家兔膳食诱导代谢综合征的实验模型: 方法论考虑、发展和评价
Summary
我们描述的方法, 以建立一个实验模型的饮食诱导代谢综合征 (大都会) 的家兔使用高脂肪, 高蔗糖的饮食。动物发育为中央性肥胖症、轻度高血压、糖尿病前和血脂紊乱, 从而再现了人类大都会的主要成分。这种慢性模式将允许获取疾病进展的基础机制知识。
Abstract
近年来, 由于久坐的生活方式和不健康的饮食习惯的增加, 肥胖和代谢综合征已经成为公共卫生和临床实践的一个日益严重的问题。由于动物模型, 基础研究可以调查病理过程的机制, 如大都会。在这里, 我们描述的方法, 以建立实验兔模型的饮食诱导的大都会和它的评估。经过一段时间的驯化, 动物饲养高脂肪 (10% 氢化椰子油和5% 猪油), 高蔗糖 (15% 蔗糖溶于水) 饮食28周。在此期间, 进行了几项实验程序, 以评估各组的不同组成部分: 形态学和血压测量, 葡萄糖耐受性测定, 并分析了几种血浆标记物。在实验期结束时, 动物发育为中央性肥胖症、轻度高血压、前糖尿病和血脂异常, 低密度脂蛋白, 高 LDL, 并增加甘油三酯 (TG) 水平, 从而再现人类大都会的主要成分。这种慢性模型允许新的观点, 以了解疾病进展的基本机制, 检测的基础和临床标志, 使病人的识别风险, 甚至测试新的治疗治疗这种复杂病理的方法。
Introduction
由于久坐的生活方式和不健康的饮食习惯的增加, 肥胖和代谢综合征 (大都会) 已经成为公共卫生和临床实践的一个日益严重的问题, 因为1。有几个大都会的定义, 但他们大多描述它作为一个集群的心血管和新陈代谢的变化, 如腹部肥胖, 降低高密度脂蛋白和高 LDL 胆固醇, 甘油三酯, 葡萄糖不耐受和高血压2 ,3,4。诊断要求这五标准中有三是存在的。
由于动物模型, 基础研究已经能够调查的机制, 如病理过程, 如大都会。已经使用了几种动物模型, 但最重要的是, 选择模型再现人类病理学的主要临床表现 (图 1)。有了这个目的, 被认为类似人类的动物模型, 主要是犬和猪, 已经开发 (见 Verkest5和张 & Lerman6进行审查)。然而, 由于狗的动脉粥样硬化或高血糖的发展, 犬的模型不显示所有的组成部分, 由于饮食是可疑的5。猪模型呈现出与人类最具解剖学和生理上的相似性, 从而为阐明大鼠的机制提供了重要的预测能力, 但其维护和实验过程的复杂性使得使用这个模型非常劳力密集和昂贵的6。
另一方面, 鼠类模型 (鼠和鼠), 饮食诱导自发和转基因, 已广泛用于研究肥胖, 高血压和大都会, 其病理结果在不同的器官和系统 (见黄et 。7进行审阅)。虽然这些模型的使用比狗或猪更实惠, 但它们有重要的缺点。事实上, 根据菌株的不同, 动物会发展出一些组, 而其他如高血压、高血糖和 hyperinsulinemia 则缺席7。此外, 大都会的主要成分之一, 肥胖, 在一些转基因菌株, 不仅取决于与饮食相关的因素, 而是表明, 一些动物变得肥胖与正常或甚至减少食物摄入量8。最后, 小鼠和大鼠显示胆固醇酯转运蛋白 (CETP) 的自然缺陷, 并以高密度脂蛋白为主要的胆固醇转运手段, 使其对动脉粥样硬化的发展具有相对的抵抗力。这是一个重要的区别, 脂代谢与人, 谁表达 CETP 和运输他们的胆固醇主要在 LDL9。
相反, 实验兔子代表了大动物和啮齿动物实验模型之间的中间阶段。因此, 兔子可以很容易地提交到不同类型的协议, 对人员和维护的最低要求, 比较大的动物模型更容易在实验过程中处理。此外, 据报道, 喂养高脂肪饮食的兔子有类似的血流动力学和神经体液的变化, 肥胖的人 8, 10, 11.注意, 关于脂质代谢, 兔子有丰富的 CETP 在血浆和他们的脂蛋白配置文件是 LDL 丰富的12, 这也类似于人类。此外, 兔子非常迅速地发展高脂血症, 因为作为食草动物, 他们非常敏感的膳食脂肪13。
图 1: 对大都会动物模型的比较.参见 Verkest5、张和 Lerman6和黄et 等。7进行审阅。”” 表示优势, “” 表示劣势.
