Summary

マウスにおけるリントレブレブロナートキシンと疼痛検査によるイントレーブレブロナーチキュラー治療

Published: September 02, 2020
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Summary

脊髄領域における一過性受容体電位バニロイドタイプ1(TRPV1)は、脳機能においていくつかの役割を果たすと示唆されている。ここで説明する、マウスにおける上髄TRPV1脱感作のためのリントレーブレベンタリシンのリントレーバラトキシン注射のためのプロトコルである。いくつかの疼痛検査の手順も提示される。

Abstract

一過性受容体電位バニロイドタイプ1(TRPV1)は、熱感受性カチオンチャネルであり、末梢神経の疼痛を引き起こすことが知られている。その末梢機能に加えて、脳機能への関与も示唆されている。超強力なTRPV1アゴニストであるレジンイフェラトキシン(RTX)は、TRPV1の長期脱感作を誘発することが知られており、この脱感作はTRPV1発現細胞の生理的関連性を調べる代替アプローチとなっています。ここでは、マウスにおけるRTXによるイントレーブレブロナーリク(i.c.v.)治療のためのプロトコルについて説明する。末梢TRPV1刺激(RTX試験)および機械的刺激(テール圧試験)に対する分光試験の手順を説明する。RTX i.c.v.を投与されたマウスの不可解な応答は対照群のものと同等であったが、RTX-i.c.v.投与マウスはアセトアミノフェンの鎮痛効果に鈍感であったが、i.c.v.RTX治療は脊髄選択的TR1脱感作を誘導できることを示唆した。本マウスモデルは、脳/脊髄機能におけるTRPV1の役割を研究するための便利な実験システムとして使用することができる。これらの技術は、他の薬物の中心的な作用の研究にも適用することができる。

Introduction

動物は、周辺神経のセンサーを通じて、環境から様々な物理的および化学的刺激を受けます。一過性受容体電位バニロイドタイプ1(TRPV1)は、熱センサ1、2、2およびTRPV1の活性化および/または変調として作用する熱感受性、非選択的カチオンチャネルの1つであり、正常および炎症性の両方の文脈におけるノシセプションの重要なステップであることが知られている3。全体的な発現パターンは議論の余地があるが、TRPV1の発現は、脊髄領域において、様々な脳活動(ノシセプション4、体温調節5、不安6、注意欠陥多動性障害7、およびてんかん8を含む)に関与することが示唆されている。さらに、最近、広く使用されている鎮痛剤であるアセトアミノフェンが、その鎮痛作用9,1010を惹起する中枢TRPV1の活性化を媒介することが示唆されている。

動物にカプサイシンおよびレジンイフェラトキシン(RTX)を含む過剰なTRPV1アゴニストの投与は、TRPV1陽性ニューロンの死およびTRPV1アゴニスト11、12,12への長期脱感作をもたらす。局所的な適用(内テカル13、14、内膜13,1515、16、17、16,17および神経節内18)と組み合わせることで、この化学的アブレーションアプローチは、TRPV1の生理学的機能を調査する別の方法を提供している。我々は最近、イントレーレブロナートラリカル(すなわち.c.v.)の注入がマウスにおけるアセトアミノフェンの鎮痛効果を阻害することを報告し、上髄選択的TRPV1脱感作19を示唆している。本稿では、i.c.v.注射とその後の疼痛検査のための正確なプロトコルを提示する。

脳の心室への薬物の直接注入は、任意の末梢効果を最小限に抑えながら、その中心的な効果を研究することが可能になります.ここで示すi.c.v.射出手順は、ヘイリーとマコーミック20によって報告された方法の変更です。この方法は、冠状縫合を通して側心室に注射針を挿入することを含む簡単であり、cannulationのための特別な装置または外科的処置を必要としない。

TRPV1アゴニストの末梢局所応用は、灼熱の痛みの感覚および神経因性炎症を呼び起こす。RTXで全身処理されるマウス、およびTRPV1-KOマウスは、この刺激13に対して無神経である。RTX-i.c.vにおける末梢TRPV1の保存を確認するために、RTX(RTX試験)の板腔内注入を行った。マウス。この方法は、従来のホルマリン試験21の改変である。

RTXおよびTRPV1-KOマウスで全身的に処置されたマウスは、機械的刺激11、13、2213,22に対して正常な閾値を示すことを報告されている。11ここでは、アセトアミノフェンの鎮痛効果の変化をテストするためのテール圧力試験の手順を提示します。

これらの手順はすべて正統性と汎用性があり、他の薬物の研究に適用することができます。

Protocol

ここで使用される実験プロトコルはすべて武蔵野大学動物の世話と使用委員会によって承認されました。雄のddYマウス(SLC、静岡、日本)は、水と食物のアドリビタムの実験の前に、少なくとも7日間、12時間の明暗サイクル下で飼育した。5週齢または6週齢のマウスを実験に使用した。 1. 薬物の調製 Rtx注:アルコール性RTX溶液は、重度の皮膚の火傷や…

Representative Results

i.c.v.処理マウスは、その外観、自発的な活動、体重19 およびコア体温に明らかな異常を示さない(車両処置群、38.4±0.3°C、n=6;RTX処理基は、38.7±0.2°C、n=6)。 図2A-B-Bは、RTXの板腔内注射に対するs.c.-またはi.c.v.処置マウスの応答性を示す。車両処置マウスの舐め/噛み付き行…

Discussion

これらの実験で最も重要なステップは、i.c.v. インジェクションの成功です。ここで使用される i.c.v. 射出技術は非常に簡単ですが、いくつかの練習が必要です。実験の前に、染料(例えば生理食糸で0.5%トリパンブルー)を用いて練習することをお勧めします。注射が正しく行われる場合、針マークは冠状縫合糸に明らかであり、注入された染料は対側心室と第3心室に存在するべきである。また…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

なし。

Materials

Resiniferatoxin LKT Laboratories R1774 used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test
Acetaminophen IWAKI SEIYAKU gifted from IWAKI SEIYAKU
Pentobarbital sodium salt Tokyo Chemical Industry P0776 used for anesthesia
Ethanol (99.5) Wako Pure Chemical Industries 057-00456 used for dissolving RTX
Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate Wako Pure Chemical Industries 161-21621 used for dissolving RTX
25 mL microsyringe Hamilton 1702LT used for i.c.v. injection
100 mL microsyringe Hamilton 1710LT used for intraplantar injection
26-gauge disposable needle TERUMO NN-2613S used for i.c.v. injection
30-gauge disposable needle NIPRO 01134 used for intraplantar injection
Pressure meter Ugo Basile Analgesy-Meter Type 7200 used for tail pressure test

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Cite This Article
Fukushima, A., Fujii, M., Ono, H. Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice. J. Vis. Exp. (163), e57570, doi:10.3791/57570 (2020).

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