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Artigo de método

Detecção simultânea de c-Fos Ativação de mesolímbico e mesocortical dopamina Sites Recompensa Após Naive açúcar e gordura ingestão em ratos

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DOI:

10.3791/53897

⸱

24 de agosto de 2016

 ,  , 

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

O objetivo deste estudo é identificar redes cerebrais distribuídos relacionadas com a recompensa por delinear uma técnica de imuno confiável usando a ativação de c-fos celular para medir as mudanças simultâneas nos caminhos da dopamina e locais de terminal após a novela ingestão de gordura e açúcar em ratos.

Resumo

Este estudo usa a ativação c-fos celular para avaliar os efeitos do romance ingestão de gordura e açúcar em dopamina no cérebro (DA) vias em ratos. Ingestão de açúcares e gorduras são mediadas por suas atrações inatas, bem como as preferências aprendidas. dopamina do cérebro, especialmente meso-límbico e projecções a partir de meso-cortical a área tegmental ventral (VTA), tem sido implicada em ambas estas respostas ignorantes e aprendidas. O conceito de redes cerebrais distribuídos, em que vários sites e sistemas emissor / peptídeos interagem, foi proposta para mediar a ingestão de alimentos saborosos, mas não há evidência limitada demonstrando empiricamente tais ações. Assim, a ingestão de açúcar provoca imunorreatividade DA libertação e aumenta c-fos-like (FLI) a partir de zonas de projeção VTA DA individuais, incluindo o núcleo accumbens (NAC), amígdala (AMY) e medial córtex pré-frontal (mPFC), bem como o striatum dorsal. Além disso, administração central dos antagonistas selectivos do receptor de DA para estes locals diferencialmente reduzir aquisição e expressão de preferências de sabor condicionado desencadeados pela açúcares ou gorduras. Uma abordagem que permitam determinar se esses locais interagiram como uma rede do cérebro distribuídos em resposta ao açúcar ou gordura ingerida seria simultânea avaliar se o VTA e seus principais zonas de projeção mesotelencephalic DA (prelimbic e infralimbic mPFC, núcleo e concha do NAC basolateral e-centro-córtico medial AMY), bem como o corpo estriado dorsal exibiria coordenado e activação FLI simultânea após a ingestão oral, não condicionado de óleo de milho (3,5%), glucose (8%), frutose (8%) e a sacarina (0,2 soluções%). Esta abordagem é um primeiro passo bem sucedido em identificar a viabilidade do uso de ativação c-fos celular simultaneamente em todos os locais do cérebro relevantes para estudar a aprendizagem relacionadas com a recompensa na ingesta de alimentos em roedores.

Introdução

Cérebro de dopamina (DA) tem sido implicado em respostas centrais para ingestão de açúcares palatáveis ​​através proposta hedônica 1,2, 3 e hábito à base de 4,5 mecanismos de ação relacionados com o esforço. A via DA primária implicados nesses efeitos origina na área tegmental ventral (VTA) e projetos ao accumbens (NAC) de núcleo e concha, a amígdala basolateral e centro-córtico-medial (AMY), núcleo eo prelimbic e medial infralimbic córtex pré-frontal (mPFC) (ver comentários 6,7). O VTA tem sido implicado na ingestão de sacarose 8,9, e liberação DA é observada após a ingestão de açúcar no NAC 10-15,....

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Protocolo

Estes protocolos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso Institucional animal certificando que todos os assuntos e procedimentos estão em conformidade com o National Institutes of Health Guide para Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.

1. Temas

  1. Compra e / ou do sexo masculino da raça Sprague-Dawley (260-300 g).
  2. ratos Casa individualmente em gaiolas de malha de arame. Mantê-los numa 12:12 h ciclo claro / escuro com ração e água disponíveis ad libitum.
  3. Atribuir os tamanhos das amostras apropriadas (por exemplo, N ≈ 6-8) aleatoriamente em grupos.

2. Equipament....

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Resultados

Todos os resultados representativos descritos abaixo foram publicados anteriormente 69, e são re-apresentado aqui para apoiar "prova de conceito" na indicação da eficácia da técnica.

solução Intakes
diferenças significativas na ingestão de sacarina de base foram observados durante os primeiros quatro dias para todos os animais (F (3,108) = 57,27, p <0,001) com entradas (Dia 1: 1,.......

