चूहों में रेसिनिफेरॉक्सिन और दर्द परीक्षण के साथ इंट्रासेरेरेब्रोवेंट्रिकुलर उपचार
Summary
सुपरास्पिनल क्षेत्र में क्षणिक रिसेप्टर संभावित वैनलिड टाइप 1 (टीआरपीवी1) को मस्तिष्क समारोह में कुछ भूमिकाएं निभाने का सुझाव दिया गया है। यहां वर्णित चूहों में सुपरास्पिनल टीआरपीवी1 डिसेंसिटाइजेशन के लिए रेसिनिफेरॉक्सिन के इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर इंजेक्शन के लिए एक प्रोटोकॉल है। कुछ दर्द परीक्षणों के लिए प्रक्रियाएं भी प्रस्तुत की जाती हैं।
Abstract
क्षणिक रिसेप्टर संभावित वैनलिड टाइप 1 (TRPV1), एक थर्मोसेंसिटिव सेशन चैनल, परिधीय नसों में दर्द को ट्रिगर करने के लिए जाना जाता है। इसके परिधीय कार्य के अलावा, मस्तिष्क कार्यों में इसकी भागीदारी का भी सुझाव दिया गया है। रेसिनिफेरॉक्सिन (आरटीएक्स), एक अल्ट्रापोसेंट टीआरपीवी1 एगोनिस्ट, टीआरपीवी1 के दीर्घकालिक असंवेदनशीलीकरण को प्रेरित करने के लिए जाना जाता है, और यह डिसेंसिटाइजेशन टीआरपीवी1-एक्सप्रेसिंग कोशिकाओं की शारीरिक प्रासंगिकता की जांच के लिए एक वैकल्पिक दृष्टिकोण रहा है। यहां हम चूहों में आरटीएक्स के साथ इंट्राशेरेब्रोवेंट्रिकुलर (i.c.v.) उपचार के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। परिधीय टीआरपीवी1 उत्तेजना (आरटीएक्स परीक्षण) और यांत्रिक उत्तेजना (पूंछ दबाव परीक्षण) के लिए एनओसी परीक्षण के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन किया जाता है। यद्यपि चूहों की असंगत प्रतिक्रियाएं जिन्हें आरटीएक्स यानी वी प्रशासित किया गया था, नियंत्रण समूहों के उन लोगों के बराबर थे, आरटीएक्स-i.c.v.-प्रशासित चूहे एसिटामिनोफेन के एनाल्जेसिक प्रभाव के प्रति असंवेदनशील थे, सुझाव देते हैं कि i.c.v. RTX उपचार सुप्रास्पिनल-चयनात्मक टीआरपीवी1 डिसेंसिटाइजेशन को प्रेरित कर सकता है। इस माउस मॉडल मस्तिष्क में TRPV1 की भूमिका का अध्ययन करने के लिए एक सुविधाजनक प्रयोगात्मक प्रणाली के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है/ इन तकनीकों को अन्य दवाओं के केंद्रीय कार्यों के अध्ययन के लिए भी लागू किया जा सकता है।
Introduction
पशु परिधीय नसों पर सेंसर के माध्यम से अपने पर्यावरण से विभिन्न भौतिक और रासायनिक उत्तेजनाओं प्राप्त करते हैं। क्षणिक रिसेप्टर संभावित वेनिलॉइड टाइप 1 (टीआरपीवी1) थर्मोसेंसिटिव, नॉनसेलिटिव शन चैनलों में से एक है जो हीट सेंसर1,,2,और टीआरपीवी1 के सक्रियण और/या मॉडुलन के रूप में कार्य करता है, सामान्य और भड़काऊ दोनों संदर्भों में नोक-पोटेशन के लिए एक महत्वपूर्ण कदम माना जाता है3। हालांकि समग्र अभिव्यक्ति पैटर्न विवादास्पद है, टीआरपीवी1 की अभिव्यक्ति का सुझाव भी सुप्रास्पिनल क्षेत्रों में दिया गया है, जिसमें विभिन्न मस्तिष्क गतिविधियों (निशाचर4,थर्मोरेगुलेशन5,चिंता6,ध्यान घाटे अतिसक्रियता विकार7और मिर्गी8)शामिल हैं) । इसके अलावा, हाल ही में यह सुझाव दिया गया है कि एक व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली दर्द निवारक दर्द निवारक एसिटामिनोफेन, केंद्रीय टीआरपीवी1 की सक्रियता को अपनी एनाल्जेसिक कार्रवाई9,,10को प्रकाश में लाने के लिए मध्यस्थता करती है।
