마우스의 힌들보에서 보조 림프부종을 유도하기위한 개정 된 방법
Summary
이 동물 모델은 연구원이 적어도 8 주 지속되는 마우스의 뒷다리에 있는 통계적으로 유의한 이차 림프부종을 유도하는 것을 가능하게 합니다. 이 모델은 림프부종의 병리생리학을 연구하고 새로운 치료 옵션을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.
Abstract
동물 모형은 질병의 병리생리학을 이해하기 위하여 림프부종의 연구에서 가장 중요하고 또한 잠재적인 처리 선택권을 탐구하기 위하여. 이 마우스 모형은 연구원이 적어도 8 주 지속되는 중요한 림프부종을 유도하는 것을 허용합니다. 림프부종은 분별 된 방사선 요법과 림프의 외과 적 절제의 조합을 사용하여 유도됩니다. 이 모형은 마우스가 수술 전후에 10 회색 (Gy) 방사선의 복용량을 얻을 것을 요구합니다. 모델의 외과 부분은 3 개의 림프관의 결찰과 마우스 뒷다리에서 두 개의 림프절추출을 포함합니다. 마우스의 작은 해부학 적 구조로 인해 미세 수술 도구와 현미경에 액세스 하는 것은 필수적이다. 이 모델의 장점은 다른 치료 옵션을 평가하기위한 좋은 기초를 제공하는 통계적으로 유의한 림프부종을 초래한다는 것입니다. 그것은 또한 미세 수술 훈련에 대 한 중대 하 고 쉽게 사용할 수 있는 옵션. 이 모델의 제한사항은 특히 사전에 실행하지 않은 경우 프로시저가 시간이 많이 소요될 수 있다는 것입니다. 이 모델은 쥐에서 객관적으로 정량화 할 수있는 림프부종을 초래하며, 심각한 이환율을 일으키지 않고 세 가지 별도 프로젝트에서 테스트되었습니다.
Introduction
림프부종은 주로 림프관에서 림프액의 손상 또는 중단 된 흐름으로 인해 발생하는 국소 조직 부종으로 이어지는 림프액의 축적을 특징으로합니다1. 림프 흐름은림프계의감염, 방해, 부상 또는 선천적 결함에 의해 손상되거나 중단 될 수 있습니다 2 . 이러한 병인은 림프액의 축적을 초래하여 만성 염증 상태로 이어져 후속 섬유증뿐만 아니라 지방 조직의 침착을 초래합니다3. 림프부종은 1 차 또는 이차 림프부종으로 분류 될 수있다. 1차 림프부종은 발달 이상 또는 유전적돌연변이에의해 유발된다2,4. 이차 림프부종은 근본적인 전신 질환, 수술 또는 외상으로 인해발생2,4. 이차 림프부종은세계2에서 림프부종의 가장 일반적인 형태입니다. 선진국에서는 보조 림프부종의 가장 흔한 원인은 보조 방사선 요법 및 림프절 해부5와같은 종양학 치료입니다. 림프부종은 유방암 환자 중 가장 빈번하지만 부인과 환자, 흑색종, 비뇨 생식기 또는 목암 환자에서 발병할 수도있습니다 6. 유방암으로 진단 된 모든 여성 중 21 %가 림프부종을 개발할 것이라는 것이 제안되었습니다7.
림프부종은 환자에게 신체적, 심리적으로 스트레스를 받을 수 있습니다. 림프부종을 가진 환자는 감염의 증가한리스크가 5,8,9,삶의 질이 좋지 않으며 사회적인 불안 및 불경기의 현상을 개발할 수 있습니다10. 만성 림프부종의 합병증은 높은 치료 비용과 증가 된 질병부담으로이어진다9,11. 사실 인정은 또한 림프부종이 유방암 처리 후에 죽음의 증가한 리스크와 연관될 지도 모르다는 것을 건의했습니다12. 영향을받는 지역의 압축, 수동 림프 배수 및 일반 스킨 케어와 같은 보수적 인 관리가 첫 번째 라인 접근 방식입니다. 현재 치료 치료는 없습니다6. 외과 및 의학 치료 분야에서 진전이 있었지만 여전히 개선의 여지가 있습니다. 질병의 병리생리학 및 진행에 대한 통찰력을 제공하는 더 많은 연구가 임상의가 환자에게 더 나은 치료 옵션을 제공 할 수 있도록하는 데 필요합니다5.