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Discussão

O objetivo do estudo foi determinar se a fonte (VTA) e as metas de projeção do cérebro anterior (NAC, Amy, mPFC) de Da neurônios relacionados com a recompensa foram ativados simultaneamente após a novela ingestão de gordura e açúcar em ratos utilizando a técnica de c-fos celular . O presente estudo é uma descrição detalhada dos protocolos de um estudo publicado anteriormente 69. Postula-se que o VTA, suas principais zonas de projeção para o prelimbic e infralimbic mPFC, o núcleo ea casca do NAC e do AMY basol.......

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Divulgações

Os autores não têm interesses financeiros concorrentes.

Agradecimentos

Graças a Diana Icaza-Culaki, Cristal Sampson e Theologia Karagiorgis pelo seu trabalho árduo neste projeto.

....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Equipment
Sprague-Dawley ratosCharles River LaboratoriesCD-1
arameProdutos de laboratório, Seaford, DERack
ChowPMI Nutrition International5001
Taut Metal SpringLab Products, Seaford, DEn/a
Balança de Pesagem de RatoFisher Scientific Companyn/a
Nalgene Centrifuge TubesLab Products, Seaford, DE10-0501
Rubber StopperLab Products, Seaford, DEn/a
Metal SippersLab Products, Seaford, DEn/a
SacarinaSigma Chemical Co82385-42-0
Kool-Aid, CerejaKool-AidCommerical
Kool-Aid, UvaKool-AidFrutose Comercial
Sigma Chemical CoF0127
GlicoseSigma Chemical CoG8270
Óleo de MilhoMazzolaCommerical
Xanthan GumSigma Chemical Co11138-66-2
Micrótomo DeslizanteMicrom Internationaln/a
MBFBiociência Software de
aplicação Slides revestidos com gelatinaFisher Scientific Company12-550-343
Vidro de coberturaFisher Scientific Company12-545-M
Escovas de Nylon DouradoLoew-Cornell 2037
Cabelo Natural Sable Loew-Cornell 2022
Placas de 24 PoçosFisher Scientific3527
Placas de 6 PoçosFisher Scientific3506
Garrafas de Pyrex de 1 LFisher Scientific1395-1L
Inserção de tecido (peneira de tecido)Pipetas Fisher Scientific7200214
Eagle World Precision InstrumentsE10 para 1-10μ l
Pipetas Eagle World Precision InstrumentsE100 para 20-100μ l
Pipetas Eagle World Precision InstrumentsE200 para 50-200μ l
Pipetas Eagle World Precision InstrumentsE1000 para 100-1000μ l
Pipetas Eagle World Precision InstrumentsE5000 para 1000-5000μ l 
Pontas universais .1-10 μ lInstrumentos de Precisão Mundial500192
Pontas Universais 5-200 μ lInstrumentos de Precisão Mundial500194
Pontas Universais 500-5.000 μ lWorld Precision Instruments500198
Blade Vibroslice 100World Precision InstrumentsBLADE
DPX Meio de Montagem Microscopia eletrônica 13510
Tubos de centrífuga de 15 mlBiologix Research Co.10-0501
Caixas de slidesBiologix Research Co.41-6100
Agitador Orbital Corporação Madell  ZD-9556
pesa barcos Fisher Scientific02-202-100
Pipetas descartáveis de 5 mlFisher Scientific13-711-5AM
Software de Investigador EstéreoMicro Software de Campo Brilhanteapplication
NomeEmpresa<strong>Número de catálogoComentários
Reagentes
Paraformaldeído GranularFisher Scientific19210
NaClFisher ScientificS271-1
Monobásico de Fosfato de SódioFisher ScientificS468-500
Fosfato de Sódio DifásicoFisher ScientificBP332-500
Hidrogênio Peróxido Fisher ScientificH324-500
SafeClear II Fisher Scientific23-044-192
Metanol Fisher ScientificA412-1
Vetor de soro de cabra normalS-1000
Biotinilado Anti-Coelho IgG (H + L)VectorBA-1000
ABC Kit Peroxidase Vetor PadrãoPK-4000
Anti-cFos (Ab-5) CoelhoEMD chem/Cal BiochemPC38
Triton X 100SigmaAldrichX-100
3,3' diaminobenzidina tetra cloridrato SigmaAldrichD5905
SigmaAldrich5881
Anticorpo primário THEMD MilliporeAB152
EuthosolVirbac AH
Gaiolas de malha de de gaiola de 30 ratos Câmera Neurolúcida Hidróxido de sódio

Referências

  1. Koob, G. F. Neural mechanisms of drug reinforcement. Ann. N.Y. Acad. Sci. 654, 171-191 (1992).
  2. Wise, R. A. Role of brain dopamine in food reward. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 361, 1149-1158 (2006).
  3. Salamone, J. D., Correa, M.

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Reimpressões e permissões

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