肝硬変ラットにおけるポータル高血圧症侵襲血行動態評価
Summary
ここでラットのポータル高血圧症候群を特徴付けるために門脈圧、内臓の血流、血行などの循環パラメーターの侵襲的な測定のための詳しいプロトコルについて述べる。
Abstract
これは、ポータルの高血圧症候群の特性評価のための肝硬変ラットにおける侵襲血行動態測定を記述する詳細なプロトコルです。肝硬変による門脈圧亢進症 (PHT) は肝疾患の最も重篤な合併症を担当です。ポータル高血圧症候群の全体像は、肝内血管抵抗 (IHVR) の増加、胃壁の循環、内臓の血流増加による増加ポータル圧力 (PP) が特徴です。進歩的な内臓動脈の血管拡張や高い心拍数 (HR) が低の動脈圧と心拍出量の増加ポータル高血圧症候群の特徴です。
新規治療法は現在、いずれかのターゲット IHVR で PP を減らすことを目指すを開発されているまたは内臓の血流を増加-全身の血行動態に対する副作用が発生します。静脈、内臓、ポータルと全身血行動態的パラメーターの詳細な特性解析は、PP、門脈血流量 (PVBF)、上腸間膜動脈の血流、平均動脈圧 (地図)、および HR の測定を含めたに必要なため、前臨床PHT 新たな治療法の有効性の評価。私たちのビデオの記事は、肝硬変ラットにおける侵襲血行動態計測を実行するための構造化されたプロトコルを持つリーダーを提供します。特に、大腿動脈と回盲部静脈を介して門脈カテーテルおよび静脈のポータルの測定について述べるし、内臓の血流の血管ドップラー超音波流れプローブを介して。PHT の異なるラット モデルの代表の結果が表示されます。
Introduction
PHT は静脈瘤出血、腹水1など肝硬変患者の重篤な合併症を引き起こす可能性が、門脈系の病理組織学的に高められた血圧として定義されます。一方、(例えば、門脈血栓症) 前の肝と後肝 (例えばバッド ・ キアリ症候群) PHT はまれ、肝硬変による肝内 PHT PHT2の最も一般的な原因を表します。
肝硬変、PP は主に高架の IHVR3の結果として増加します。高度な段階で PHT は、心拍出量の増加により増加の PVBF によって悪化、全身や内臓の血管抵抗を減少-ポータル高血圧症候群4を定義します。オームの法則 (ΔP = Q * R) IHVR と血流が PP5に比例していることを意味します。患者では、PP の直接測定、危険なない日常的に行われます。代わりに、肝静脈圧力勾配 (化する) は、PP6、7の間接的な指標として使用されます。化するは、肝静脈8は、バルーンカテーテルを使用して測定されるくさび肝静脈圧 (WHVP) から無料肝静脈圧 (FHVP) を減算することによって計算されます。生理化する範囲 1-5 mmHg、間、化する ≥10 mmHg 臨床的に重要な門脈圧亢進症 (CSPH) を定義し、食道静脈瘤出血、腹水、肝性脳症9 など、PHT 関連の合併症のリスクの増加を示す.PP (すなわち化する) は PHT の重大度、PHT の他のコンポーネントに関する情報の最も関連するパラメーターが胃壁循環 (HR、マップ) の重症度を含む内臓/腸間膜血流と IHVR、ために欠かせないPHT の異なる機構の包括的な理解を得る。
したがって、人間の PP の間接測定と対照をなしてラットの導入方法論は PP の直接測定の利点を提供、ポータル高血圧症候群追加血行動態パラメーターの録音が可能します。さらに、PP の直接測定は、肝線維症 (IHVR の主要な決定要因) の量の優れた統合読み出しと肝組織標本誤差に関連線維症の定量化の特定の限界を克服します。
手術胆管結紮 (BDL)、毒素誘起肝障害 (すなわち、四塩化炭素、チオアセトアミド、またはジメチルニトロソアミン管理によって)、食事誘発代謝肝臓などの肝硬変 PHT の最も一般的に使用される齧歯動物モデル疾患モデル。肝 (非硬変) PHT は部分的門脈結紮 (PPVL)10によることができます。
小さい齧歯動物はマウス、ハムスター、ラットまたはウサギを含む、提案手法に適して、比較的低いメンテナンス コストに関連付けられています。それにもかかわらずラットまたは動物のサイズの利点のための大きい齧歯動物で血行動態の評価はマウスより良い精度と再現性で実行することは不可能、すべて見られています。また、特定のマイクロ機器および装置は、マウスと同様の血行動態パラメーターを取得する必要です。最後に、ラットは、下の関連する罹患率と死亡率をより強固としたがって、ドロップ アウト率が低い群に比べてマウスの可能性が高い。
説明されている方法は (すなわち、抗線維化または抗炎症薬) 肝臓の病気の特定の治療法の評価に適してまたはその影響血管緊張や内皮細胞生物学の新規薬理学的アプローチPHT のしたがって、可能性があります効果血行動態パラメーター。
Protocol
ここで説明したすべてのメソッドは、ウィーン医科大学と科学、研究および経済 (BMWFW) のオーストリアの大臣の倫理委員会によって承認されています。手術室の無菌条件で行われた、または同様の手順する必要があります作業区域をきれいに血行動態の測定は、外科的介入を表すため。一般的に、無菌状態で作業することをお勧めします。吸入麻酔を使用する場合は、作業の安全のため手術?…
Representative Results
動物モデルと肝疾患の重症度、に応じて PHT の度ポータル高血圧症候群の重症度は、異なる (図 7)。 BDL モデルは、胆汁うっ滞による胆汁性肝硬変を引き起こします。したがって、PP 増加時間と、胃壁の循環を開発し、HR の増加と減少の地図で見られるように。肝硬変動物、SMABF、PVBF、IHVR も的外れに?…
Discussion
PP はポータルの高血圧症の評価のための主な成果パラメーターで、基になる肝硬変の重症度を反映しています。マトリックス法 (すなわち、線維症) と正弦波の収縮 (ために血管収縮薬の肝の発現を増加および血管拡張薬に対する反応性の低下) を引き起こす増加 IHVR。複数の臨床11,12,13,14と?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々 は、我々 の研究プロジェクトの中に獣医師、看護士、および彼らの継続的な支援のための生物医学研究のセンターで、動物のキーパーを感謝します。著者は、このプロトコルのすべての校閲者の重要な入力を認めます。オーストリア消化器病学会・肝臓 (ÖGGH) PS に「若手科学賞」と「シュコダ賞」TR 内科のオーストリア社会のいくつか研究資金を供給されました。
