Denne dyremodel gør det muligt for forskerne at fremkalde statistisk signifikant sekundært lymfom i den bagdel af mus, som varede mindst 8 uger. Modellen kan bruges til at studere lymfophysiologien og til at undersøge nye behandlingsmuligheder.
Dyremodeller er af afgørende betydning for forskningen af lymfom, for at forstå sygdommens Patofysiologi, men også for at udforske potentielle behandlingsmuligheder. Denne musemodel giver forskerne mulighed for at inducere signifikant lymfom, som varer mindst 8 uger. Lymfom er induceret ved hjælp af en kombination af fraktioneret strålebehandling og kirurgisk ablation af lymfeknuder. Denne model kræver, at musene får en dosis på 10 grå (Gy) stråling før og efter operationen. Den kirurgiske del af modellen involverer ligering af tre lymfeknuder og ekstraktion af to lymfeknuder fra musens bagled. At have adgang til mikrokirurgiske værktøjer og et mikroskop er afgørende på grund af muternes små anatomiske strukturer. Fordelen ved denne model er, at det resulterer i statistisk signifikant lymfom, som giver et godt grundlag for at evaluere forskellige behandlingsmuligheder. Det er også en stor og let tilgængelig mulighed for mikrokirurgisk træning. Begrænsningen af denne model er, at proceduren kan være tidskrævende, især hvis ikke praktiseres på forhånd. Modellen resulterer i objektivt kvantificerbare lymfom i mus, uden at forårsage alvorlig sygelighed og er blevet testet i tre separate projekter.
Lymfom er karakteriseret ved en ophobning af lymfevæske, der fører til lokaliseret vævshævelse, som hovedsagelig opstår på grund af nedsat eller forstyrret strøm af lymfevæske i lymfekarrene1. Lymfe strømmen kan blive forringet eller forstyrret af infektion, obstruktion, tilskadekomst eller medfødte defekter i lymfesystemet2. Disse ætiologier resulterer i ophobning af lymfatisk væske, hvilket fører til en kronisk tilstand af betændelse, resulterer i efterfølgende fibrose, samt aflejring af fedtvæv3. Lymphedema kan kategoriseres som primær eller sekundær lymfom. Primær lymfom er forårsaget af udviklingsmæssige abnormiteter eller genetisk mutation2,4. Sekundær lymfom opstår på grund af underliggende systemisk sygdom, kirurgi eller traumer2,4. Sekundær lymfom er den mest almindeligt forekommende form for lymfom i verden2. I de udviklede lande er den mest almindeligt forekommende årsag til sekundær lymfom er onkologisk behandling såsom adjuverende strålebehandling og lymfeknude dissektion5. Lymfomer er hyppigste blandt brystkræftpatienter, men kan også udvikle hos patienter med gynækolog, melanom, urogenitale eller nakke kræft6. Det er blevet foreslået, at ud af alle kvinder diagnosticeret med brystkræft, 21% vil udvikle lymfom7.
Lymfom kan være stressende for patienten både fysisk og psykisk. Patienter med lymfom har en øget risiko for infektion5,8,9, dårlig livskvalitet og kan udvikle social angst og symptomer på depression10. Komplikationer af kronisk lymfom fører til høje udgifter til pleje og en øget sygdomsbyrde9,11. Fund har også antydet, at lymfom kan være forbundet med øget risiko for død efter brystkræft behandling12. Konservativ ledelse såsom kompression af det berørte område, manuel lymfe dræning og generel hudpleje forbliver den første linje tilgang. Der er i øjeblikket ingen helbredende behandling6. Selv om der er gjort fremskridt inden for kirurgisk og medicinsk behandling, er det stadig plads til forbedring. Mere forskning, der giver indsigt i Patofysiologi og progression af sygdommen, er nødvendig for at give klinikere til at give bedre behandlingsmuligheder for patienterne5.
