JoVE Journal > Bioengineering
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Resultados
Discussion
Declarações
Acknowledgements
Materials
Referências
Tadução automática
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Bioengenharia

جيل نانوليبوسوميس الموجبة لتسليم كفاءة في المختبر نسخها رسول الجيش الملكي النيبالي

Published: February 01, 2019
doi:
10.3791/58444
, , , , , , ,
1Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, Clinical Research Laboratory,University Medical Center, 2Atherothrombosis and Vascular Biology,Baker Heart & Diabetes Institute, 3Department of Medicine,Monash University

Summary

هنا يمكننا وصف بروتوكول لتوليد نانوليبوسوميس الأيوني، الذي يستند إلى الأسلوب الجاف-الفيلم ويمكن استخدامها الآمنة وتقديم كفاءة في المختبر نسخها رسول الجيش الملكي النيبالي.

Abstract

وضع الحمض النووي الريبي الرسول (مرناً)-على أساس المداواة لعلاج الأمراض المختلفة أصبح أكثر وأكثر أهمية بسبب الإيجابية خصائص في المختبر نسخها مرناً (IVT). مع المساعدة من IVT مرناً، يمكن أن يتسبب حيثياته تخليق البروتين المطلوب دون تغيير الحالة الفسيولوجية للخلية الهدف. وعلاوة على ذلك، يمكن التحكم تخليق البروتين الحيوي بدقة نظراً لتأثير عابر من IVT مرناً.

تعداء كفاءة للخلايا، نانوليبوسوميس (نلبس) قد تمثل وسيلة إيصال آمنة وفعالة مرناً العلاجية. تصف هذه الدراسة وضع بروتوكول لتوليد آمنة وفعالة الموجبة نلبس تتألف من DC-الكوليسترول و 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (منشطات) كوسيلة إيصال مرناً IVT. نلبس بعد من معرفة حجم، توزيعاً متجانساً، وقدرة كومبليكسيشن عالية، ويمكن أن تنتج باستخدام الأسلوب الجاف-فيلم. وعلاوة على ذلك، نقدم نظم اختبار مختلفة لتحليل ما كومبليكسيشن وزيادة بلغت تعداء الاصطناعية باستخدام البروتينات الفلورية الخضراء (اجفب) مرناً، فضلا عن تأثيرها على بقاء الخلية. إجمالاً، ينص البروتوكول على عرض نهج فعالة وآمنة complexation مرناً، التي قد تقدم وتحسين الإدارة مرناً العلاجية.

Introduction

استخدام مرناً معدلة للتطبيقات العلاجية أظهرت إمكانات كبيرة في العامين الماضيين. في أمراض القلب والأوعية الدموية، والالتهابات، ومونوجينيتيك، وكذلك في تطوير اللقاحات، مرناً هو وكيل علاجية واعدة1.

العلاج استبدال البروتين مع مرناً يوفر العديد من المزايا على مدى العلاج الجيني الكلاسيكية، التي تستند إلى تعداء الحمض النووي في الخلايا الهدف2. يبدأ الدالة مرناً في مباشرة سيتوسول. على الرغم من أن بلازميد الحمض النووي (بدنا)، بنية مزدوجة-الذين تقطعت بهم السبل، والتعميم الحمض النووي الذي يحتوي على منطقة مروج وتسلسل جينات ترميز البروتين العلاجي3، أيضا من أعمال في سيتوسول، يمكن فقط إدراجها في الخلايا التي تسير من خلال الانقسام في وقت تعداء. وهذا يقلل عدد transfected الخلايا في الأنسجة1،4. على وجه التحديد، هو تعداء للأنسجة مع النشاط الانقسام ضعيفة، مثل خلايا القلب، صعوبة5. على النقيض من بدنا، تحدث تعداء وترجمة مرناً في الخلايا الانقسامية وغير الانقسامية في1،الأنسجة6. قد يأتي اندماج الحمض النووي الفيروسي في جينوم المضيف مع تأثيرات مطفرة أو ردود فعل المناعة7،8، ولكن بعد تعداء الخلايا التي تحتوي على ترميز البروتين مرناً، نوفو دي تخليق البروتين المطلوب يبدأ مستقلة9،10. وعلاوة على ذلك، يمكن تعديل تخليق البروتين تحديداً إلى الحاجة للمريض عن طريق الجرعات الفردية، دون التدخل في الجينوم والمخاطرة بتأثيرات مطفرة11. يمكن خفض إمكانات تنشيط المناعة مرناً ولدت صناعيا هائلا باستخدام أردين الزائفة و 5 ‘-ميثيلسيتيديني بدلاً من أردين وسيتيديني12. أردين الزائفة كما تبين مرناً معدلة زيادة استقرار البيولوجي وأعلى بكثير قدرات متعدية الجنسيات13.

