Техника минимально инвазивной поперечной аорты сдавливания в мышей для индукции гипертрофия левого желудочка
Summary
Целью настоящего Протокола является описание шаг за шагом технику минимально инвазивной поперечной сужение аорты (TAC) мышей. Ликвидация интубации и вентиляции, которые являются обязательными для часто используемых стандартной процедуры миниинвазивная TAC упрощается процедура оперативного и уменьшает нагрузку на животное.
Abstract
Поперечная сужение аорты (TAC) мышей является одним из наиболее распространенных хирургических методов для экспериментального исследования давление перегрузки индуцированной оставил гипертрофия желудочков (ГЛЖ) и ее прогрессирования сердечной недостаточности. В большинстве сообщенных расследований эта процедура выполняется с интубации и вентиляции животное, которое делает его сложных и трудоемких и добавляет к хирургической бремя для животного. Целью настоящего Протокола является описание упрощенной методики малоинвазивной TAC без интубации и вентиляции мышей. Важнейшие шаги техники подчеркнуты достижения низкой смертности и высокой эффективности в стимулировании ГЛЖ.
Самцов мышей C57BL/6 (10-недельных, 25-30 g, n = 60) были под наркозом с одной внутрибрюшинной инъекции смеси кетамина и ксилазина. В спонтанно дыхание животных после 3-4 мм верхний частичной стернотомия, сегмент 6/0 Шелкового шва резьбой через глаз помощи лигирование был принят под аорты и связали над притупляются 27-иглы. Шам эксплуатируемых животных прошли же хирургической подготовки, но без сужение аорты. Эффективность процедуры в стимулировании ГЛЖ подтверждено значительное увеличение соотношения вес сердца/тела. Этот показатель получен в течение 3, 7, 14 и 28 дней после операции (n = 6-10 в каждой группе и каждый момент времени). Используя нашу технику, ГЛЖ наблюдается по сравнению с фиктивным животных от 7 день через день 28 ТЭК. Оперативное и поздно (более 28 дней) смертности являются весьма низкие на 1,7%.
В заключение наша экономически техника минимально инвазивной TAC в мышах носит очень низкой постановляющей части и послеоперационная смертность и очень эффективна в привлечении ГЛЖ. Это упрощает процедура оперативного и уменьшает нагрузку на животное. Она может быть легко выполнена, следуя критические шаги, описанные в настоящем Протоколе.
Introduction
За последние годы, было проведено исследование сердечной недостаточности в жизнеспособных животных модели1. По сравнению с больших животных моделей сердечной недостаточности, малые животные модели имеют многочисленные потенциальные преимущества. Рядом с нижней расходы жилищного строительства и технического обслуживания малые животные модели доступны для больше исследователей из-за менее сложных необходимое2.
Мышь сердечной недостаточности модели предлагают многие из те же преимущества, как крыса модели. В дополнение к сокращению жилья стоит3, мышь модели выгоду от наличия соответствующих штаммов трансгенных и нокаут (KO). Возможность конкретного типа, индуцибельной KO ячейки или трансгенных стратегии сделать мышь бесценным инструментом для изучения патогенеза сердечной недостаточности и попытаться определить новые терапевтические схемы3.
Среди мыши модели сердечной недостаточности в настоящее время используется4, поперечной аорты сужения (TAC), который был впервые описан Rockman5 является предпочтительной моделью для создания давления перегрузки индуцированной левого желудочка гипертрофия (ГЛЖ)1 , 3. самое главное преимущество этой модели является возможность разрешить стратификации ГЛЖ2, хотя левой вентрикулярной Ремоделирование в ответ на TAC переменной между различными мыши штаммов. Мышей C57BL/6, в частности, разработать быстрого LV дилатация после TAC, что не может произойти с другими штаммов4,6,7.
Внезапного возникновения гипертонии, достигнутые с причинами TAC примерно 50% увеличение LV массы в течение 2 недель, позволяя быстро изучить действие фармакологических или молекулярные вмешательств, направленных на плавного развития ГЛЖ4. Острый индукции тяжелой гипертензии, TAC не точно воспроизвести прогрессивного левого желудочка гипертрофия и Ремоделирование наблюдается в клинических условиях аортальный стеноз или артериальной гипертензии. Тем не менее эта модель используется для определения и изменения роман терапевтических целей в сердечной недостаточности4многих детективов.
Выполнение TAC в мышах требует больше хирургического опыта, чем требуется для других методов, используемых для побудить ГЛЖ и последующих сердечной недостаточности2. Большинство авторов выполнить эту процедуру, интубирование и вентиляции животных2,8, который делает эту процедуру более требовательной и длительным и добавляет к хирургической бременем для животного. Только несколько исследователи использовали минимально инвазивной TAC в их исследовании с краткое хирургическая процедура9,10,11.
Целью настоящего Протокола является описать пошаговую инструкцию упрощенный и удобный метод минимально инвазивной поперечной аорты сдавливания в мышей, выделив на критических этапах процедуры. Выполнив следующие ключевые шаги, один можно легко выполнить эту технику.
Protocol
Representative Results
Discussion
Цель настоящего Протокола заключается в представлении Пошаговые иллюстрации хирургической техники для малоинвазивных поперечной сужение аорты в мышах. 2,других авторов8сообщила подробное техническое описание поперечной сужение аорты у мышей. Однако, ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана Грант (N ° 32016) швейцарского фонда сердечно-сосудистой системы в рт.
Materials
| Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
| Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| Sutures: | |||
| Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
| Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| Drugs: | |||
| Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| Instruments: | |||
| Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
| Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
| Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
| Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
| Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
| Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
| Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
| 11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| RNA extraction and qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
| High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
| Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
| Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
| Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
| Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
| Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
| Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal food | |||
| Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |
Referências
- Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).
- Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
- Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., Ardehali, H., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine. , 164-169 (2014).
- Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present. Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).
- Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), 8277-8281 (1991).
- Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292 (5), 2119-2130 (2007).
- Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains. J. Appl. Physiol. 97 (1), 369-376 (2004).
- Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. Transverse aortic constriction in mice. J. Vis. Exp. (38), (2010).
- Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285 (3), 1261-1269 (2003).
- Faerber, G., et al. Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).
- Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).
- Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors. PLoS ONE. 11 (8), 0161273 (2016).
- Liao, Y., et al. Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).
- Stansfield, W. E., et al. Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).
- Beetz, N., et al. Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload. J. Mol. Cell. Cardiol. 101, 145-155 (2016).