동물 모델은 질병의 병리생리학을 이해하고 잠재적인 치료 옵션을 개발하기 위해 전임상 연구에서 사용되고 있습니다. 여러 가지 림프부종 동물 모델은 개13,14,토끼15,양16,돼지17,18 및 설치류19,20, 21,22,23,24. 설치류 모델은 설치류가 쉽게 접근 할 수 있고 상대적으로 저렴한25로인해 림프 기능의 재구성을 조사 할 때 가장 비용 효율적인 모델인 것으로 보입니다. 마우스 모델의 대다수는마우스21,22,23의꼬리에 림프부종을 유도하는 데 초점을 맞추고 있다. 꼬리 모형은 아주 믿을 수 있습니다 그러나 림프부종을 유도하기 위한 정확한 외과 기술은 이전에 간행된 물자에서 현저하게 변화합니다. 이는 공지된 litterature25에제시된 개발된 림프부종의 지속 기간 및 견고성의 변동을 초래한다. 다른 기술은 또한 뒷다리 모형에 있는 림프부종을 유도하기 위하여 이용되고 있고 또한 다양한 결과를 산출합니다, 그러나 뒷다리 모형은 번역관점에서 이해하기 쉬울지도 모릅니다. 이전 림프부종 모델은 자발적인 림프부종 분해능에 의해 방해를 받았기 때문에 재현 가능하고 영구적인 림프부종 모델이25필요합니다. 연구원은 이전에 방사선의 복용량을 증가 하려고, 자발적인 림프 부 종 해상도 방지 하기 위해, 하지만이것은 종종 후속 심각한이환25.
이 모형은 방사선과 미세 수술을 결합하여, 가혹한 이환율을 일으키는 원인이 되지 않고, 통계적으로 유의한 림프부종을 초래합니다. 이 모델은 심한이환율(26)을유발하지 않고 림프부종을 유발하는 조사 용량을 추가하여 이전 수술 모델에서 개정되었습니다. 또한 미세 수술 훈련을위한 좋은 기회를 제공합니다. 마우스의 작은 해부학 적 구조로 인해 미세 수술 장비와 현미경에 액세스 할 필요가 있습니다. 외과 적 수술은 사용자가 미세 수술 기구로 봉합하는 것과 같은 기본적인 미세 수술 기술을 배웠을 때 수행 될 수 있습니다. 이 절차를 수행 한 운영자는 모두 미세 수술 기술 (1981)과 기본 미세 수화 기술 (1985)의 전제 조건에 Acland에 의해 튜토리얼 비디오를 보았다. 우리는 연구에 사용하기 전에 외과 적 수술을 8-10 번 연습하는 것이 좋습니다. 절차를 연습하면 실수가 줄어들고 절차를 보다 효율적으로 수행 할 수 있습니다. 마스터하면 45 분 안에 외과 적 수술을 수행 할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 프로토콜에는 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 첫째, 방사능으로 작업할 때 연구원들이 안전 예방 조치를 취하는 것이 중요합니다. 둘째, 이 프로토콜의 수술 부분 동안 마우스가 마취되면 절차를 시작하고 불필요한 휴식없이 완료하는 것이 중요합니다. 이것은 동물을 위한 지나치게 긴 수술 기간을 피하고 마취가 수술 도중 효력을 분실하는 것을 방지하기 위하여 중요합니다. 마취제의 볼루?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 현미경을 통해 본 영상을 기록하는 데 필요한 장비를 빌려 준 생물 의학 연구소의 피터 볼렌 (Peter Bollen)에게 감사드립니다.
Materials
| 10-0 Nylon suture | S&T | 12051-10 | |
| 6-0 Nylon suture – Dafilon | B Braun | C0933112 | |
| Coagulator – ICC 50 | ERBE | ||
| Cotton tipped applicators | Yibon medical co | ||
| Dissecting forceps | Lawton | 09-0190 | |
| Elastic retractors | Odense University Hospital | ||
| Electrical clipper | Aesculap | GT420 | |
| Fentanyl 0,315 mg/ml | Matrix | ||
| Heating pad – PhysioSuite | Kent Scientific Corp. | ||
| Isoflurane 1000mg Attane | Scan Vet | ||
| Isoflurane vaporizer – PPV | Penlon | ||
| Micro jewler forceps | Lawton | 1405-05 | |
| Micro Needle holder | Lawton | 25679-14 | |
| Micro scissors | Lawton | 10128-15 | |
| Micro tying forceps | Lawton | 43953-10 | |
| Microfine U-40 syringe 0,5ml | BD | 328821 | |
| Microlance syringe 25g | BD | ||
| Microlance syringe 27g | BD | ||
| Midazolam 5 mg/ml (hameln) | Matrix | ||
| Needle holder – Circle wood | Lawton | 08-0065 | |
| Non woven swabs | Selefa | ||
| Opmi pico microscope F170 | Zeiss | ||
| Patent blue V – 25 mg/ml | Guerbet | ||
| Scissors – Joseph | BD | RH1630 | |
| Siemens INVEON multimodality pre-clinical scanner | Siemens pre-clinical solutions | ||
| Source of radiation – D3100 | Gulmay | ||
| Stata Statistical Software: Release 15 | StataCorp LLC | ||
| Temgesic – 0,2 mg | Indivior | ||
| Vet eye ointment – viscotears | Bausch & Lomb |
Referências
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