जानवरों के लिए कैप्सैसिन और रेसिनिफेरॉक्सिन (आरटीएक्स) सहित अतिरिक्त टीआरपीवी1 एगोनिस्ट का प्रशासन टीआरपीवी1-पॉजिटिव न्यूरॉन्स की मौत की ओर जाता है और टीआरपीवी1 agonists11,,12के लिए लंबे समय तक चलने वाले desensitization । स्थानीय आवेदन (इंट्राथेकल,13,14,इंट्रासिस्टरल,15, 16,,17,और इंट्राएंग्लियोनल18)के साथ संयुक्त रूप से, इस रासायनिक एब्लेशन दृष्टिकोण ने टीआरपीवी1 के शारीरिक कार्यों की जांच करने का एक वैकल्पिक तरीका प्रदान किया है।17 हमने हाल ही में बताया है कि आरटीएफएक्स का इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर (i.c.v.) इंजेक्शन चूहों में एसिटामिनोफेन के एनाल्जेसिक प्रभाव को रोकता है, जो सुप्रास्पिनल-चयनात्मक टीआरपीवी1 डिसेंसिटाइजेशन19का सुझाव देता है। इस पांडुलिपि में, हम i.c.v. इंजेक्शन और बाद में दर्द परीक्षण के लिए सटीक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।
मस्तिष्क के वेंट्रिकल में दवाओं का सीधा इंजेक्शन किसी भी परिधीय प्रभाव को कम करते हुए उनके केंद्रीय प्रभावों का अध्ययन करना संभव बनाता है। यहां प्रस्तुत i.c.v. इंजेक्शन प्रक्रिया हेली और मैककॉर्मिक20द्वारा बताई गई विधि का संशोधन है । यह विधि कोरोनल सीवन के माध्यम से पार्श्व वेंट्रिकल्स में एक इंजेक्शन सुई के सम्मिलन को शामिल करना सरल है और कैनुलेशन के लिए किसी विशेष उपकरण या शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं की आवश्यकता नहीं है।
TRPV1 agonists के परिधीय स्थानीय आवेदन एक जलती हुई दर्द सनसनी और न्यूरोजेनिक सूजन उदाहरण भी देते हैं। चूहों कि प्रणालियां आरटीएक्स के साथ इलाज कर रहे हैं, और TRPV1-KO चूहों, इस उत्तेजना13के प्रति असंवेदनशील हैं । हमने आरटीएक्स-i.c.v. में परिधीय टीआरपीवी1 के संरक्षण की पुष्टि करने के लिए आरटीएक्स (आरटीएक्स टेस्ट) का इंट्राप्लांटर इंजेक्शन किया है। चूहों. यह विधि पारंपरिक फॉर्मेलिन परीक्षण21का संशोधन है ।
यह सूचित किया गया है कि आरटीएक्स और टीआरपीवी1-को चूहों के साथ व्यवस्थित रूप से इलाज किए जाने वाले चूहों में यांत्रिक उत्तेजनाओं11 , 13,,,22के लिए एक सामान्य सीमा दिखाई जाती है।13 यहां हम एसिटामिनोफेन के एनाल्जेसिक प्रभाव में परिवर्तन के परीक्षण के लिए पूंछ दबाव परीक्षण के लिए एक प्रक्रिया प्रस्तुत करते हैं।
इन प्रक्रियाओं के सभी रूढ़िवादी और बहुमुखी हैं, और अन्य दवाओं के अध्ययन के लिए लागू किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
इन प्रयोगों में सबसे महत्वपूर्ण कदम i.c.v. इंजेक्शन की सफलता है। यहां इस्तेमाल की जाने वाली i.c.v. इंजेक्शन तकनीक काफी सरल है लेकिन इसके लिए कुछ अभ्यास की आवश्यकता है। प्रयोगों से पहले, रंगों के साथ अभ्यास (उद?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
कोई नहीं.
Materials
| Resiniferatoxin | LKT Laboratories | R1774 | used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test |
| Acetaminophen | IWAKI SEIYAKU | gifted from IWAKI SEIYAKU | |
| Pentobarbital sodium salt | Tokyo Chemical Industry | P0776 | used for anesthesia |
| Ethanol (99.5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | used for dissolving RTX |
| Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | used for dissolving RTX |
| 25 mL microsyringe | Hamilton | 1702LT | used for i.c.v. injection |
| 100 mL microsyringe | Hamilton | 1710LT | used for intraplantar injection |
| 26-gauge disposable needle | TERUMO | NN-2613S | used for i.c.v. injection |
| 30-gauge disposable needle | NIPRO | 01134 | used for intraplantar injection |
| Pressure meter | Ugo Basile | Analgesy-Meter Type 7200 | used for tail pressure test |
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