لتكون قادرة على الاستفادة من خصائص الواعدة للعلاج على أساس مرناً في التطبيقات السريرية، من الضروري إنشاء أداة مناسبة لنقل مرناً في الخلية. يجب أن تحمل خصائص غير سامة في المختبر و في فيفوهذه المركبات وحماية مرناً ضد تدهور نوكلاس وتوفر امتصاص الخلوية كافية لتوافر المطول والترجمة مرناً14.

من بين جميع أنواع الناقل المحتملة في فيفو تسليم المخدرات، مثل الأنابيب النانوية الكربونية، ونقاط الكم، والدهنية، هذا الأخير قد تم درس أكثر من15،16. الدهنية حويصلات تتألف من بلير الدهن10. وهم أمفيفيليك مع مسعور ومقطع ماء، ومن خلال هذا الترتيب الذاتي لهذه الجزيئات، طبقة مزدوجة كروية شكلت17. داخل الدهنية، العوامل العلاجية أو المخدرات يمكن تغليف و، وبالتالي، محمية من تدهور الانزيمية18. الدهنية التي تحتوي على N-[1-(2,3-dioleyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium كلوريد (دوتما)19، [1، 2-مكررا (أوليويلوكسي)-3-البروبان (تريميثيلامونيو)] (دوتاب)20، و21من ديوكتاديسيلاميدوجليسيلسبيرميني (الكلاب)، أو الكولسترول DC-22، تتميز جيدا وكثيراً ما تستخدم تعداء الخلوية مع الحمض النووي الريبي أو.

وتتألف الدهنية الموجبة دهن مشحونة بشكل إيجابي ودون توجيه تهمة إليه فسفوليبيد23. تعداء عبر الدهنية الموجبة واحد من الأساليب الأكثر شيوعاً لنقل الأحماض النووية في الخلايا24،25. تشكل جزيئات الدهن الموجبة المجمعات مع مجموعات الفوسفات مشحونة سلبا في العمود الفقري ل جزيئات الحمض النووي26. هذه ليبوبليكسيس ما يسمى نعلق على سطح غشاء الخلية وإدخال الخلية عن طريق الالتقام أو الالتقام-مثل-آليات27.

في عام 1989، مالون وآخرون. ووصف بنجاح الموجبة الدهون بوساطة مرناً تعداء28. ومع ذلك، باستخدام خليط من دوتما و 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (المخدر)، وجد الفريق أن دوتما تتجلى الآثار السامة للخلايا28. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت زهرة et al. أن دوتاب (1، 2-ديوليويلوكسي-3-تريميثيلامونيوم-البروبان كلوريد) يمكن أن تستخدم ككاشف تعداء مرناً29. ومع ذلك، تعداء كفاءة للخلايا، ينبغي استخدام دوتاب في تركيبة مع الكواشف الأخرى، مثل فيبرونيكتين29 أو30من المخدر. وحتى الآن، كان دوتما الدهون الموجبة الأولى في السوق المستخدمة ل توصيل الجينات31. الدهون الأخرى تستخدم كناقلات العلاجية أو يجري اختبارها في مراحل مختلفة من التجارب السريرية، (مثلاً، اندوتاج-الأول، الذي يحتوي على دوتاب كناقل دهن)، ويجري التحقيق حاليا في مرحلة الثانية لمحاكمة سريرية32.

يصف هذا العمل وضع بروتوكول لتوليد نلبس المحتوية على DC-الكوليسترول ومخدر. من السهل القيام بهذا الأسلوب ويسمح لتوليد نلبس ذات أحجام مختلفة. الهدف العام لتوليد البرمجة اللغوية العصبية باستخدام الأسلوب الجاف-فيلم إنشاء الدهنية ل complexation مرناً، مما يتيح تعداء خلية فعالة ومتوافق حيويا في المختبر14،33.

