وقد اقترح مستقبلات عابرة نوع الفانيليايد المحتملة 1 (TRPV1) في المنطقة فوق مستوى السكان للعب بعض الأدوار في وظيفة الدماغ. هو موضح هنا بروتوكول للحقن intracerebrobrotricular من resiniferatoxin لتجاوز مستوى الحساسية TRPV1 في الفئران. كما يتم عرض إجراءات لبعض اختبارات الألم.
ومن المعروف أن مستقبلات عابرة من النوع الفانيليا 1 (TRPV1)، قناة الموجبة الحرارية، لتحريك الألم في الأعصاب الطرفية. بالإضافة إلى وظيفتها الطرفية، وقد اقترح أيضا مشاركتها في وظائف الدماغ. وقد عرف Resiniferatoxin (RTX) ، وهو ناهض TRPV1 فائقة القدرة ، للحث على إزالة الحساسية على المدى الطويل من TRPV1 ، وكان هذا إزالة الحساسية نهجا بديلا للتحقيق في الأهمية الفسيولوجية للخلايا التعبير عن TRPV1. هنا نحن وصف بروتوكول لعلاج intracerebrobrotricular (i.c.v.) مع RTX في الفئران. يتم وصف الإجراءات لاختبار nociception لحفز TRPV1 الطرفية (اختبار RTX) والتحفيز الميكانيكي (اختبار ضغط الذيل) ثم اتبع. على الرغم من أن الاستجابات nociceptive من الفئران التي كانت تدار RTX i.c.v. كانت مماثلة لتلك التي من مجموعات التحكم، كانت الفئران RTX-i.c.v.تدار غير حساسة للتأثير مسكن من اسيتامينوفين، مما يشير إلى أن i.c.v. العلاج RTX يمكن أن تحفز إزالة الحساسية TRPV1 فوق مستوى الجنين انتقائية. ويمكن استخدام هذا النموذج الماوس كنظام تجريبي مناسب لدراسة دور TRPV1 في وظيفة الدماغ / فوق مستوى العمود الفقري. ويمكن أيضا تطبيق هذه التقنيات على دراسات الإجراءات المركزية للأدوية الأخرى.
تتلقى الحيوانات العديد من المحفزات الفيزيائية والكيميائية من بيئتها من خلال أجهزة الاستشعار على الأعصاب الطرفية. مستقبلات عابرة المحتملة نوع الفانيليا 1 (TRPV1) هي واحدة من الترسيمترية، قنوات الموجبة غير انتقائية التي تعمل كمستشعرات الحرارة1،2، ومن المعروف تفعيل و / أو تعديل TRPV1 لتكون خطوة رئيسية لالنابية في كل من السياقات العادية والتهابات3. على الرغم من أن نمط التعبير العام مثير للجدل ، فإن التعبير عن TRPV1 قد اقترح أيضًا في المناطق فوق مستوى العمود الفقري ، حيث يشارك في أنشطة مختلفة في الدماغ (بما في ذلك nociception4، thermoregulation5، القلق6، اضطراب فرط النشاط في عجز الانتباه7، والصرع8). وعلاوة على ذلك، فقد اقترح مؤخرا أن اسيتامينوفين، وهو مسكن للألم المستخدمة على نطاق واسع، يتوسط تفعيل TRPV1 المركزية لانتزاع عملها مسكن9،10.
إدارة ناهض TRPV1 الزائدة بما في ذلك الكابسايسين وراتنجيفراتوشين (RTX) إلى الحيوانات يؤدي إلى موت الخلايا العصبية TRPV1 إيجابية وطويلة الأمد إزالة الحساسية لناهضات TRPV111,12. جنبا إلى جنب مع التطبيق المحلي (داخلthecal13،14، intracisternal15،16،17، و intraganglional18) ، وقد وفرت هذه الطريقة الاستئصال الكيميائية وسيلة بديلة للتحقيق في الوظائف الفسيولوجية من TRPV1. لقد أبلغنا مؤخرا أن حقن intracerebrobrotricular (i.c.v.) من RTX يمنع تأثير مسكن من الأسيتامينوفين في الفئران، مما يشير إلى أن الحساسية TRPV1 فوق مستوىانتقائية 19. في هذه المخطوطة، نقدم البروتوكول الدقيق لحقن i.c.v. واختبارات الألم اللاحقة.
الحقن المباشر للأدوية في البطينين في الدماغ يجعل من الممكن لدراسة آثارها المركزية في حين الحد من أي آثار هامشية. إجراء الحقن i.c.v. المقدمة هنا هو تعديل للطريقة التي ذكرتها هالي وماكورميك20. هذه الطريقة بسيطة تنطوي على إدخال إبرة الحقن في البطينين الجانبي من خلال خياطة الإكلين ولا تتطلب أي معدات خاصة أو إجراءات جراحية للتكبيل.
التطبيق المحلي المحيطي لـ TRPV1 يثير إحساسًا بألم حارق والتهاب عصبي. الفئران التي يتم التعامل معها بشكل نظامي مع RTX، و الفأر TRPV1-KO، غير حساسة لهذا التحفيز13. لقد قمنا بالحقن داخل محطة الإذاعة والتلفزيون (RTX) لتأكيد الحفاظ على TRPV1 الطرفية في RTX-i.c.v. الفئران. هذا الأسلوب هو تعديل للتقليدية formalin اختبار21.
وقد أفيد أن الفئران تعامل بشكل نظامي مع RTX و TRPV1- KO الفئران تظهر عتبة طبيعية للمحفزات الميكانيكية11,13,22. هنا نقدم إجراء لاختبار ضغط الذيل لاختبار التغييرات في تأثير مسكن أسيتامينوفين.
كل هذه الإجراءات هي الأرثوذكسية وتنوعا، ويمكن تطبيقها على دراسات الأدوية الأخرى.
الخطوة الأكثر أهمية في هذه التجارب هو نجاح حقن i.c.v. تقنية الحقن i.c.v. المستخدمة هنا بسيطة جدا ولكنها تتطلب بعض الممارسة. قبل التجارب، ينصح ممارسة مع الأصباغ (على سبيل المثال 0.5٪ trypan الأزرق في المالحة). إذا تم إجراء الحقن بشكل صحيح ، يجب أن تكون علامة الإبرة واضحة على خياطة الإكليل وينبغي أن تكو…
The authors have nothing to disclose.
اي.
Resiniferatoxin | LKT Laboratories | R1774 | used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test |
Acetaminophen | IWAKI SEIYAKU | gifted from IWAKI SEIYAKU | |
Pentobarbital sodium salt | Tokyo Chemical Industry | P0776 | used for anesthesia |
Ethanol (99.5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | used for dissolving RTX |
Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | used for dissolving RTX |
25 mL microsyringe | Hamilton | 1702LT | used for i.c.v. injection |
100 mL microsyringe | Hamilton | 1710LT | used for intraplantar injection |
26-gauge disposable needle | TERUMO | NN-2613S | used for i.c.v. injection |
30-gauge disposable needle | NIPRO | 01134 | used for intraplantar injection |
Pressure meter | Ugo Basile | Analgesy-Meter Type 7200 | used for tail pressure test |