Supraspinal bölgede geçici reseptör potansiyel vanilloid tip 1 (TRPV1) beyin fonksiyonubazı roller oynamak için önerilmiştir. Burada açıklanan farelerde supraspinal TRPV1 duyarsızlaştırma için resiniferatoxin intracerebroventriküler enjeksiyon için bir protokoldür. Bazı ağrı testleri için prosedürler de sunulmaktadır.
Geçici reseptör potansiyel vanilloid tip 1 (TRPV1), bir termosensit katyon kanalı, periferik sinirlerde ağrı tetiklediği bilinmektedir. Periferik işlevine ek olarak, beyin fonksiyonlarında katılımı da önerilmiştir. Ultragüçlü bir TRPV1 agonisti olan Resiniferatoksinin (RTX), TRPV1’in uzun süreli duyarsızlaşmasına neden olduğu bilinmektedir ve bu duyarsızlaştırma, TRPV1 ifade eden hücrelerin fizyolojik önemini araştırmak için alternatif bir yaklaşım olmuştur. Burada farelerde RTX ile intracerebroventricular (i.c.v.) tedavisi için bir protokol açıklıyoruz. Periferik TRPV1 stimülasyonu (RTX testi) ve mekanik stimülasyon (kuyruk basınç testi) sonra takip nosiception test etmek için prosedürler açıklanmıştır. RTX i.c.v. uygulanan farelerin nosiseptif yanıtları kontrol gruplarınınkilerle karşılaştırılabilir olmasına rağmen, RTX-i.c.v.-uygulanan fareler asetaminofenin analjezik etkisine duyarsız dı, bu da i.c.v. RTX tedavisinin supraspinal-selektif TRPV1 duyarsızlaşmasına neden olabileceğini düşündürmektedir. Bu fare modeli beyin / supraspinal fonksiyon TRPV1 rolünü incelemek için uygun bir deneysel sistem olarak kullanılabilir. Bu teknikler diğer ilaçların merkezi eylemlerinin çalışmalarına da uygulanabilir.
Hayvanlar çevre sinirlerindeki sensörler aracılığıyla çevrelerinden çeşitli fiziksel ve kimyasal uyaranlar alırlar. Geçici reseptör potansiyel vanilloid tip 1 (TRPV1) ısı sensörleri1,,2olarak hareket eden termoduyar, selektif olmayan katyon kanallarından biridir ve TRPV1’in aktivasyonu ve/veya modülasyonunun hem normal hem de inflamatuar bağlamlarda nosisepsiyon için önemli bir adım olduğu bilinmektedir3. Genel ifade deseni tartışmalı olmasına rağmen, TRPV1 ekspresyonu da supraspinal bölgelerde önerilmiştir, çeşitli beyin aktivitelerine dahil olmak (nosiceptiondahil 4, termoregülasyon5, anksiyete6, dikkat eksikliği hiperaktivite bozukluğu7, ve epilepsi8). Ayrıca, son zamanlarda asetaminofen, yaygın olarak kullanılan ağrı kesici, merkezi TRPV1 aktivasyonu aracılık onun analjezik eylem ortaya çıkarmak için ileri sürülmüştür9,10.
Kapsaisin ve resiniferatoksin (RTX) dahil olmak üzere aşırı TRPV1 agonist uygulanması TRPV1-pozitif nöronların ölümüne ve TRPV1 agonistleri için uzun süreli duyarsızlaştırma11yol açar,12. Lokal uygulama ile birlikte (intrathecal13,14, intrasisternal15,16,17, ve intraganglional18), Bu kimyasal ablasyon yaklaşımı TRPV1 fizyolojik fonksiyonlarını araştırmak için alternatif bir yol sağlamıştır. Yakın zamanda RTX intracerebroventricular (i.c.v.) enjeksiyonunun farelerde asetaminofenin analjezik etkisini inhibe ettiğini, supraspinal-selektif TRPV1 duyarsızlaştırmayı önerdiğini bildirdik19. Bu yazıda i.c.v. enjeksiyonu ve sonraki ağrı testleri için kesin protokolü satıyoruz.
Beynin ventriküllerine doğrudan ilaç enjeksiyonu, herhangi bir çevresel etkiyi en aza iken onların merkezi etkilerini incelemeyi mümkün kılar. Burada sunulan i.c.v. enjeksiyon prosedürü Haley ve McCormick20tarafından bildirilen yöntemin bir değişikliktir. Bu yöntem koronal sütür yoluyla lateral ventriküliçine bir enjeksiyon iğnesi takılması içeren basit ve kanülasyon için herhangi bir özel ekipman veya cerrahi prosedürler gerektirmez.
TRPV1 agonistlerin periferik lokal uygulama yanma ağrı hissi ve nörojenik inflamasyon çağrıştırıyor. RTX ve TRPV1-KO fareler ile sistemsel olarak tedavi edilen fareler, bu uyarıma duyarsızdır13. RTX-i.c.v’de periferik TRPV1’in korunmasını doğrulamak için rtx (RTX testi) intraplantar enjeksiyonu yaptık. Fare. Bu yöntem konvansiyonel formalin testi21bir değişikliktir.
Bu fareler sistematik RTX ve TRPV1-KO fareler ile tedavi mekanik uyaranlara normal bir eşik göstermek bildirilmiştir11,13,22. Burada asetaminofen in analjezik etkisi değişiklikleri test etmek için kuyruk basınç testi için bir prosedür salıyoruz.
Tüm bu prosedürler ortodoks ve çok yönlüdür ve diğer ilaçların çalışmalarına uygulanabilir.
Bu deneylerdeki en kritik adım i.c.v. enjeksiyonunun başarısıdır. Burada kullanılan i.c.v. enjeksiyon tekniği oldukça basittir ancak bazı pratik ler gerektirir. Deneylerden önce boyalarla pratik yapmak (örn. tuzluda %0,5 trypan mavisi) önerilir. Enjeksiyon doğru yapılırsa, koronal sütür üzerinde bir iğne izi belirgin olmalı ve enjekte edilen boya kontralateral ventrikül ve üçüncü ventrikül de bulunmalıdır. Ayrıca enjeksiyon sırasında zorla takılmaktan kaçınılmalıdır. İğne ucu korona…
The authors have nothing to disclose.
Hiçbiri.
Resiniferatoxin | LKT Laboratories | R1774 | used for s.c./i.c.v. pretreatments and the RTX test |
Acetaminophen | IWAKI SEIYAKU | gifted from IWAKI SEIYAKU | |
Pentobarbital sodium salt | Tokyo Chemical Industry | P0776 | used for anesthesia |
Ethanol (99.5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | used for dissolving RTX |
Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | used for dissolving RTX |
25 mL microsyringe | Hamilton | 1702LT | used for i.c.v. injection |
100 mL microsyringe | Hamilton | 1710LT | used for intraplantar injection |
26-gauge disposable needle | TERUMO | NN-2613S | used for i.c.v. injection |
30-gauge disposable needle | NIPRO | 01134 | used for intraplantar injection |
Pressure meter | Ugo Basile | Analgesy-Meter Type 7200 | used for tail pressure test |