Summary
כאן, אנו מציגים את פרוטוקול כדי לבדוק התקפה אלימה צמח עם המחלה צמח Magnaporthe grisea. דוח זה לתרום הקרנת בקנה מידה גדול pathotypes של פטריות מבודד, לשמש נקודת התחלה מצוינת להבנת מנגנוני עמידות הצמחים במהלך ההתרבות מולקולרית.
Abstract
צמחים בעלי מערכת חזקה כדי להגן על עצמם מפני איומים פוטנציאליים על ידי פטריות פתוגניים. בצמחים חשוב בחקלאות, אולם, אמצעים הנוכחי כדי להלחם פתוגנים כאלה הוכיחו שמרן מדי, לכן, לא מספיק יעיל, והם יכול העלול להוות סיכונים סביבתיים. לכן, זה הכרחי מאוד כדי זיהוי המארח-התנגדות גורמים כדי לסייע מחלות השליטה באופן טבעי דרך זיהוי עמיד germplasm, הבידוד, אפיון גנים עמידות ו רבייה מולקולרית של הזנים עמיד. בהקשר זה, יש צורך להקים שיטה מדויקת, מהירה, בקנה מידה גדול חיסון להתרבות ולפתח גנים עמידות צמחים. האורז הפיצוץ תסמיני המחלה חמורה של גורם Magnaporthe grisea פטריות פתוגניות, תשואות הפסדים. לאחרונה, מ grisea התפתחה אורגניזם מודל לומד את המנגנונים של אינטראקציות צמח-פטריות פתוגניות. לפיכך, מדווחים על התפתחות הצמח התקפה אלימה מתודת בדיקה ספציפית עבור grisea מ'. שיטה זו מספקת חיסון בתרסיס עם השעיה conidial וגם ופצעו חיסון עם קוביות תפטיר או טיפות השעיה conidial. השלב מפתח של שיטת חיסון wounding אורז מנותק עלים הוא לעשות פצעים על עלי הצמח, הנמנעת כל הפרעה הנגרמת על ידי המארח חדירה ההתנגדות. זה ספריי ופצעו פרוטוקול תורמת הקרנת מהירה, מדויקת, בקנה מידה גדול pathotypes של grisea מ' מבודד. זה משולב, משיטת ההדבקה צמח שיטתית ישמש נקודת התחלה מצוינת להשגת פרספקטיבה רחבה של סוגיות פתולוגיה.
Introduction
הפיצוץ אורז, הנגרמת על ידי מ grisea, היא אחת המחלות הכי רציני אורז הזנים ברחבי העולם1,2. התהליך שבאמצעותו מ grisea מדביק צמחים פונדקאים כולל ייצור conidia, מצורף משטח, נביטה conidia עם היווצרות appressorium, היווצרות של חדירה פג ובידול hypha זיהומית, ולהפיץ מחלה 3. כל השלבים האלה שכיחים אצל רבים אחרים צמח פתוגניים פטריות, ומונעת, ואכן, מצור. על כל שלב בודד הזיהום של צמחים פונדקאים. בשל החשיבות הכלכלית שלה, גנטי ללקוחות שלנו, מ grisea התפתחה אורגניזם מודל לומד את המנגנונים של צמח-פטריות פתוגניות אינטראקציות1,4. לכן, לימוד הבסיס המולקולרי של אלה שלבים התפתחותיים מ grisea יעזור להבהיר את המנגנונים המולקולריים שבבסיס פטריות פתוגניות וזיהוי של המועמד גנים היעד של ההקרנה, עיצוב הרומן קוטלי פטריות5.
דיווחים אחרונים בנוגע grisea מ זיהום התמקדו המנגנונים המולקולריים של שלבי טרום חדירה, במיוחד את conidiation, היווצרות appressorium, את היתדות חדירה ואת הצמיחה זיהומיות3, 6. לכן חיוני לפתח פרוטוקול מפורט לבדיקת זיהום grisea מ' . במסמך זה, אנו מציגים שיטה מפורטת עבור בדיקת זיהום אשר מנצל מבחני זיהום בתיווך ספריי עם השעיה conidial, את חיסון של פצעים עם תקעים mycelial של grisea מ'. בדו ח זה, הפרוטוקול מתמקד התרבות של זנים, הכנת הפתרון conidiation ריסוס, חיסון בתיווך הכנס mycelial של צמחים עם grisea מ'. שלבים אלה מתוארים פירוט בהמשך, ומבט סכמטית מציג את זרימת העבודה כולו של השיטה, פצע אופייני מוצגות דמויות 1 ו- 2, בהתאמה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. ספריי חיסון עם השעיה של Conidia מ grisea
-
תרבות פטרייתי M.grisea
- היכונו המדיום תרבות שיבולת שועל אגר (OTA) עגבניות זני פטריות.