Materials
| Instruments | |||
| LabChart 7 Pro software | ADInstruments, Colorado Springs, CO, USA | - | Software |
| ML870 PowerLab 8/30 | ADInstruments, Colorado Springs, CO, USA | - | Electronic multichannel recorder |
| MLT0380/D | ADInstruments, Colorado Springs, CO, USA | - | Pressure transducer (x2: for Portal Pressure and Arterial Pressure) |
| ML112 Quad Bridge Amplifier | ADInstruments, Colorado Springs, CO, USA | - | Bridge amplifier |
| TS420 | Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA | - | Flowmeter module |
| Biological Research Apparatus 7025 | UGO BASILE S.R.L., Comerio, Italy | - | Ventilator |
| Vapor 2000 | Dräger Medical AG & Co. KG, Lübeck, Germany | - | Isofluran Vaporizer |
| Perivascular probes (rat) for Transonic systems (Superior Mesenteric Artery) | Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA | #MA1PRB | Ultrasonic flow probe (1mm) |
| Perivascular probes (rat) for Transonic systems (Portal Vein) | Transonic Systems Inc., Ithaca, NY, USA | #MA2PSB | Ultrasonic flow probe (2mm) |
| 1st for intubation & 2nd for clean skin incisions | - | - | Mayo scissor [x2] |
| Metzenbaum scissor | - | - | - |
| Cuticle scissor | - | - | - |
| e.g. Adson Brown tissue forceps | - | - | Tissue Forceps |
| High precision 45° angle broad point forceps [x2] | - | - | - |
| Hemostat [x4] | - | - | - |
| e.g. Mikulicz peritoneal clamp | - | - | Curved clamp |
| e.g. Dieffenbach clamp | - | - | Micro clamp |
| e.g. micro spatula with flat ends, width 4 mm, | - | - | Micro metal spatula |
| for transbuccal suture at intubation | - | - | Needle holder |
| Scalpel grip | - | - | - |
| selfmade | - | - | Intubation desk |
| blut, flexible and with a suitable diameter for arterial cannula and venflow | - | - | Blunt steel wire |
| modified arterial line 20G with Flowstich | Becton Dickinson, Farady Road, Swindon, UK | #682245 | Arterial line |
| Heating pad | - | - | - |
| Rectal temerature probe | - | - | - |
| Saline heater | - | - | - |
| Laryngoscope (specific for animal size, e.g. rat) | - | - | - |
| Inductionbox for inhalation anesthesia | - | - | - |
| Scale (able to measure mg) | - | - | - |
| Hair clipper | - | - | - |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Consumables | |||
| e.g. modified BD Venflon Pro Safety 14GA | Becton Dickinson Infusion Therapy, AB, SE251 06 Helsingborg, Sweden | #393230 | Peripheral venous catheter (14G) |