Protocol

1-جيل نانوليبوسوميس الأيوني (الشكل 1) تذوب الدهون DC-الكوليسترول في الدم (3β-[N-(N′,N′-dimethylaminoethane)-كاربامويل] الكوليسترول هيدروكلوريد) ومنشطات (ديوليويل فوسفاتيديليثانولاميني)، تسليم كمسحوق، في كلوروفورم لتحقيق تركيز نهائي 25 ملغ/مل.ملاحظة: تخزين الدهون المذابة في-20 درج?…

Representative Results

استخدام البروتوكول كما هو موضح، أعدت نلبس تتألف من الدهون DC-الكوليسترول ومخدر باستخدام الأسلوب الجاف-فيلم (الشكل 1). أثناء الإعداد، يظهر الحل نانوليبوسومي مراحل مختلفة في تعكر (الشكل 2). يمكن ثم تحليل فعالي?…

Discussion

ويصف البروتوكول قدم توليد نلبس مع تغليف عالية الفعالية مرناً معدلة صناعيا، وكذلك تعداء موثوقة من الخلايا في المختبر. وعلاوة على ذلك، نلبس كفالة الإفراج عن مرناً، الذي بدوره يترجم إلى بروتين وظيفية داخل الخلايا. بالإضافة إلى ذلك، ترانسفيكشنز استخدام نلبس يمكن أن يؤديها في الخلية الع?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

لا شيء

Materials

(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) AppliChem, Darmstadt, Germany A2231
(3β-[N-(N′,N′-dimethylaminoethane)-carbamoyl]cholesterol hydrochloride (DC-Cholesterol) Avanti, Alabama, USA 700001
4 ′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany D1306
BD FACScan system BD Biosciences, Heidelberg, Germany
Cell Fix (10x) BD Biosciences, Heidelberg, Germany 340181
Chloroform Merck, Darmstadt, Germany 102445
Dimethyl sulfoxid (DMSO) Serva Electrophoresis GmbH, Heidelberg, Germany 20385.02
Dioleoyl phosphatidylethanolamine (DOPE) Avanti, Alabama, USA 850725
Fluorescence microscope Zeiss Axio, Oberkochen, Germany
Lipofectamine 2000 Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 11668019
Mini extruder Avanti, Alabama, USA
Nuclease-free water Qiagen, Hilden, Germany 129114
Opti-Mem Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 11058021
PBS buffer (w/o Ca2+/Mg2+) Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 70011044
Quant-iT Ribo Green RNA reagent kit Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany Q33140
RPMI (w/o phenol red) Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 11835030
Silica gel Carl Roth, Karlsruhe, Germany P077
Trypsin/EDTA (0.05%) Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 25300054
HotStar HiFidelity Polymerase Kit Qiagen, Hilden, Germany 202602
QIAquick PCR Purification Kit Qiagen, Hilden, Germany 28104

Pseudouridine-5'-Triphosphate (Ψ-UTP)		 TriLink Biotechnologies, San Diego, USA N-1019
5-Methylcytidine-5'-Triphosphate (Methyl-CTP) TriLink Biotechnologies, San Diego, USA N-1014
Cyanine 3-CTP PerkinElmer, Baesweiler, Germany NEL580001EA
RNeasy Mini Kit Qiagen, Hilden, Germany 74104
MEGAscript T7 Transcription Kit Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany AM1333
3´-O-Me-m7G(5')ppp(5')G RNA Cap Structure Analog New England Biolabs, Ipswich, USA S1411L
Antarctic Phosphatase New England Biolabs, Ipswich, USA M0289S
Agarose Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany 16500-500
GelRed Biotium, Fremont, USA 41003
peqGOLD DNA ladder mix VWR, Pennsylvania, USA 25-2040
Invitrogen 0.5-10kb RNA ladder Fisher Scientific, Göteborg,
Sweden		 11528766
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Referências

