Research Co. 10-0501
Slide Boxes Biologix Research Co. 41-6100
Orbital Shaker  Madell Corporation   ZD-9556
weigh boats  Fisher Scientific 02-202-100
5mL disposable pipettes Fisher Scientific 13-711-5AM
Stereo Investigator Software Micro Bright Field Software application
Name Company Catalog number Comments
Reagents
Paraformaldehyde Granular Fisher Scientific 19210
NaCl Fisher Scientific S271-1
Sodium Phophate Monobasic Fisher Scientific S468-500
Sodium Phosphate Diphasic Fisher Scientific BP332-500
Hydrogen Peroxide  Fisher Scientific H324-500
SafeClear II  Fisher Scientific 23-044-192
Methanol  Fisher Scientific A412-1
Normal Goat Serum Vector S-1000
Biotinylated Anti-Rabbit IgG (H+L) Vector BA-1000
ABC Kit Peroxidase Standard Vector PK-4000
Anti-cFos (Ab-5) Rabbit EMD chem/Cal Biochem PC38
Triton X 100 SigmaAldrich X-100
3,3' diaminobenzidine tetra hydrochloride  SigmaAldrich D5905
Sodium Hydroxide SigmaAldrich 5881
Primary TH anti body EMD Millipore AB152
Euthosol Virbac AH

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Dela Cruz, J. A. D., Coke, T., Bodnar, R. J. Simultaneous Detection of c-Fos Activation from Mesolimbic and Mesocortical Dopamine Reward Sites Following Naive Sugar and Fat Ingestion in Rats. J. Vis. Exp. (114), e53897, doi:10.3791/53897 (2016).

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