- שוקל 30-50 גר' שיבולת שועל, להוסיף את זה לרשימת 800 מ ל מים מזוקקים/יונים (ddH2O), מרתיחים את התערובת למשך 30 דקות בסיר חשמלי.
- סנן את המיץ שיבולת שועל מבושלים לתוך כשהספל דרך פיסת גזה.
- להוסיף 150 מ של מיץ עגבניות, 20 גר' אגר פילטרט של במיכל ולהוסיף ddH2O עד 1,000 מ ל.
-
הכנה של חומרים ניסיוניים
- להשרות כ-50 זרעים של אורז (אורז sativa) לדבורי Lijiangxintuan-heigu (LTH) ב- ddH2O עבור בתלת-ממד או להשרות כ-50 זרעי שעורה (מבטיח הזהבשעורה מצויה cv) ב- ddH2O עבור 1 י.
- עוטף את זרעי שעורה או אורז גזה, לנבוט אותם על נייר סינון לח ב 30 צלחות פטרי בקוטר של 10 ס"מ על 10 ס"מ ב 28 º C. הפעם נביטה של זרעי אורז בערך 2-3 d, הפעם נביטה של זרעי שעורה הוא בערך 2 d. הלחות היחסית בחממה הוא כ-70%.
- לשתול את שתילי אורז או שעורה בעציצים באמצעות אדמת השתילה והשקיית בלוק, ואז לכסות אותם עם שכבה של ורמיקוליט.
- מקום הצמחים מתאימים חממה או צמיחה ארון 25 ° c כ 1 ~ 2 שבועות.
- לחתוך 3 שכבות של נייר סינון במעגלים עם מספריים כירורגיים סטרילי (כל מעגל צריך להיות בקוטר של 8 ס מ) ומניחים אותם על גבי צלחות פלסטיק סטרילית 100 מ מ.
- להוסיף ddH2O כל מנה להשרות נייר הסינון.
- ודא שהנייר מסנן רטוב לחלוטין אך להוסיף מים נוספת.
- הסר את כל המים העודפים עם משאבה ואקום.
- מניחים 2 קיסמים סטרילי לתוך המנה תרבות כדי לתמוך את האורז/השעורה עלים; מרחב הקיסמים ~ 2-3 ס מ זו מזו.
- לאסוף את העלים של האורז 2 שבועות לאחר זורעים את הזרעים או לקחת עלי השעורה 7 d לאחר זורעים את הזרעים.
- באמצעות 4 כדי 6-עלים-שתילים אורז/שעורה, חותכים את החלק התחתון של הגזע ~ 5 ס מ מהחלק העליון ולאסוף את העלים.
-
פרוטוקול חיסון בתרסיס
- תרבות הלחץ פטרייתי על הצלחות OTA חממה ברים, מערכות אינסטלציה (25 ° C) עבור d ~ 4.
- הוסף ~ 2 מ"ל של ddH2O שימוש של 0.5 - פיפטה 5 מ"ל כל צלחת בת 4 יום.
- ללולאה חיסון, לגרד את תפטיר של המתח פראי-סוג grisea מ' , המתח מוטציה לתוך תפטיר פסולת.
- לאסוף את הלכלוך תפטיר, להעביר אותו צלחת חדשה OTA. לוקחים את פסולת תפטיר מכה יבשה על הספסל נקי.
- מכסים את הצלחת עם 3 שכבות של גזה כדי להבטיח את הלחות הדרושים לצמיחה של conidia בחממה ב 25 ° C ביום (14 h), 23 ° C בלילה (10 h) במשך 24-48 שעות.