  1. Sahin, U., Kariko, K., Tureci, O. mRNA-based therapeutics–developing a new class of drugs. Nature Reviews Drug Discovery. 13 (10), 759-780 (2014).
  2. Yamamoto, A., Kormann, M., Rosenecker, J., Rudolph, C. Current prospoects for mRNA gene delivery. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 71 (3), 484-489 (2009).
  3. Williams, P. D., Kingston, P. A. Plasmid-mediated gene therapy for cardiovascular disease. Cardiovascular Research. 91 (4), 565-576 (2011).
  4. Devoldere, J., Dewitte, H., De Smedt, S. C., Remaut, K. Evading innate immunity in nonviral mRNA delivery: don’t shoot the messenger. Drug Discovery Today. 21 (1), 11-25 (2016).
  5. Laguens, R. P., Crottogini, A. J. Cardiac regeneration: the gene therapy approach. Expert Opinion on Biological Therapy. 9 (4), 411-425 (2009).
  6. Hadas, Y., Katz, M. G., Bridges, C. R., Zangi, L. Modified mRNA as a therapeutic tool to induce cardiac regeneration in ischemic heart disease. Wiley Interdisciplinary Reviews: Systems Biology and Medicine. 9 (1), (2017).
  7. Zohra, F. T., Chowdhury, E. H., Akaike, T. High performance mRNA transfection through carbonate apatite-cationic liposome conjugates. Biomaterials. 30 (23-24), 4006-4013 (2009).
  8. Youn, H., Chung, J. -. K. Modified mRNA as an alternative to plasmid DNA (pDNA) for transcript replacement and vaccination therapy. Expert Opinion on Biological Therapy. 15 (9), 1337-1348 (2015).
  9. Avci-Adali, M., et al. Optimized conditions for successful transfection of human endothelial cells with in vitro synthesized and modified mRNA for induction of protein expression. Journal of Biological Engineering. 8 (1), 8 (2014).
  10. Akbarzadeh, A., et al. Liposome: classification, preparation, and applications. Nanoscale Research Letters. 8 (1), 102 (2013).
  11. Michel, T., Wendel, H. -. P., Krajewski, S., Kormann, M. Next-generation Therapeutics: mRNA as a Novel Therapeutic Option for Single-gene Disorders. Modern Tools for Genetic Engineering. , 3-20 (2016).
  12. Karikó, K., et al. Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 16 (11), 1833-1840 (2008).
  13. Anderson, B. R., et al. Incorporation of pseudouridine into mRNA enhances translation by diminishing PKR activation. Nucleic Acids Research. 38 (17), 5884-5892 (2010).
  14. Michel, T., et al. Cationic Nanoliposomes Meet mRNA: Efficient Delivery of Modified mRNA Using Hemocompatible and Stable Vectors for Therapeutic Applications. Molecular Therapy – Nucleic Acids. 8 (September), 459-468 (2017).
  15. Tran, M. A., Watts, R. J., Robertson, G. P. Use of Liposomes as Drug Delivery Vehicles for Treatment of Melanoma. Pigment Cell & Melanoma Research. 22 (4), 388-399 (2009).
  16. Immordino, M. L., Dosio, F., Cattel, L. Stealth liposomes: review of the basic science, rationale, and clinical applications, existing and potential. International Journal of Nanomedicine. 1 (3), 297-315 (2006).
  17. Ross, P. C., Hui, S. W. Lipoplex size is a major determinant of in vitro lipofection efficiency. Gene Therapy. 6 (4), 651-659 (1999).
  18. Xing, H., Hwang, K., Lu, Y. Recent Developments of Liposomes as Nanocarriers for Theranostic Applications. Theranostics. 6 (9), 1336-1352 (2016).
  19. Felgner, P. L., et al. Lipofection: a highly efficient, lipid-mediated DNA-transfection procedure. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84 (21), 7413-7417 (1987).
  20. Leventis, R., Silvius, J. R. Interactions of mammalian cells with lipid dispersions containing novel metabolizable cationic amphiphiles. Biochimica et Biophysica Acta. 1023 (1), 124-132 (1990).
  21. Behr, J. P., Demeneix, B., Loeffler, J. P., Perez-Mutul, J. Efficient gene transfer into mammalian primary endocrine cells with lipopolyamine-coated DNA. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 86 (18), 6982-6986 (1989).