*有争议, 取决于研究, 如卡罗尔等所指出的**。8, 一些转基因菌株在食物摄入量之外就变得肥胖。化学合成: 胆固醇酯转运蛋白。GTT: 葡萄糖耐受性试验。请单击此处查看此图的较大版本.
为了阐明大鼠在不同器官和系统中产生的病理重塑的基本机制, 并了解这一复杂的病理学, 选择一个重现主要成分的实验模型。人类大都会是必不可少的。由于它与人类生理的相似性以及在慢性协议和测量中的使用负担能力, 兔子可以提供许多优势。在这条线, 很少有饮食诱导的兔子模型使用高脂肪和高蔗糖饮食已使用14,15、16、17、18、19 (表 1) 和一个在与器官重塑有关的表型时, 对大都会不同成分的表征具有重要意义。因此, 本文的主要目的是描述建立饮食诱导的大鼠大鼠模型的方法, 允许研究其病理生理学和对器官重塑的影响。
| 研究 | 饮食 | 时间 | 品种 | 大都会组件 | |||
| Ob | HT | 汞 | Dl | ||||
| 尹等 (2002)14 | · 10% 脂肪 | 24周 | · 男 NZW | |
– | |
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| · 37% 蔗糖 | · 2公斤 | ||||||
| 赵等 (2007)15 | · 10% 脂肪 | 36周 | · 马累 JW | |
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| · 30% 蔗糖 | · 16周 | ||||||
| Helfestein 等 (2011)16 | · 10% 脂肪 | 24周 | · 男 NZW | |
– | |
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| · 40% 蔗糖 | · 12周 | ||||||
| · 0.5-0.1 胆固醇 | |||||||
| 宁等 (2015)17 | · 10% 脂肪 | 8-16 周 | · 男 WHHL | |
– | |
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| · 30% 果糖 * | · 12周 | ||||||
| 刘等 (2016)18 | · 10% 脂肪 | 48周 | · 男 NZW | |
– | |
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| · 30% 蔗糖 | · 12周 | ||||||
| 咏叹调-Mutis 等 (2017)19 | · 15% 脂肪 | 28周 | · 男 NZW | |
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表 1: 采用高脂高蔗糖膳食诱导的大鼠兔模型.符号 “” 指示缺勤、”” 存在和 “-” 未计算.限制.WHHL, 渡边遗传性 hiperlipidemic 兔。JW, 日本白兔。肥胖症高血压汞, 高血糖。Dl, 血脂异常。
Protocol
这项研究中使用的动物护理和实验性议定书符合欧盟关于保护用于科学目的的动物的2010/63 号指令, 并得到了机构动物保育和使用委员会 (2015/变现/豌豆/00049) 的批准。 注: 该议定书包括长期管理高脂肪、高蔗糖饮食28周, 以及对大都会主要成分的评估。我们使用11成年男性新西兰白 (NZW) 兔子重 4.39, 0.14 (s.d.) 公斤, 是 20-22 星期老在实验性协议初。他们被安置在一个房间与湿气 (50 …
Representative Results
大都会代表一组代谢和心血管异常, 其研究可以通过使用实验模型来促进。事实上, 为了阐明由肿瘤组织产生的病理重塑的机制, 选择一个适当类似于人类状况和适合研究的实验模型是至关重要的。本文介绍了用饱和脂肪和蔗糖高的膳食诱导家兔大都会的方法, 并对其评价进行了详细的描述。使用饮食代替转基因动物模型是非常重要的, 因为饮食影响全身新陈代谢<sup class="xre…
Discussion
建立合适的实验模型, 可以为研究肿瘤的发展提供更一致、更可靠的方法, 同时也需要了解器官和系统重塑的基本机制。在这里, 我们描述了一些方法来建立一个相关的饮食诱导大鼠群的实验模型, 以及如何评估这一组代谢和心血管异常的主要组成部分, 这一模式的特点: 中央肥胖, 高血压,葡萄糖不耐受, 血脂异常与低 HDL, 高 LDL, 和 TG 水平的增加。
该模型的一个主要力量是能够?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了加泰罗尼亚自治区 Valenciana (GV2015-062)、大学 de València (UV-INV-PRECOMP14-206372) 对、加泰罗尼亚自治区 Valenciana (PROMETEOII/2014/037) 和干杯 III. 菲德基金 (CIBERCV CB16/11/0486) FJC 的支持。
Materials
| Veterinary scale | SOEHNLE | 7858 | Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale |
| Shovel for aluminum feed | COPELE | 10308 | Shovel for aluminum feed http://copele.com/es/herramientas/48-pala-para-pienso-de-aluminio.html |
| Balance | PCE Ibérica | PCE-TB 15 | Balance http://www.pce-iberica.es/medidor-detalles-tecnicos/balanzas/balanza-compacta-pce-bdm.htm |
