Den forbigående reseptoren potensielle vanilloid type 1 (TRPV1) i supraspinal regionen har blitt foreslått å spille noen roller i hjernefunksjonen. Beskrevet her er en protokoll for intracerebroventrikulær injeksjon av harpiksiferatoxin for supraspinal TRPV1 desensibilisering hos mus. Prosedyrer for noen smertetester presenteres også.
Den forbigående reseptoren potensielle vanilloid type 1 (TRPV1), en termosensitiv kation kanal, er kjent for å utløse smerter i perifere nerver. I tillegg til sin perifere funksjon har dets engasjement i hjernefunksjoner også blitt foreslått. Harpiksiferatoxin (RTX), en ultrapotent TRPV1 agonist, har vært kjent for å indusere langsiktig desensibilisering av TRPV1, og denne desensibiliseringen har vært en alternativ tilnærming for å undersøke den fysiologiske relevansen av TRPV1-uttrykkende celler. Her beskriver vi en protokoll for intracerebroventrikulær (i.c.v.) behandling med RTX hos mus. Prosedyrer er beskrevet for testing av nociception til perifer TRPV1 stimulering (RTX test) og mekanisk stimulering (haletrykktest) deretter følge. Selv om de nociceptive responsene til mus som hadde blitt administrert RTX i.c.v. var sammenlignbare med de av kontrollgruppene, var RTX-i.c.v.-administrerte mus ufølsomme for den smertestillende effekten av paracetamol, noe som tyder på at RTX-behandling kan indusere suppinrasal-selektiv TRPV1 desensibilisering. Denne musemodellen kan brukes som et praktisk eksperimentelt system for å studere rollen som TRPV1 i hjernen / supraspinalfunksjonen. Disse teknikkene kan også brukes på studier av andre legemidlers sentrale handlinger.
Dyr får ulike fysiske og kjemiske stimuli fra sitt miljø gjennom sensorer på perifere nerver. Den forbigående reseptoren potensielle vanilloid type 1 (TRPV1) er en av de termosensitive, ikke-selektive kationkanaler som fungerer somvarmesensorer 1,,2,og aktivering og / eller modulering av TRPV1 er kjent for å være et viktig skritt for nociception i både normale og inflammatoriske sammenhenger3. Selv om det generelle uttrykksmønsteret er kontroversielt, har uttrykk for TRPV1 også blitt foreslått i supraspinalregioner, som er involvert i ulike hjerneaktiviteter (inkludert nociception4,termoregulering5,angst6,oppmerksomhetssvikt hyperaktivitetsforstyrrelse7og epilepsi8). Videre har det nylig blitt foreslått at paracetamol, et mye brukt smertestillende middel, formidler aktiveringen av sentrale TRPV1 for å fremkalle sin smertestillende virkning9,10.
Administrasjon av overflødig TRPV1 agonist inkludert capsaicin og harpiksiferatoxin (RTX) til dyr fører til død av TRPV1-positive nevroner og langvarig desensibilisering til TRPV1 agonister11,12. Kombinert med lokal applikasjon (intratekal13,14, intraisternal15,,16,,17og intraganglional18),har denne kjemiske ablasjontilnærmingen gitt en alternativ måte å undersøke de fysiologiske funksjonene til TRPV1. Vi har nylig rapportert at intracerebroventrikulær (i.c.v.) injeksjon av RTX hemmer den smertestillende effekten av paracetamol hos mus, noe som tyder på supraspinal-selektiv TRPV1 desensibilisering19. I dette manuskriptet presenterer vi den nøyaktige protokollen for i.c.v. injeksjon og påfølgende smertetester.
Direkte injeksjon av legemidler i hjernens ventrikkler gjør det mulig å studere sine sentrale effekter samtidig som de minimaliserer perifere effekter. I.c.v. injeksjon prosedyren presentert her er en endring av metoden rapportert av Haley og McCormick20. Denne metoden er enkel å involvere innsetting av en injeksjonsnål i laterale ventriklene gjennom koronal sutur og krever ikke noe spesielt utstyr eller kirurgiske prosedyrer for hermetikk.
Perifer lokal bruk av TRPV1 agonister fremkaller en brennende smertefølelse og nevrogen betennelse. Mus som behandles systemisk med RTX, og TRPV1-KO-mus, er ufølsomme for dennestimuleringen 13. Vi har utført intraplantarinjeksjon av RTX (RTX-test) for å bekrefte bevaring av perifer TRPV1 i RTX-i.c.v. mus. Denne metoden er en modifikasjon av den konvensjonelle formalin test21.
Det har blitt rapportert at mus systemisk behandlet med RTX og TRPV1-KO mus viser en normal terskel for mekaniske stimuli11,,13,,22. Her presenterer vi en prosedyre for haletrykktesten for testing av endringer i den smertestillende effekten av paracetamol.
Alle disse prosedyrene er ortodokse og allsidige, og kan brukes på studier av andre stoffer.
Det mest kritiske trinnet i disse eksperimentene er suksessen til i.c.v. injeksjon. I.c.v. injeksjon teknikk som brukes her er ganske enkel, men krever litt praksis. Før eksperimenter anbefales trening med fargestoffer (f.eks. 0,5 % trypan blå i saltvann). Hvis injeksjonen utføres riktig, bør et nålemerke være tydelig på koronarsuturen og det injiserte fargestoffet skal være tilstede i den kontralaterale ventrikkelen og den tredje ventrikkelen. Videre bør tvangsinnsetting unngås under injeksjon. Hvis nålespiss…
The authors have nothing to disclose.
Ingen.
Resiniferatoxin | LKT Laboratories | R1774 | used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test |
Acetaminophen | IWAKI SEIYAKU | gifted from IWAKI SEIYAKU | |
Pentobarbital sodium salt | Tokyo Chemical Industry | P0776 | used for anesthesia |
Ethanol (99.5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | used for dissolving RTX |
Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | used for dissolving RTX |
25 mL microsyringe | Hamilton | 1702LT | used for i.c.v. injection |
100 mL microsyringe | Hamilton | 1710LT | used for intraplantar injection |
26-gauge disposable needle | TERUMO | NN-2613S | used for i.c.v. injection |
30-gauge disposable needle | NIPRO | 01134 | used for intraplantar injection |
Pressure meter | Ugo Basile | Analgesy-Meter Type 7200 | used for tail pressure test |