نقل الخلايا المناعية السامة للخلايا في نماذج مورين لتكثيفها عديدة الأشكال جليوبلاستوما أورثوتوبيك الإنسان التبني المناظير باستخدام الأشعة
Summary
نقدم هنا، بروتوكول للإعداد وإدارة ستيريوتاكسيك للخلايا الليمفاوية البشرية متمكنة في الفئران العوز تحمل أورام الدماغ الأولية البشرية أورثوتوبيك. وتوفر هذه الدراسة من بين مفهوم إثبات للجدوى وفعالية تسليم إينترابرين إيمونوثيرابيس الخلوية انتيتومور.
Abstract
جليوبلاستوما عديدة الأشكال (GBM)، سرطان الدماغ الأولية الأكثر تواترا والعدوانية لدى البالغين، يرتبط عموما سوء تشخيص، وقد اقترحت العلاجات الفعالة النادرة على مدى العقد الماضي. بين المرشحين الواعدين لتصميم استراتيجيات علاجية جديدة، إيمونوثيرابيس الخلوية قد استهدفت القضاء على الغازية عاليا والكيماوي راديوريسيستانت الخلايا السرطانية، يحتمل في الارتداد السريع وقاتلة من هذا النوع من السرطان. وهكذا، سوف يمثل فرصة فريدة لتحقيق كفاءة administration(s) متمكنة من الخليج للحاسبات الآلية–رد الفعل الخلايا المناعية المستجيبة، مثل الخلايا اللمفية تي Vϒ9Vδ2 البشرية، محيط الورم والتركز الشديد للعوامل العلاجية مباشرة في الموقع من الأورام الخبيثة في الدماغ. نقدم هنا، بروتوكول للإعداد وإدارة ستيريوتاكسيك للخلايا الليمفاوية البشرية متمكنة في الفئران العوز تحمل أورام الدماغ الأولية البشرية أورثوتوبيك. وتوفر هذه الدراسة السريرية من-مفهوم إثبات للجدوى وفعالية هذه إيمونوثيرابيس الخلوية التي تعتمد على حقن المناظير باستخدام الأشعة من الخلايا الليمفاوية البشرية متمكنة داخل أسرة الورم إينترابرين انتيتومور.
Introduction
الخليج للحاسبات الآلية (من الصف الرابع astrocytoma)، هو سرطان الدماغ الأولية الأكثر تواترا والعدوانية لدى البالغين. على الرغم من العلاجات العدوانية التي تجمع بين الجراحة والعلاج الكيميائي الإذاعة، ما زال GBM مقترنة تكهن سيئة للغاية (متوسط بقاء 14.6 شهرا و ٪ 2-السنة-وفيات > 73)1. وهذا يدل على أن السلف علاجية فعالة قليلة وقد تم التحقق من صحة على مدى العقد الماضي2. ومن بين المرشحين لتصميم استراتيجيات علاجية أكثر فعالية3،،من45، يتم استكشاف إيمونوثيرابيس6 حاليا لتعقب والقضاء على درجة عالية من الورم الغازية ومقاومة لراديو/الكيماوي الخلايا، ويشتبه في أنها لمساهمتها الرئيسية في انتكاس الورم السريع وقاتلة7. كانت مختلف الأهداف المناعية المحتملة إيمونوثيرابيس المحددة والمقترحة ل، التي تنطوي على الطبيعية أو αβ المعدلة أو لمفاوية T ϒδ مثل المستضدات الورم الخاصة بالخليج للحاسبات الآلية أو الجزيئات الناجمة عن الإجهاد8،9، 10. إمكانية تول المستجيبة الخلايا المناعية GBM–رد الفعل المحدد يمثل فرصة فريدة لتسليم كميات مرتفعة من الخلايا اللمفية المستجيب مباشرة إلى موقع خبيثة المتبقية. لدعم هذه الاستراتيجية، ونحن قد أظهرت مؤخرا أن النماذج القائمة على الفئران العوز تحمل تكثيفها GBM البشرية الأساسية أورثوتوبيك أمانة الخص تطوير أورام الدماغ في الخليج للحاسبات الآلية المرضى9،11. وعلاوة على ذلك، استخدمت هذه النماذج لإثبات كفاءة انتيتومور قوية لنقل أدوبتيفيلي متمكنة من الخلايا اللمفية Vϒ9Vδ2T البشرية.
ويصف هذا البروتوكول الخطوات التجريبية الهامة لتحقيق إيمونوثيرابيس المناظير باستخدام الأشعة لاورام الدماغ، مثل الخليج للحاسبات الآلية، استناداً إلى نقل الخلايا اللمفية تي متمكنة التبني. تبين المادة: (ط) التضخيم من العلاج المناعي متمكنة المستجيب تي الخلايا الليمفاوية، مثل اللمفاويات Vϒ9Vδ2T البشرية؛ (ثانيا) إعداد هذه الخلايا اللمفية تي المستجيب للحقن؛ (ثالثا) إجراءات الإدارة المناظير باستخدام الأشعة داخل الدماغ، والقرب من الورم. يوفر هذا المقال أيضا نظرة ثاقبة سلوك هذه المستجيبة الخلوية بعد الحقن بالمناظير باستخدام الأشعة.
