顕微鏡を用いたひと脂肪組織血管機能評価
Summary
ビデオ顕微鏡システムは、生理学的および薬理学的刺激への反応で分離脂肪細動脈の機能特性を調べるに使用されます。この手法は、肥満人間で異なる脂肪組織ドメインにおける微小血管表現型を確認する使用できます。
Abstract
肥満が代謝と心血管の病気の開発に密接にリンクしている、これらのプロセスを支配するメカニズムについてはほとんど知られています。それはローカルおよび全身、中央/腹部内臓脂肪蓄積との関連で特に脂肪組織から解放 pro 動脈硬化のメディエーターが病原性の血管の変化を促進して心血管疾患があります概念仮説は、脂肪組織の機能不全の結果は、進化し続けます。ここでは、生きているヒトの脂肪のデポから削除そのままの小さな人間の細動脈の血管拡張と血管収縮反応の分析を含むビデオ顕微鏡のユニークな方法をについて説明します。顕微鏡を使用して、薬理学的または生理学的な刺激の体内の条件を模倣する圧力システムを使用して分離された微小血管の機能プロパティを確認します。テクニックは、病態と脂肪組織環境のローカルの血管機能不全に寄与する分子メカニズムの理解を得るための便利な方法です。また、脂肪組織の血管の異常は、全身疾患にリンクされています。肥満者のデポ固有血管反応を調べるためにこの手法を適用した.増加の流れと同じ個体から肥満症治療手術の中に 2 つの異なる脂肪倉庫から分離した脂肪細 (50 350 μ m の内径、長さ 2-3 mm) におけるアセチルコリンの両方に内皮依存性血管拡張反応を検討しました。内臓脂肪から細動脈が皮下のデポから血管と比較して内皮依存性血管拡張反応を示すデモンストレーションを行った。内臓の微小環境の臨床的観察: 全身性疾患メカニズムに内臓脂肪の増加をリンクに関連すると思われる血管内皮機能障害に関連付けられているが示唆されました。ビデオ顕微鏡法は、異なる脂肪質のターミナルから血管表現型を調べるだけでなく、肥満と代謝異常の程度が異なると個人間での調査結果を比較する使用できます。血管反応の臨床的介入の長手方向を調べるメソッドを使用もできます。
Introduction
顕微鏡は、生きているヒトを対象前のヴィヴォから削除小細動脈の血管の機能をみるための便利な方法です。当研究室は、解剖の様々 な脂肪微小血管構築に及ぼす影響を特徴付ける様々 な脂肪組織コンパートメントから小さな血管を重視しています。この手法の主な利点は、血管は人間の体から削除機能が維持され、生検に続く時間に数分以内に容易に調べることができます。生理学的な条件のまねをして着実に経壁圧の生体内での多くの特徴を要約するマイクロ ガラス カニューレを介して腔内空間で管理されます。1,2また、自動エッジ検出ソフトウェアの信頼性の高い顕微鏡の組み立ては分離の内皮依存性および非依存血管拡張と血管収縮能力の質的・量的評価を可能します。物理、薬理学的刺激への応答の生理的評価法を急速にリアルタイムの許可船。3他の微小血管の技術はより時間がかかることし、力変換器により様々 なアゴニストに張力応答を測定する傾向がある線図法などご利用頂けます。
当研究室では、肥満と脂肪組織の異なるドメインの血管系に及ぼす影響に焦点を当て、血管機能障害との関係を調べるための顕微鏡を適用しています。腹部内臓脂肪の蓄積と中央肥満は、アディポサイトカイン生産・代謝異常・ cardiometabolic リスクに最も密接にリンクされています。Pro-動脈硬化のサイトカイン、アデポカイン不全の過剰生産と脂肪組織の機能不全、これらのプロセスに強く関与しているが、特定の規制分子と治療目標のまま主と仮定されています。未発見。4また、局所の脂肪組織レベル、毛細血管の膨張および血流障害では、脂肪組織 pseudohypoxia と代謝不全にリンクされています。心血管疾患脂肪組織の機能不全の結果であるかもしれないこと仮説は進化しています。中央/内臓脂肪過多症、可能性が高いとの関連で特に脂肪からリリース pro 動脈硬化のメディエーター内皮機能障害を促進するためおよび病原性血管変化できる脂肪の血管のローカル マニフェストを使用して検出、方法論が記載。5
分離脂肪細動脈の機能的アセスメント、病態と血管機能不全に貢献する人間の肥満の分子機構の理解を得るための便利な方法です。脂肪のデポ固有の機能不全に寄与するメカニズムを調べるためには、内皮依存性を調べる方法を開発したおよび – 独立した血管拡張、血管に対する様々 な規制の式を評価して対内臓や皮下 (SC) 脂肪組織標本を用いた肥満者肥満手術の時の候補者。
Protocol
Representative Results
Discussion
郭清と脂肪細動脈周囲組織からの分離は、ディテールとプロトコルの技術に細心の注意と時間のかかり、労働集約的なプロセスをすることができます。レーザーマイクロダイ セクション手順細心の技術と平滑筋や内皮細胞の潜在的な損傷を防ぐ特殊な解剖器具細胞、血管の層が必要です。細動脈の壁にも、小さな偶然穿刺は、腔内加圧と失敗した実験の結果を防ぐことができます。また、縫…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、これらの研究と脂肪組織生検を提供するボストン医療センターの外科スタッフに参加するためのボランティアに感謝したいと思います。博士 Gokce は、HL081587、HL114675、および HL126141 の健康 (NIH) の助成金の国立衛生研究所によってサポートされます。博士ファーブは NIH 支え K23 HL135394 を付与します。
Materials
| Chemical Name | |||
| Acetylcholine | Sigma Aldrich | A6625 | |
| Calcium chloride (CaCl2) | Sigma Aldrich | 223506 | |
| D-(+)-Glucose | Sigma Aldrich | G5767 | |
| Endothelin-1 | Sigma Aldrich | E7764 | |
| Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N’,N’-tetra acetic acid (EGTA) | Sigma Aldrich | E3889 | |
| Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA) | Sigma Aldrich | E9884 | |
| HEPES | Sigma Aldrich | H3784 | |
| Nw-nito-L-arginine methyl ester hydrochloride | Sigma Aldrich | N5751 | |
| Magnesium sulfate (MgSO4) | Sigma Aldrich | M7506 | |
| Potassium chloride (KCL) | Sigma Aldrich | P3911 | |
| Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma Aldrich | P5655 | |
| Papaverine | Sigma Aldrich | P3510 | |
| Sodium bicarbonate (NaHCO3 ) | Sigma Aldrich | S6014 | |
| Sodium chloride (NaCl) | Sigma Aldrich | S7653 | |
| Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2Po4) | Sigma Aldrich | S9638 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Forceps | Finescience tools | 15000-08 | |
| Inverted microscope | Zeiss Achromat | ||
| Laboratory tubing | Euro-Pharm | 250100306F999 | |
| Needle/pippette puller | David kopf instruments | 720 | |
| Ophthalmic monofilament nylon suture | Surgical specialties | A7756N | |
| Scissors | Finescience tools | 150000-08 | |
| Vessel Chamber | DMT | VAS v.2.1 |
Referências
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