  22. Gao, X., Huang, L. A novel cationic liposome reagent for efficient transfection of mammalian cells. Biochemical and Biophysical Research Communications. 179 (1), 280-285 (1991).
  23. Martin, B., et al. The design of cationic lipids for gene delivery. Current Pharmaceutical Design. 11 (3), 375-394 (2005).
  24. Yang, S. Y., et al. Comprehensive study of cationic liposomes composed of DC-Chol and cholesterol with different mole ratios for gene transfection. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 101, 6-13 (2013).
  25. Bennett, M. J., Nantz, M. H., Balasubramaniam, R. P., Gruenert, D. C., Malone, R. W. Cholesterol enhances cationic liposome-mediated DNA transfection of human respiratory epithelial cells. Bioscience Reports. 15 (1), 47-53 (1995).
  26. Son, K. K., Patel, D. H., Tkach, D., Park, A. Cationic liposome and plasmid DNA complexes formed in serum-free medium under optimum transfection condition are negatively charged. Biochimica et Biophysica Acta. 1466 (1-2), 11-15 (2000).
  27. Lonez, C., Vandenbranden, M., Ruysschaert, J. M. Cationic lipids activate intracellular signaling pathways. Advanced Drug Delivery Reviews. 64 (15), 1749-1758 (2012).
  28. Malone, R. W., Felgner, P. L., Verma, I. M. Cationic liposome-mediated RNA transfection. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 86 (16), 6077-6081 (1989).
  29. Zohra, F. T., Maitani, Y., Akaike, T. mRNA delivery through fibronectin associated liposome-apatite particles: a new approach for enhanced mRNA transfection to mammalian cell. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 35 (1), 111-115 (2012).
  30. Rejman, J., Tavernier, G., Bavarsad, N., Demeester, J., De Smedt, S. C. mRNA transfection of cervical carcinoma and mesenchymal stem cells mediated by cationic carriers. Journal of Controlled Release. 147 (3), 385-391 (2010).
  31. Balazs, D. A., Godbey, W. Liposomes for use in gene delivery. Journal of Drug Delivery. 2011, 326497 (2011).
  32. Bulbake, U., Doppalapudi, S., Kommineni, N., Khan, W. Liposomal Formulations in Clinical Use: An Updated Review. Pharmaceutics. 9 (2), (2017).
  33. Abraham, M. K., et al. Nanoliposomes for Safe and Efficient Therapeutic mRNA Delivery: A Step Toward Nanotheranostics in Inflammatory and Cardiovascular Diseases as well as Cancer. Nanotheranostics. 1 (2), 154-165 (2017).
  34. Avci-Adali, M., et al. In vitro synthesis of modified mRNA for induction of protein expression in human cells. Journal of Visualized Experiments. 93 (93), e51943 (2014).
  35. Yang, S., Chen, J., Zhao, D., Han, D., Chen, X. Comparative study on preparative methods of DC-Chol/DOPE liposomes and formulation optimization by determining encapsulation efficiency. International Journal of Pharmaceutics. 434 (1-2), 155-160 (2012).
  36. Caracciolo, G., Amenitsch, H. Cationic liposome/DNA complexes: from structure to interactions with cellular membranes. European Biophysics Journal. 41 (10), 815-829 (2012).
  37. Farhood, H., Serbina, N., Huang, L. The role of dioleoyl phosphatidylethanolamine in cationic liposome mediated gene transfer. Biochimica et Biophysica Acta. 1235 (2), 289-295 (1995).
  38. Zhang, Y., et al. DC-Chol/DOPE cationic liposomes: a comparative study of the influence factors on plasmid pDNA and siRNA gene delivery. International Journal of Pharmaceutics. 390 (2), 198-207 (2010).
  39. Klein, R. A. The detection of oxidation in liposome preparations. Biochimica et Biophysica Acta. 210 (3), 486-489 (1970).
  40. Ming-Ren Toh, G. N. C. C. Liposomes as sterile preparations and limitations of sterilisation techniques in liposomal manufacturing. Asian Journal of Pharmaceutical Sciences. 8 (2), 88-95 (2013).
  41. Torchilin, V. P., Omelyanenko, V. G., Lukyanov, A. N. Temperature-dependent aggregation of pH-sensitive phosphatidyl ethanolamine-oleic acid-cholesterol liposomes as measured by fluorescent spectroscopy. Analytical Biochemistry. 207 (1), 109-113 (1992).