- להוסיף 2 מ"ל של ddH2O כל מנה, לגרד את conidia בעדינות עם ספוגיות כותנה סטרילי ואחריו סינון דרך 2 שכבות של נייר העדשה. יש להיזהר לא לגרד את פני השטח של המדיום תרבות.
- להעביר את המתלים conidia לתוך צינור 50 מ עם פיפטה µL 100-1, 000.
- צנטריפוגה למשך 5 דקות לכל הפחות של g x 5,000 ב 25 º C.
- הסר את תגובת שיקוע ולאחר resuspend בגדר להיכנע 2 x 10 conidia4 לכל מ"ל 0.025% (v/v) פתרון Tween-20. הפתרון Tween-20 הוא בדרך כלל בערך 10-20 מ.
- שופכים את המתלים נבג לתוך ריסוס ידניים.
- עיקור בערך 10 מ"ל של ההשעיה conidial על גבי העלים אורז של אורז בת שבוע 2 שתילים או שעורה עלים של שתילי שעורה בן יום-7, דגירה אותם 25 ° c בחדר חשוך, לח עבור ה ~ 24 ספריי הצמחים שליטה 0.025% (v/v) פתרון Tween-20.
- להעביר את העלים לתא לח עוד תחת אור ניאון 25 ° c עבור photoperiod של 12 שעות.
- להקליט את תסמיני המחלה ב 5 d לאחר חיסון. בדוק על להבי אורז חולה/שעורה ~ 6 ס מ אורך. האבחון הסטנדרטי לפי מערכת התוצאות להתנגדות הפיצוץ של מכון המחקר אורז הבינלאומי (IRRI). הפרטים של מערכת התוצאות להתנגדות הפיצוץ מוצגים בטבלה 1.
- לצלם את העלים כדי להעריך את הזיהום של זנים שנבדקו. הזיהום נאמד על ידי מספר נגעים לכל 3.6 ס מ2.
2. ופצע חיסון עם קוביות תפטיר או טיפות השעיה Conidial של grisea מ
- באמצעות המחט האנטומי של, לגרד שלושה פצעי ארוך 2-3 ס מ של הוורידים העיקריים של אורז מנותק/שעורה עלים; . שמור על עצמך לא לחדור את העלים.
- לשים את העלים שרוטים קיסמים, ספריי של 0.02% (v/v) פתרון Tween-20 על העלים כדי ליצור שכבה של טיפות.
- חותכים פקק mycelial 0.5 ס מ x 0.5 ס מ עבור כל זן מ grisea (המשלים פראי-סוג, מוטציה, זנים, או זנים אחרים מבחן) של צלחת OTA.
- לשים את אטמי mycelial או µL 25, טיפות השעיה conidial אל הפצועים משאיר דגירה העלים 25 ° c בחדר לחים עבור d 3-8.
- בדוק נגעים ב 5-7 d לאחר חיסון. שיטת הבדיקה היא זהה בשל שיטת חיסון בתרסיס (ראה שלב 1.3.13).
- לבחון על להבי אורז חולה/שעורה ~ 6 ס מ אורך ולצלם אותם כדי להעריך את הזיהום של זנים שנבדקו. הזיהום נאמד על ידי מספר נגעים לכל 3.6 ס מ2.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
זרימת העבודה כולו הטכניקה מוצג באיור1. מבחני זיהום הצמח בוצעו על שתילי אורז רגישים בת 14 יום (או סאטיבה cv CO-39) או רגישים שעורה בן יום-7 עלים (מבטיח הזהבמצויה ה cv)7,8,9. לבדיקת זיהום על העלים אורז, השעיה conidial (1.0 x נבגים5 10/mL) של המתח פראי-סוג grisea מ P131, המתח מוטציה של מחיקה Com1 היו מוכנים, ריססו אז. חשבוני עלה 14 היום בן-רגישים שתילי CO-39, אשר הוחזקו ואז בתוך תא לחה 5 d10. מחוסן-P131 CO-39 משאיר המוצג נגעים חזקים טיפוסי של אורז הפיצוץ, אך העלים מחוסן-Com1 הראו זיהום ברור פגמים, יכול לא זכה זיהום מלא (איור 2א). המתח פראי-סוג P131 הוא זן מתקבל על ידי לך-ליאנג פנג 198818. MoKMT2H null החשבונאי (ΔMoKMT2H) היה מתקבל על ידי סאו ואח . במעבדה שלנו משתמש על המטרה ג'ין החלפת אסטרטגיה11. המוטציה Com1 היתה מבודדת על ידי היאנג. et al. ב אתה-ליאנג פנג מעבדה10.