| Fine-Bore Polyethylene Tubing, ID 0.58mm, OD 0.96mm, Portex, | Smiths Medical International Ltd., Kent, UK | #800/100/200 | Catheter tube (PE-50) |
| e.g. Omnifix-F Solo | B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | #9161406V | Syringe 1mL |
| e.g. Injekt Solo | B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | #4606051V | Syringe 5mL |
| e.g. Injekt Solo | B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | #4606205V | Syringe 20mL |
| e.g. BD Microlance 3, 18G – 1 1/2" | Becton Dickinson S.A., Fraga, Spain | #304622 | Cannula (18G) |
| e.g. BD Microlance 3, 23G – 1" | Becton Dickinson S.A., Fraga, Spain | #300800 | Cannula (23G) |
| e.g. BD Microlance 3, 30G – 1/2" | Becton Dickinson S.A., Fraga, Spain | #304000 | Cannula (30G) |
| e.g. Leukoplast S | BSN medical GmbH, Hamburg, Germany | #47619-00 | Adhesive tape |
| e.g. Gazin RK Mullkompressen (18x8cm) | Lohmann & Rauscher, Vienna, Austria | #10972 | Gauze compress (small) |
| e.g. Gazin RK Mullkompressen (5x5cm) | Lohmann & Rauscher, Vienna, Austria | #10961 | Gauze compress (big) |
| Silk Braided black, USP 4/0, EP 1.5 | SMI AG, St. Vith, Belgium | #2021-04 | Suture (Silk 4/0, EP 1.5) |
| e.g. Mersilk, 2-0 (3 Ph. Eur.), PS-1 Prime | Johnson & Johnson Medical GmbH – Ethicon Deutschland, Germany | #EH7552 | Transbuccal suture |
| e.g. Cottonbuds (2.2mm, 15cm) | Paul Hartmann AG, Heidenheim, Germany | #967936 | Cotton buds |
| e.g. Vue Ultrasoundgel | Optimum Medical Limited, UK | #1157 | Ultrasound gel |
| e.g. Glubran 2 | Gem srl, Viareggio, Italy | #G-NB2-50 | Tissue glue |
| e.g. Surgical scalpell knife Nr. 10 – carbon steel | Swann-Morton, England, B.S. | #202 | Scalpel Knife |
| Heparin, 5000 i.E./mL (Natriumheparin) | Medicamentum Pharma GmbH, Allerheiligen im Mürztal, Austria | - | Heparin |
| Florane | Aesica Queenborough Ltd., Queenborough, UK | - | Isoflurane |
| OeloVital (5g) | Fresenius Kabi Austira Gmbh, Graz, Austria | - | Eye gel |
| Ketasol | aniMedica GmbH, Senden-Bösensell, Germany | - | Ketamine |
| Rompun | Bayer Austria Ges.m.b.H., Vienna, Austria | - | Xylazine |
| Xylocain 10% Pumpspray | AstraZeneca Österreich GmbH, Vienna, Austria | - | Lidocaine pump spray |
| Dipidolor | Jansen-Cilag Pharma GmbH, Vienna, Austria | - | Piritramide |
| NaCl 0.9% Fresenius, 1L | Fresenius Kabi Austira GmbH, Graz, Austria | #13LIP132 | Physiological saline solution |
Referências
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Citar este artigo
Königshofer, P., Brusilovskaya, K., Schwabl, P., Podesser, B. K., Trauner, M., Reiberger, T. Invasive Hemodynamic Characterization of the Portal-hypertensive Syndrome in Cirrhotic Rats. J. Vis. Exp. (138), e57261, doi:10.3791/57261 (2018).