ويستند النهج العلاجية المقدمة هنا حقن 20 × 106 المستجيب الخلايا كل جرعة لكل الماوس العوز الحاملة لورم الدماغ. مطلوب خطوة توسع أولى في المختبر لإنتاج كميات كبيرة من الخلايا المناعية. ولذلك التوسعات خلية غير محددة يتم تنفيذها باستخدام فيتوهيماجلوتينين (فا-L) والمشع متمكنة تغذية الخلايا: خلايا الدم الطرفية وحيدات النوى (ببمكس) من الجهات المانحة صحية وخلية حولت ابشتاين بار فيروس EBV ب-ليمفوبلاستويد خطوط (بلكلس)، مستمدة من ببمكس بالعدوى في المختبر مع الثقافة التي تحتوي على EBV طافية من خط خلية مرموز B95-8، حضور 1 ميكروغرام/مل السيكلوسبورين-أ
مقارنة مع الخلايا المناعية المستجيب GBM المتفاعلة ومختارة من المختبر فحوصات9. يتم تنشيط هذه الخلايا المستجيب وتضخيمه باستخدام البروتوكولات القياسية، وفقا لطبيعتها (مثلاً، لمفاوية Vγ9Vδ2 T البشرية9 أو فيروس القوباء المضادة البشرية αβ تي لمفاوية12) مع درجة نقاء دنيا > 80%، كشكل روتيني التحقق بواسطة تحليل سيتوميتريك. ينطبق الإجراء توسيع الخلية المفصلة أدناه على مختلف المجموعات الفرعية في اللمفاويات البشرية.
Protocol
Representative Results
Discussion
تحديد تحويل التبني بشكل أصلي أو خلايا المستجيب مأمن هندسيا يمثل نهجاً واعداً لكفاءة علاج الأورام، مثل سرطان الدماغ إينفيلتراتيفي، العناية بالحد من ريكتيفيتيس ضد الخلايا غير تحويل15، 17،،من 1618. ومع ذلك، النظام العصبي ال…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
يشكر المؤلفون موظفي المستشفى الجامعي الحيوانية المرفق (يوت) نانت لتربية الحيوانات والرعاية والخلوية و tissular التصوير المرافق الأساسية من جامعة نانت (ميكروبيسيل) للتصوير، ومرفق الخلوي (سيتوسيل) من مدينة نانت لخبراء المساعدة التقنية. تم تمويل هذا العمل من INSERM ويزأر، جامعة نانت، معهد السرطان الوطني دو (INCa #PLBio2014-155)، الرابطة الوطنية le مكافحة السرطان (AO الأقاليمي 2017) والاتحاد الأوروبي Transcan2 العصر-صافي (إيمونوجليو). وتمول الفريق بلوس أنجليس من أجل مؤسسة “بحوث ميديكال” (DEQ20170839118). وقد أدركت هذا العمل في سياق لابيكس مكتب المفتش العام ودعم برامج رامي سيستي، قبل “يشرف وكالة الأبحاث الوطنية” دعفينير عن طريق البرامج ANR-11-لابكس-0016-01 و ANR-10-إيبهو-005، على التوالي. رامي-سيستي المشروع تدعمه أيضا نانت متروبول والمنطقة يدفع de la Loire. يشكر المؤلفون رافيا شيرين لتقديم المساعدة في تصحيح هذه المخطوطة.
Materials
| PBMCs | from 3 different healthy donors | ||
| BLCLs | from 3 different donors | ||
| Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI) | Gibco | 31870-025 | |
| FCS | Dutscher | S1810-500 | |
| L-glutamine | Gibco | 25030-024 | |
| penicillin/streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| IL-2 | Novartis | proleukin | |
| PHA-L | Sigma | L4144 | |
| Stereotaxic frame | Stoelting Co. | 51600 | |
| Mouse adaptator for stereotaxic frame | Stoelting Co. | 51624 | |
| microsyringe pump injector | WPI | UMP3-4 | |
| NanoFil Syringe | WPI | NF34BV-2 | |
| NSG mice | Charles River | NSGSSFE07S | |
| Ketamine | Merial | Imalgène 1000 | |
| Xylazine | Bayer | Rompur 2% | |
| Scissors | WPI | 201758 | |
| Forceps | WPI | 501215 | |
| OmniDrill 115/230V | WPI | 503598 | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon | VCP397H | |
| Xylocaine | Astrazeneca | 3634461 |
Referências
- Stupp, R., Roila, F. Malignant glioma: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Annals of Oncology. 20 Suppl 4, 126-128 (2009).
- Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. Standards of care for treatment of recurrent glioblastoma–are we there yet?. Neuro-Oncology. 15 (1), 4-27 (2013).
- Chen, S. H., Shine, H. D., Goodman, J. C., Grossman, R. G., Woo, S. L. Gene therapy for brain tumors: regression of experimental gliomas by adenovirus-mediated gene transfer in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (8), 3054-3057 (1994).
- Choi, P. J., Tubbs, R. S., Oskouian, R. J. Emerging Cellular Therapies for Glioblastoma Multiforme. Cureus. 10 (3), e2305 (2018).
- Zhu, L., et al. Targeting and Therapy of Glioblastoma in a Mouse Model Using Exosomes Derived From Natural Killer Cells. Frontiers in Immunology. 9, 824 (2018).
- Chung, D. S., Shin, H. J., Hong, Y. K. A new hope in immunotherapy for malignant gliomas: adoptive T cell transfer therapy. Journal of Immunology Research. 2014, 326545 (2014).
- Vauleon, E., Avril, T., Collet, B., Mosser, J., Quillien, V. Overview of cellular immunotherapy for patients with glioblastoma. Clinical and Developmental Immunology. 2010, (2010).
- Brown, C. E., et al. Regression of Glioblastoma after Chimeric Antigen Receptor T-Cell Therapy. The New England of Journal of Medicine. 375 (26), 2561-2569 (2016).
- Jarry, U., et al. Stereotaxic administrations of allogeneic human Vgamma9Vdelta2 T cells efficiently control the development of human glioblastoma brain tumors. Oncoimmunology. 5 (6), e1168554 (2016).
- Dutoit, V., et al. Exploiting the glioblastoma peptidome to discover novel tumour-associated antigens for immunotherapy. Brain. 135 (Pt 4), 1042-1054 (2012).
- Joalland, N., et al. IL-21 Increases the Reactivity of Allogeneic Human Vgamma9Vdelta2 T Cells Against Primary Glioblastoma Tumors. Journal of Immunotherapy. 41 (5), 224-231 (2018).
- Clemenceau, B., et al. Effector memory alphabeta T lymphocytes can express FcgammaRIIIa and mediate antibody-dependent cellular cytotoxicity. The Journal of Immunology. 180 (8), 5327-5334 (2008).
- Abdelwahab, M. G., Sankar, T., Preul, M. C., Scheck, A. C. Intracranial implantation with subsequent 3D in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas. Journal of Visualized Experiments. (57), e3403 (2011).
- Jarry, U., et al. Treg depletion followed by intracerebral CpG-ODN injection induce brain tumor rejection. Journal of Neuroimmunology. 267 (1-2), 35-42 (2014).
- June, C. H., O’Connor, R. S., Kawalekar, O. U., Ghassemi, S., Milone, M. C. CAR T cell immunotherapy for human cancer. Science. 359 (6382), 1361-1365 (2018).
- Baruch, E. N., Berg, A. L., Besser, M. J., Schachter, J., Markel, G. Adoptive T cell therapy: An overview of obstacles and opportunities. Cancer. 123 (S11), 2154-2162 (2017).
- Bryant, N. L., et al. Characterization and immunotherapeutic potential of gammadelta T-cells in patients with glioblastoma. Neuro-Oncology. 11 (4), 357-367 (2009).
- Pereboeva, L., Harkins, L., Wong, S., Lamb, L. S. The safety of allogeneic innate lymphocyte therapy for glioma patients with prior cranial irradiation. Cancer Immunology, Immunotherapy. 64 (5), 551-562 (2015).
- Bailey, S. L., Carpentier, P. A., McMahon, E. J., Begolka, W. S., Miller, S. D. Innate and adaptive immune responses of the central nervous system. Critical Reviews in Immunology. 26 (2), 149-188 (2006).
- Louveau, A., et al. Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels. Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).
- Menei, P., et al. Local and sustained delivery of 5-fluorouracil from biodegradable microspheres for the radiosensitization of glioblastoma: a pilot study. Cancer. 86 (2), 325-330 (1999).
- Menei, P., et al. Stereotaxic implantation of 5-fluorouracil-releasing microspheres in malignant glioma. Cancer. 100 (2), 405-410 (2004).
- Salot, S., et al. Large scale expansion of gamma 9 delta 2 T lymphocytes: Innacell gamma delta cell therapy product. Journal of Immunological Methods. 326 (1-2), 63-75 (2007).
- Bennouna, J., et al. Phase-I study of Innacell gammadelta, an autologous cell-therapy product highly enriched in gamma9delta2 T lymphocytes, in combination with IL-2, in patients with metastatic renal cell carcinoma. Cancer Immunology, Immunotherapy. 57 (11), 1599-1609 (2008).
- Singh, S. K., et al. Identification of human brain tumour initiating cells. Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).
