הטכניקה של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים עבור אינדוקציה של גדילת
Summary
המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד הטכניקה של פולשנית רוחבי אבי העורקים הכיווץ (טק) בעכברים. על ידי חיסול של צנרור ואוורור אשר הכרחיות עבור הליך רגיל בשימוש נפוץ, טק פולשנית ומפשט את תהליך פעיל ומפחית את הלחץ על החיה.
Abstract
התרחבות אבי העורקים רוחבי (טק) בעכברים הוא אחד של טכניקות כירורגיות הנפוץ ביותר עבור חקירה נסיונית של לחץ יתר-induced עזב חדרית היפרטרופיה (LVH) והתקדמות שלה כדי אי ספיקת לב. ברוב המכריע של החקירות שדווחה, הליך זה מבוצע עם צנרור ואוורור של החיה אשר הופך את תובעניים ולגזול ומוסיף הנטל כירורגי לחיה. המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר טכניקה פשוטה של טק פולשנית ללא צנרור ואוורור של עכברים. שלבים קריטיים של הטכניקה מודגשים על מנת להשיג התמותה נמוכה ויעילות גבוהה תוך גרימת LVH.
זכר עכברים C57BL/6 (בן שבוע 10, 25-30 g, n = 60) היו מרדימים עם זריקה אחת בקרום הבטן של תערובת של קטמין חריגות השירותים הווטרינריים. ב נושם באופן ספונטני בעלי חיים לאחר 3-4 מ מ העליון חלקית sternotomy, קטע 6/0 בתפר משי מושחל דרך עינו של מכשיר מצדו היה עבר מתחת לקשת אבי העורקים וקשר על מחט 27-מד קהות. חיות המופעלים המזויפים עברה הכנת כירורגי אותו אך ללא התרחבות אבי העורקים. היעילות של ההליך ב גרימת LVH כתביהם לעליה משמעותית יחס המשקל גוף/לב. יחס זה מתקבל ימים 3, 7, 14, ו- 28 לאחר הניתוח (n = 6-10 בכל קבוצה, בכל נקודת זמן). באמצעות הטכניקה שלנו, LVH נצפית בטק לעומת בעלי החיים המזויפים מיום 7 עד 28 יום. פעיל. ומאחר (מעל 28 ימים) בהירושימה הם שניהם מאוד נמוכה ב- 1.7%.
לסיכום, הטכניקה שלנו חסכונית של טק פולשנית בעכברים נושאת בהירושימה פעיל ואחרי הניתוח נמוך מאוד, יעיל ביותר ב גרימת LVH. זה ומפשט את תהליך פעיל, ומפחיתה את המתח על החיה. זה ניתן בקלות לבצע על-ידי ביצוע השלבים הקריטיים המתוארים פרוטוקול זה.
Introduction
במהלך השנים האחרונות, המחקר של אי ספיקת לב נערכה ב קיימא החיה מודלים1. מודלים בעלי חיים קטנים לעומת מודלים בעלי חיים גדולים של אי ספיקת לב, יש יתרונות פוטנציאליים רבים. לצד העלויות הנמוכות של דיור ואחזקה, מודלים בעלי חיים קטנים נגישים לחוקרים יותר בשל המתקנים הדרושים פחות מורכב2.
העכבר אי ספיקת לב דגמים מציעים את היתרונות אותו כמו הדגמים עכברוש. בנוסף דיור מוזל עד עולה3, העכבר מודלים להפיק תועלת הזמינות של זנים (KO) רלוונטי מהונדס, נוק אאוט. האפשרות של תאים ייחודיים לסוג, inducible KO או אסטרטגיות הטרנסגניים הפוך את העכבר כלי יקר ערך ללמוד בפתוגנזה של אי ספיקת לב ולנסות לזהות את הרומן משטרי טיפולית3.
בין העכבר מודלים של אי ספיקת לב בשימוש כיום4, התרחבות אבי העורקים רוחבי (טק) אשר תוארה לראשונה על ידי יובל בנאי-ג’וליה5 הוא הדגם המועדף כדי ליצור לחץ יתר-induced גדילת (LVH)1 , 3. היתרון הגדול ביותר של מודל זה הוא היכולת לאפשר ריבוד של LVH2, למרות עזב חדרית שיפוץ בתגובה טק הוא משתנה בין זנים שונים בעכבר. בפרט, עכברים C57BL/6 לפתח התרחבות מהירה LV לאחר עיגול זה עלולים להופיע עם אחרים זנים4,6,7.
התפרצות פתאומית של יתר לחץ דם מושגת עם טק גורם כ 50% עלייה במסה LV בתוך 2 שבועות, ומאפשר לבחון את הפעילות של התערבויות תרופתי או המולקולריות מכוון להתכוונן על התפתחות LVH4במהירות. תנאי הגיוס חריפה של יתר לחץ דם חמור על ידי טק לא בדיוק לשחזר את גדילת מתקדמת, שיפוץ שנמדדו בסביבה קלינית של באבי העורקים או יתר לחץ דם. עם זאת, מודל זה משמש על ידי חוקרים רבים כדי לזהות ולשנות את הרומן מטרות טיפולית אי ספיקת לב4.
ביצוע טק בעכברים דורש למומחיות הכירורגית גדול יותר מהנדרש לקבלה אחרים טכניקות המשמשות לזירוז LVH ואי ספיקת לב לאחר מכן2. הסופרים לבצע הליך זה באמצעות נלוקסון ואוורור של בעלי חיים2,8, אשר גורם בהליך זה יותר תובעניים ולגזול ומוסיף הנטל כירורגי לבעל החיים. רק כמה חוקרים השתמשו טק פולשנית במחקר שלהם עם התייחסות קצרה הליך כירורגי9,10,11.
המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד טכניקה פשוטה וידידותית של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים, הדגשת השלבים הקריטיים של ההליך. על-ידי ביצוע השלבים הבאים מפתח, באפשרותך לבצע בקלות בטכניקה זו.
Protocol
Representative Results
Discussion
המטרה של פרוטוקול זה היא להציג דוגמה צעד אחר צעד של טכניקה כירורגית פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים. תיאור טכני מפורט של התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים דווחה על-ידי סופרים אחרים,2,8. עם זאת, חוקרים אלה לבצע ניתוח בעקבות צנרור ואוורור של בעלי חיים…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי מענק (N ° 32016) של קרן לב וכלי דם שוויצרי כדי RT.
Materials
| Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
| Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| Sutures: | |||
| Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
| Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| Drugs: | |||
| Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| Instruments: | |||
| Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
| Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
| Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
| Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
| Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
| Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
| Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
| 11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| RNA extraction and qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
| High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
| Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
| Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
| Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
| Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
| Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
| Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal food | |||
| Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |
Referências
- Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).
- Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
- Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., Ardehali, H., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine. , 164-169 (2014).
- Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present. Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).
- Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), 8277-8281 (1991).
- Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292 (5), 2119-2130 (2007).
- Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains. J. Appl. Physiol. 97 (1), 369-376 (2004).
- Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. Transverse aortic constriction in mice. J. Vis. Exp. (38), (2010).
- Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285 (3), 1261-1269 (2003).
- Faerber, G., et al. Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).
- Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).
- Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors. PLoS ONE. 11 (8), 0161273 (2016).
- Liao, Y., et al. Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).
- Stansfield, W. E., et al. Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).
- Beetz, N., et al. Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload. J. Mol. Cell. Cardiol. 101, 145-155 (2016).