כדי לבדוק אם ΔMoKMT2H grisea מ עלול להדביק את התאים מארח דרך פצעים, שפשף בכוח עלים של אורז פראי-סוג צמחים חוסנו עם תקעים mycelial של ΔMoKMT2H באמצעות שיטת ריסוס או שיטה ופצע11. העלים היו ספריי-מחוסן עם ΔMoKMT2H חשף פגמים לא ברור הזיהום ΔMoKMT2H לעומת המתח P131/פראי-סוג; עם זאת, ברור פגמים נצפו על העלים מחוסן עם פצעים ΔMoKMT2H ויה (איור 2א). לבחון יותר את זיהום צמח עם עלים שעורה, בריא או עלים פצועים (מבטיח הזהב cv) חוסנו עם טיפות conidial או אטמי mycelial, בהתאמה, Com1, ΔMoKMT2Hאו P131. ב 5 d לאחר חיסון, אורז טיפוסי הפיצוץ נגעים הייתה מפותחת על העלים מחוסן עם ' ΔMoKMT2H ' או ' זן P131, ואילו פחות נגעים קטנים נמצאו על העלים מחוסן עם החשבונאי Com1 (איור 2 B).
איור 1 : ערכת הממחישות צמח זיהום. זרעי הצמח היו מונבטים בקרקע בעציצים פלסטיק (50 מ מ2 x 50 מ מ עמוק, עם חור ניקוז), שני זרעים לכל סיר, השתילים גדלו בחממה. התרבות ועל ההזרקות של הפטריה הפיצוץ מ grisea גדלו על צלחות OTA. עבור conidia ריסוס שיטת חיסון, ההשעיה conidia היה מושעה של 0.02% (v/v) פתרון Tween-20, ריססו את הצמחים אורז/שעורה. עבור שיטת שרוט חיסון, העלים של צמח האורז שרוטים/שעורה היו שם על צלחות פלסטיק, מחוסן לאחר מכן על ידי פקק mycelial או conidia. ואז, כל העלים צמח שטופלו היו תרבותי כהה במשך 24 שעות ביממה, תרבותי אור במשך 12 שעות. לבסוף, נרשם מספר מושבות בתוך יחידות של 3.6 ס מ2 . אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2: Com1 ו MoKMT2H הדרושים לשם היווצרות conidium פתוגניות על אורז עלים. (א) לוח זה מראה חיסון של אורז עלים באמצעות תרסיס conidia (משמאל) או הכנס mycelial (מימין) conidia מ- P131 פראי-סוג grisea מ' , מוטציה Com1או ΔMoKMT2H. עלים אופייני נצפו 7 d לאחר mycelial בתיווך הכנס חיסון, אשר נערך על אורז משופשפים עלים. נגעים אופייניים נצפו 5 d לאחר חיסון בתיווך תקע mycelial. שעורה (B) העלים היו מחוסן ויה conidia ספריי (משמאל) או mycelial תקע (מימין). כפקד טיפול מעושה, הותזו באותו אמצעי אחסון של % 0.025 (v/v) פתרון Tween-20. עבור חיסון הפצע, דמותו של P131 השתנה מ סאו. et al. 11. MoKMT2H של הפטריות ascomycete הוא homolog תפקודית של Ash1, אשר הייתה שם מתילציה H3K4 ו- H3K3611. הבר = 1 ס מ. המוטציות Δcom1 הצטמצמו באופן משמעותי בהתקפה אלימה על שעורה ואורז שתילים10. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
| סולם | תיאור |
| 1 | כתמים חומים קטנים בגודל סיכה-נקודה |
| 2 | קטן roundish מעט מוארך, נמק הנקודות האפורות, כ 1-2 מ מ קוטר, עם שוליים חום שונות. נגעים נמצאות בדרך כלל על העלים העליונים |
| 3 | נגעי כמו 2, אבל מספר משמעותי של הנגע על עלים theupper |
| 4 | הפיצוץ רגישים אופייניים נגעים, 3 מ מ או יותר, להדביק פחות מ- 4% משטח theleaf |
| 5 | הפיצוץ רגישים אופייניים נגעים, 3 מ מ או יותר, המזהם פחות מ- 4-10% של האזור עלה |
| 6 | הפיצוץ רגישים אופייניים נגעים, 3 מ מ או יותר, המזהם פחות מ- 11-25% של האזור עלה |
| 7 | הפיצוץ רגישים אופייניים נגעים, 3 מ מ או יותר, המזהם פחות מ 26-50% של האזור עלה |
| 8 | הפיצוץ רגישים אופייניים נגעים, 3 מ מ או יותר, המזהם פחות מ- 51-75% של האזור עלים, עלים יותר מידי |