| Strainer (20 cm diam.) | ZWILLING | 39643-020-0 | Strainer https://es.zwilling-shop.com/Menaje-del-hogar/Menaje-de-cocina/Menaje-especial/Accesorios/Colador-20-cm-ZWILLING-39643-020-0.html |
| Bowl | ZWILLING | 40850-751-0 | Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale |
| Funnel | BT Ingenieros | not available | Funnel http://www.bt-ingenieros.com/fluidos-y-combustibles/961-juego-de-4-embudos-de-plastico.html?gclid=EAIaIQobChMIuInui_y-1QIVASjTCh28Zwf-EAQYBSABEgK7xPD_BwE |
| Introcan Certo 22G blue | B Braun | 4251318 | Peripheral intravenous catheter http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan- |
| Propofol Lipuro 10 mg/ml vial 20 ml | B Braun | 3544761VET | General intravenous anesthetic http://www.bbraun-vetcare.es/producto/propofol-lipuro-1- |
| FisioVet serum solution 500ml | B Braun | 472779 | Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale |
| Askina Film Vet 1,25cm x 5m | B Braun | OCT13501 | Plastic Plaster http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-film-vet |
| Askina Film Vet 2,50cm x 5m | B Braun | OCT13502 | Plastic Plaster http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-film-vet |
| Injekt siringe 10ml luer | B Braun | 4606108V | Injection-aspiration syringe of two single-use bodies http://www.bbraun-vetcare.es/producto/injekt- |
| Seca 201 | seca | seca 201 | Ergonomic tape for measuring perimeters https://www.seca.com/es_es/productos/todos-los-productos/detalles-del-producto/seca201.html#referred |
| Sterican 21Gx1" – 0,8x25mm verde | B Braun | 4657543 | Single Use Hypodermic Needle http://www.bbraun-vetcare.es/producto/agujas-hipodermicas-sterican- |
| CONTOURNEXT-Meter | BAYER | 84413470 | Blood glucose analysis system http://www.contournextstore.com/en/contour-next-meter-2 |
| CONTOUR NEXT test strips | BAYER | 83624788 | Blood glucose test strips http://www.contournextstore.com/en/contour-next-test-strips-100-ct-package |
| MICROLET NEXT LANCING DEVICE | BAYER | 6702 | Lancing device http://www.contournextstore.com/en/new-microlet-next-lancing-device |
| MICROLET 2 Colored Lancets | BAYER | 81264857 | Ultra-thin sterile lancet for capillary puncture http://www.contournextstore.com/en/microlet2-colored-lancets-100s |
| Injekt 20ml luer siringe | B Braun | 4606205V | Scale https://www.soehnle-professional.com/en/productgroup/details/103/veterinary-scale |
| Askina Mullkompressen 7,5×7,5cm – sterile | B Braun | 9031219N | Sterile gauze packets in envelopes http://www.bbraun-vetcare.es/producto/askina-mullkompressen-esteril |
| Emla lidocaine/prilocaine | AstraZeneca | not available | Local anesthetics https://www.astrazeneca.es/areas-terapeuticas/neurociencias.html |