Dyremodeller anvendes i præklinisk forskning til at forstå Patofysiologi af sygdomme og udvikle potentielle behandlingsmuligheder. Flere forskellige lymfom-dyremodeller er blevet etableret i hjørnetænder13,14, kaniner15, får16, grise17,18 og gnavere19,20, 21,22,23,24. Gnaver modellen synes at være den mest omkostningseffektive model, når man undersøger genopbygningen af lymfe funktionen, fordi gnavere er let tilgængelige og relativt lavpris25. De fleste af de mus modeller har fokuseret på inducerende lymfom i halen af musene21,22,23. Hale modellen er meget pålidelig, men den nøjagtige kirurgiske teknik til inducerende lymfom, varierer betydeligt i tidligere offentliggjorte materialer. Dette resulterer i udsving i varighed og robusthed af det udviklede lymfom, præsenteret i kendt litteratur25. Der anvendes også forskellige teknikker til at inducere lymfom i baglemmer-modellen, og de giver også varierende resultater, men modellen med baglemmer kan være lettere at forstå ud fra et translationelt perspektiv. Tidligere Lymphedema-modeller er blevet hæmmet af spontan lymfom-opløsning, og derfor er der behov for en reproducerbar og permanent lymfafhedema-model25. Forskere har tidligere forsøgt at øge dosis af stråling, for at forhindre spontan lymfom opløsning, men dette har ofte ført til efterfølgende svær sygelighed25.
Denne model resulterer i statistisk signifikant lymfom, uden at forårsage alvorlig sygelighed, ved at kombinere mikrokirurgi med stråling. Modellen er blevet revideret fra en tidligere kirurgisk model ved at tilføje en dosis bestråling, der inducerer lymfom, uden at forårsage alvorlig sygelighed26. Det giver også en fantastisk mulighed for mikrokirurgisk træning. At have adgang til mikrokirurgisk udstyr og et mikroskop er nødvendigt, på grund af musene små anatomiske strukturer. Den kirurgiske procedure kan udføres, når brugeren er blevet undervist grundlæggende mikrokirurgiske teknikker, såsom suturering med mikrokirurgiske instrumenter. De operatører, der udførte denne procedure alle kiggede tutorial videoer af Acland om forudsætningerne for mikrokirurgiske færdigheder (1981) og grundlæggende mikrosutur teknik (1985). Vi anbefaler at øve den kirurgiske procedure 8 − 10 gange, før du bruger den i forskning. Øve proceduren sikrer, at færre fejl er lavet, og at proceduren kan udføres mere effektivt. Når mestrer, kan den kirurgiske procedure udføres i 45 minutter.
Der er nogle få kritiske trin i denne protokol. For det første er det vigtigt, at forskerne tager sikkerhedsforanstaltninger, når de arbejder med radioaktivitet. For det andet, under den kirurgiske del af denne protokol, er det vigtigt at starte proceduren, når musen er blevet bedøvet og afslutte det uden unødvendige pauser. Dette er vigtigt for at undgå en alt for lang kirurgisk periode for dyret og for at forhindre, at anæstesi mister virkning under operationen. Det anbefales kun at administrere en injektion af…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne takker Peter Boll, lederen af det biomedicinske laboratorium for udlån af udstyr, der er nødvendigt for at registrere optagelserne set gennem Mikroskoperne.
10-0 Nylon suture | S&T | 12051-10 | |
6-0 Nylon suture – Dafilon | B Braun | C0933112 | |
Coagulator – ICC 50 | ERBE | ||
Cotton tipped applicators | Yibon medical co | ||
Dissecting forceps | Lawton | 09-0190 | |
Elastic retractors | Odense University Hospital | ||
Electrical clipper | Aesculap | GT420 | |
Fentanyl 0,315 mg/ml | Matrix | ||
Heating pad – PhysioSuite | Kent Scientific Corp. | ||
Isoflurane 1000mg Attane | Scan Vet | ||
Isoflurane vaporizer – PPV | Penlon | ||
Micro jewler forceps | Lawton | 1405-05 | |
Micro Needle holder | Lawton | 25679-14 | |
Micro scissors | Lawton | 10128-15 | |
Micro tying forceps | Lawton | 43953-10 | |
Microfine U-40 syringe 0,5ml | BD | 328821 | |
Microlance syringe 25g | BD | ||
Microlance syringe 27g | BD | ||
Midazolam 5 mg/ml (hameln) | Matrix | ||
Needle holder – Circle wood | Lawton | 08-0065 | |
Non woven swabs | Selefa | ||
Opmi pico microscope F170 | Zeiss | ||
Patent blue V – 25 mg/ml | Guerbet | ||
Scissors – Joseph | BD | RH1630 | |
Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner | Siemens pre-clinical solutions | ||
Source of radiation – D3100 | Gulmay | ||
Stata Statistical Software: Release 15 | StataCorp LLC | ||
Temgesic – 0,2 mg | Indivior | ||
Vet eye ointment – viscotears | Bausch & Lomb |