| 9 | הפיצוץ רגישים אופייניים נגעים, 3 מ מ או יותר, מדביק יותר מ 75% באזור עלה |
טבלה 1: שיטת הניקוד להתנגדות הפיצוץ. הטבלה מצוטט מן המכון למחקר אורז הבינלאומי (IRRI).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
גנים עמידות למחלות צמחים תפקיד חיוני במניעת זיהומים על ידי פתוגנים, כולל פתוגנים ופטריות1,12. אורז הפיצוץ שימש כמודל להבין את טבעם של פתוגן האוכלוסייה מבנים, וכן לזיהוי צמח ההתנגדות גנים4. לכן, יש צורך לבחון את המחלה ההתנגדות גנוטיפ ואת avirulence אחרים של הזנים העיקריים של צמחי חקלאות בקנה מידה גדול כדי לזהות צמחים עמידים למחלות, כי יכול להיות מעובד באופן רציף. יתר על כן, היתרונות של avirulence אחרים של שדה פתוגנים מחייבים את חלוקת רציונלית אחרים עמידים שונים של המארח זנים12,13. עם זאת, שיטות חיסון להפריע בדרך כלל ההקרנה עבור ההתנגדות ופתוגן זיהוי14,15,16,17.
כאן, אנו מציגים שיטה מהירה ומדויקת לבדוק צמח זיהום. שיטה זו חיסון מתאים לצורך זיהוי צמחים עמידים במהלך גידול ניסויים ושל של פנוטיפ של אוכלוסיה רומא במהלך השיבוט של גנים עמידות. . הנה, הקמנו שיטה מזריקים צמח הפצוע עוזב עם grisea מ'. בגלל ההתנגדות מארח ממלאת תפקיד מרכזי במניעת הפצת חיידק, במבחנה שיטה זו, אשר הפיק פצעים על האורז שנבדקו משאיר מחוסן הפיצוץ אורז על הפצע, הוא נוח ליצירת זיהום ישירות לתוך העלים מבלי לחדור האפידרמיס עלה והקיר תאים באפידרמיס. יתר על כן, שיטה זו חיסון מתאים לגילאי עלים שונים. התוצאות חיסון הן יציב ומדויק. השיטה של ופצעו חיסון יכול לשמש עבור חיסון עם תפטיר כדי לזהות את פתוגניות של זנים פטרייתי אשר מייצרים רק כמויות נמוכות של conidia.
פרוטוקול זה יתרום עוד יותר את ההבנה שלנו של המנגנונים פתוגניים אשר נשמרים פטריות, כמו גם את הגורמים ספציפי פתוגן היתר פטרייה להתנגד, לדכא את מולדת חסינות של המארח שלה13. עם זאת, חיסון הפצע אינה ישימה כאשר מנסים לקבוע את הקצב על פלישה conidial ועל הרחבת תפטיר. אבל במצב טבעי, שיטת חיסון תרסיס יכול שישקפו טוב יותר את פתוגניות של. חיידק. שיטת חיסון בתרסיס קלה לתפעול ומסייעת לשיפור יעילות העבודה. תוצאות אלו המציין שיטה מדוייקת ויציבה חיסון נחוצים להקרנה יחדיו, הצמח גנים עמידות וקביעת פתוגניות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי הפרויקט מחקר מדעי מיוחד של האוניברסיטה לחקלאות של בייג'ינג (YQ201603) ואת הפרויקט המדעי של ועדת חינוך בייג'ינג (KM201610020005).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Filter paper | GE Healthcare brand(Sweden) | 10311387 | |
| 50-mL tube | CORNING(Amercia) | 430290 | |
| Centrifuge | Eppendorf(Amercia) | 5804R | |
| Culture dish | Thermofisher(Amercia) | 150326 | |
| 0.5-5 mL pipette | Eppendorf | 4920000105 | |
| 100-1000uL pipette | Eppendorf | 4920000083 | |
| Vacuum pump | Leybold | D25B | |
| Dissection needle | FST | 26000-35 | |
| Incubator | MEMMERT | PYX313 | |
| Inoculation ring | Greiner Bio One | 731175 |
References
- Li, W. T., et al. A natural allele of a transcription factor in rice confers broad-spectrum blast resistance. Cell. 170 (1), 114-126 (2017).