  42. Rabinovich, P. M., Weissman, S. M. Cell engineering with synthetic messenger RNA. Methods in Molecular Biology. 969, 3-28 (2013).
  43. Ishida, T., Harashima, H., Kiwada, H. Liposome clearance. Bioscience Reports. 22 (2), 197-224 (2002).
  44. Freise, J., Muller, W. H., Brolsch, C., Schmidt, F. W. “In vivo” distribution of liposomes between parenchymal and non parenchymal cells in rat liver. Biomedicine. 32 (3), 118-123 (1980).
  45. Roerdink, F., Dijkstra, J., Hartman, G., Bolscher, B., Scherphof, G. The involvement of parenchymal, Kupffer and endothelial liver cells in the hepatic uptake of intravenously injected liposomes. Effects of lanthanum and gadolinium salts. Biochimica et Biophysica Acta. 677 (1), 79-89 (1981).
  46. Wang, X., et al. Dual-Targeted Theranostic Delivery of miRs Arrests Abdominal Aortic Aneurysm Development. Molecular Therapy. 26 (4), 1056-1065 (2018).
  47. Flierl, U., et al. Phosphorothioate backbone modifications of nucleotide-based drugs are potent platelet activators. Journal of Experimental Medicine. 212 (2), 129-137 (2015).
  48. Woodle, M. C. Controlling liposome blood clearance by surface-grafted polymers. Advanced Drug Delivery Reviews. 32 (1-2), 139-152 (1998).
  49. Sawant, R. R., Torchilin, V. P. Challenges in development of targeted liposomal therapeutics. The AAPS Journal. 14 (2), 303-315 (2012).
  50. Ewert, K. K., Evans, H. M., Bouxsein, N. F., Safinya, C. R. Dendritic cationic lipids with highly charged headgroups for efficient gene delivery. Bioconjugate Chemistry. 17 (4), 877-888 (2006).
  51. Elouahabi, A., Ruysschaert, J. M. Formation and intracellular trafficking of lipoplexes and polyplexes. Molecular Therapy. 11 (3), 336-347 (2005).
  52. Hoekstra, D., Rejman, J., Wasungu, L., Shi, F., Zuhorn, I. Gene delivery by cationic lipids: in and out of an endosome. Biochemical Society Transactions. 35 (Pt 1), 68-71 (2007).
  53. Lonez, C., Vandenbranden, M., Ruysschaert, J. M. Cationic liposomal lipids: from gene carriers to cell signaling. Progress in Lipid Research. 47 (5), 340-347 (2008).
  54. Filion, M. C., Phillips, N. C. Toxicity and immunomodulatory activity of liposomal vectors formulated with cationic lipids toward immune effector cells. Biochimica et Biophysica Acta. 1329 (2), 345-356 (1997).
  55. Takano, S., Aramaki, Y., Tsuchiya, S. Physicochemical properties of liposomes affecting apoptosis induced by cationic liposomes in macrophages. Pharmaceutical Research. 20 (7), 962-968 (2003).
  56. Ciani, L., et al. DOTAP/DOPE and DC-Chol/DOPE lipoplexes for gene delivery studied by circular dichroism and other biophysical techniques. Biophysical Chemistry. 127 (3), 213-220 (2007).
  57. Benson, H. A. Elastic Liposomes for Topical and Transdermal Drug Delivery. Methods in Molecular Biology. 1522, 107-117 (2017).
  58. Johler, S. M., Rejman, J., Guan, S., Rosenecker, J. Nebulisation of IVT mRNA Complexes for Intrapulmonary Administration. PLoS One. 10 (9), e0137504 (2015).
  59. Mays, L. E., et al. Modified Foxp3 mRNA protects against asthma through an IL-10-dependent mechanism. Journal of Clinical Investigation. 123 (3), 1216-1228 (2013).
  60. Kormann, M. S., et al. Expression of therapeutic proteins after delivery of chemically modified mRNA in mice. Nature Biotechnology. 29 (2), 154-157 (2011).

Tags

Cationic NanoliposomesMRNA DeliveryTransfectionNanoparticleLipid FilmExtrusionNanolipoplexA549 Cells
check_url/pt/58444?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citar este artigo
Michel, T., Link, A., Abraham, M., Schlensak, C., Peter, K., Wendel, H., Wang, X., Krajewski, S. Generation of Cationic Nanoliposomes for the Efficient Delivery of In Vitro Transcribed Messenger RNA. J. Vis. Exp. (144), e58444, doi:10.3791/58444 (2019).
Baixar citação
Reimpressões e Permissões

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image