| Introcan Certo 18G short | B Braun | 4251342 | Peripheral intravenous catheter http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan- |
| Introcan Certo 20G | B Braun | 4251326 | Peripheral intravenous catheter http://www.bbraun-vetcare.es/producto/introcan- |
| Blood Pressure Transducers-MA1 72-4497 | Harvard Apparatus | 724497 | Transducer for monitoring blood pressure http://www.harvardapparatus.com/physiology/physiological-measurements/transducers/pressure-transducers/research-grade-pressure-transducers.html |
| PowerLab 2/26 | AD Instruments | ML826 | Amplifier https://www.adinstruments.com/products/powerlab |
| LabChart ver. 6 | AD Instruments | not available | Acquisition software https://www.adinstruments.com/products/labchart |
| Animal Bio Amp | AD Instruments | FE136 | Amplifier https://www.adinstruments.com/products/bio-amps#product-FE136 |
| K2EDTA 7.2mg | BD | 367861 | Blood collection tubes http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=367861 |
| Centrifuge | SciQuip | 2-16KL | Centrifuge http://www.sigma-centrifuges.co.uk/store/products/refrigerated-sigma-2-16k-centrifuge/ |
| Eppendorf Reference 2, 100 – 1000 μL | Eppendorf | 4920000083 | Pipette https://online-shop.eppendorf.es/ES-es/Pipeteo-44563/Pipetas-44564/Eppendorf-Reference2-PF-42806.html |
| Eppendorf Safe-Lock Tubes, 0.5 mL | Eppendorf | 30121023 | Tubes https://online-shop.eppendorf.es/ES-es/Puntas-tubos-y-placas-44512/Tubos-44515/Eppendorf-Safe-Lock-Tubes-PF-8863.html |
| NZW rabbits (16-18 weeks old) | Granja San Bernardo | not available | New Zealand White rabbits http://www.granjasanbernardo.com/en/welcome/ |
| Sucrose | Sigma | S0389-5KG | Sucrose for drinking solution http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s0389?lang=es®ion=ES |
| Rabbit maintenance control diet | Ssniff | V2333-000 | Control diet http://www.ssniff.com/ |
| Rabbit high-fat diet | Ssniff | S9052-E020 | High-fat diet http://www.ssniff.com/ |
| Rabbit rack and drinker | Sodispan | not available | Rack for rabbits https://www.sodispan.com/jaulas-y-racks/racks-conejo-y-cobaya/ |
| Rabbit restrainer | Zoonlab | 3045601 | http://www.zoonlab.de/en/index.html |
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Citar este artigo
Arias-Mutis, Ó. J., Genovés, P., Calvo, C. J., Díaz, A., Parra, G., Such-Miquel, L., Such, L., Alberola, A., Chorro, F. J., Zarzoso, M. An Experimental Model of Diet-Induced Metabolic Syndrome in Rabbit: Methodological Considerations, Development, and Assessment. J. Vis. Exp. (134), e57117, doi:10.3791/57117 (2018).