- Chi, M. H., Park, S. Y., Kim, S., Lee, Y. H. A novel pathogenicity gene is required in the rice blast fungus to suppress the basal defenses of the host. PLoS Pathogens. 5 (4), 1000401 (2009).
- Jia, Y., Valent, B., Lee, F. N. Determination of host responses to Magnaporthe grisea.on detached rice leaves using a spot inoculation method. Plant Disease. 87 (2), 129-133 (2003).
- Ebbole, D. J. Magnaporthe as a model for understanding host-pathogen interactions. Annual Review of Phytopathology. 45, 437-456 (2007).
- Hamer, J. E., Talbot, N. J. Infection-related development in the rice blast fungus Magnaporthe grisea. Current Opinion in Microbiology. 1 (6), 693-697 (1998).
- Howard, R. J., Valent, B. Breaking and entering: host penetration by the fungal rice blast pathogen Magnaporthe grisea. Annual Review of Microbiology. 50, 491-512 (1996).
- Chen, X. L., et al. N-Glycosylation of Effector Proteins by an α-1,3- Mannosyltransferase Is Required for the Rice Blast Fungus to Evade Host Innate Immunity. The Plant Cell. 26 (3), 1360-1376 (2014).
- Zhang, Y., et al. M.ARG1, MoARG5,6 and MoARG7 involved in arginine biosynthesis are essential for growth, conidiogenesis, sexual reproduction, and pathogenicity in Magnaporthe oryzae. Microbiological Research. 180, 11-22 (2015).
- Du, Y. X., et al. A serine/threonine-protein phosphatase PP2A catalytic subunit is essential for asexual development and plant infection in Magnaporthe oryzae. Current Genetics. 59 (1-2), 33-41 (2013).
- Yang, J., et al. A novel protein com1 is required for normal conidium morphology and full virulence in Magnaporthe oryzae. Molecular Plant-Microbe Interactions. 23 (1), 112-123 (2010).
- Cao, Z. J., et al. An ash1-like protein MoKMT2H null mutant is delayed for conidium germination and pathogenesis in Magnaporthe oryzae. BioMed Research International. 2016, 1575430 (2016).
- Bryan, G. T., et al. A single amino acid difference distinguishes resistant and susceptible alleles of the rice blast resistance gene Pi-ta. The Plant Cell. 12 (11), 2033-2045 (2000).
- Zhou, J. M. Plant pathology: a life and death struggle in rice blast disease. Current Biology. 26 (18), 843-845 (2016).
- Guo, M., et al. MoGrr1, a novel F-box protein, is involved in conidiogenesis and cell wall integrity and is critical for the full virulence of Magnaporthe oryzae. Applied Microbiology and Biotechnology. 99 (19), 8075-8088 (2015).
- Talbot, N. J. On the trail of a cereal killer: Exploring the biology of Magnaporthe grisea. Annual Review of Microbiology. 57, 177-202 (2009).
- Wilson, R. A., Talbot, N. J. Under pressure: investigating the biology of plant infection by Magnaporthe oryzae. Nature Reviews Microbiology. 7, 185-195 (2009).
- Jia, Y. L., Lee, F. N., McClung, A. Determination of Resistance Spectra of the Pi-ta and Pi-k Genes to U.S. Races of Magnaporthe oryzae Causing Rice Blast in a Recombinant Inbred Line Population. Plant Disease. 93, 639-644 (2009).
- Peng, Y. L., Shishiyama, J. Temporal sequence of cytological events in rice leaves infected with Pyricularia oryzae. Canadian Journal of Botany. 66 (4), 730-735 (1988).
