Этот протокол представляет собой надежную, воспроизводимую модель васкуляризированного композитного аллотрансплантататата (VCA), направленную на одновременное изучение иммунологии и функционального восстановления. Время, вложенное в дотошную технику в правой задней конечности задняя ортопедическая трансплантация с сшитыми сосудистой анастомозой и нервной коапптации дает возможность изучения функционального восстановления.
Пересадка конечностей, в частности, и васкуляризированные композитные аллотрансплантации (VCA) в целом имеют широкие терапевтические перспективы, которые были загнаны в тупик нынешних ограничений в иммуносупрессии и функционального нейромоторного восстановления. Многие модели животных были разработаны для изучения уникальных особенностей VCA, но здесь мы представляем надежную воспроизводимую модель ортопедической пересадки задних конечностей у крыс, предназначенных для одновременного исследования обоих аспектов текущего ограничения VCA: стратегии иммуносупрессии и функционального нейромоторного восстановления. В основе модели лежит приверженность тщательной, проверенной временем микрохирургических методов, таких как сшитые вручную сосудистые анастомозы и сшитые вручную нейронные коапптации бедренного нерва и седалищного нерва. Такой подход дает прочные реконструкции конечностей, которые позволяют дольше жить животных, способных реабилитации, возобновление повседневной деятельности, и функциональное тестирование. При кратковременном лечении обычных иммуносупрессивных средств, аллотрансплантированные животные выжили до 70 дней после трансплантации, и изотрансплантированные животные обеспечивают длительный контроль за 200 дней после оперативного. Доказательства неврологического функционального восстановления присутствуют через 30 дней после оперативного. Эта модель не только предоставляет полезную платформу для допроса иммунологических вопросов, уникальных для VCA и регенерации нервов, но и позволяет in vivo тестирования новых терапевтических стратегий, специально предназначенных для VCA.
Пересадка конечностей в более широкой категории васкуляризированного композитного аллотрансплантатата (VCA) или композитного аллотрансплантатата (CTA) до сих пор не выполнила свои терапевтические перспективы. С момента первой успешной пересадки рук человека в Лионе, Франция и Луисвилле, штат Кентукки в 1998 и 1999 годах, более 100 верхних конечностей трансплантации были выполнены во всем мире в тщательно отобранных пациентов1. Более широкая применимость была загнана в тупик из-за существенного иммуносупрессии и ограниченного функционального нейромотора восстановления. Текущие стратегии иммуносупрессии приводят к 85% заболеваемости острым отторжением в лице 77% заболеваемости оппортунистической инфекцией2. С другой стороны, происходит функциональное восстановление после пересадки руки; средний инвалидность руки плеча и руки (DASH) оценки улучшить от 71 до 43, но этот уровень функции все еще может квалифицироваться как инвалидность2. Учитывая нежизне сохранение природы пересадки конечностей, современные методы должны быть уточнены в животных моделях, чтобы сделать следующий шаг в VCA.
С первой крысиной модели пересадки конечностей в 19783, многие инновационные модели животных были разработаны для продвижения области VCA4, включая сосудистые наручники анастомозы, чтобы свести к минимуму оперативное время5,6, гетеро утопические остеомиоккутанные трансплантации, чтобы свести к минимуму физиологическое оскорбление реципиента животных7,8,9,10,11, и новые иммунологические подходы7,12,13,14. Крыса модель ортотопных правой задней конечности середине бедра трансплантации представлены здесь подчеркивает тщательно, проверенные временем микрохирургические методы, такие как руки сшиты сосудистые анастомозы и нервной коапптации в качестве авансового инвестирования в надежной, воспроизводимой модели платформы одновременно исследовать оба аспекта текущего ограничения VCA: стратегии иммунодепрессиции и функционального нейромоторного восстановления.
Трансплантация конечностей, под более широкой категорией сосудистого компонента аллотрансплантации (VCA), широко применяется терапевтические перспективы до сих пор невыполненными. Основные препятствия лежат в нерешенных иммунологических вопросов, уникальных для VCA и нейромоторных ме…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была профинансирована Фондом Франкеля и Северо-Западной мемориальной больницей Маккормик Грант (Операция RESTORE). Исследования, представленные в этой публикации, были поддержаны Национальным институтом общих медицинских наук Национальных институтов здравоохранения под номером T32GM008152. Эта работа была поддержана Северо-Западного университета микрохирургии ядро и поведенческие фенотипирования ядра.
Anesthesia machine | Vet Equip | 911103 | |
0.5cc syringe | Exel | 26018 | |
18-gauge needle | BD | 305196 | |
1cc syringe | BD | 309659 | |
22-gauge needle | BD | 305156 | |
24-gauge angiocatheter | Sur-Vet | SROX2419V | |
25-gauge needle | Exel | 26403 | |
3 cc syringe | BD | 309657 | |
5cc syringe | Exel | 26230 | |
Alcohol | Fisher Scientific | HC-600-1GAL | |
Anesthesia induction chamber | Vet Equip | 941443 | |
Anesthetic gas scavenger system | Vet Equip | 931401 | |
Bipolar electrocautery | Aura | 26-500 | |
Bitter Spray Mist | Henry Schein | 5553 | |
Bone wax | CP Medical | CPB31A | |
Breathing circuit | Vet Equip | 921413 | |
Buprenophine | Reckitt Benckiser | 12496075705 | |
Castro-Viejos needle drivers | Roboz | RS-6416 | |
Cordless rotary saw | Dremel | 8050-N/18 | |
Cotton swab stick | Fisher Scientific | 23-400-101 | For hemostasis |
DigiGait Appparatus and Software | Mouse Specifics | MSI-DIG, DIG-SOFT | |
Dumont forceps (#4) | Roboz | RS-4972 | |
Dumont forceps (#5) | Roboz | RS-5035 | |
Enrofloxacin | Norbrook | ANADA 200-495 | |
FK-506 | Astellas | 301601 | |
Gauze | Kendall | 1903 | |
Gauze | Covidien | 8044 | |
Gloves | Microflex | DGP-350-M | |
Hair clippers | Oster | 078005-010-003 | |
Handheld monopolar electrocautery | Bovie | AA00 | |
Hargreaves Apparatus | Ugo Basile S.R.L. Gemonio, Italy | 37370 | |
Heating pad | Walgreens | 126987 | |
Heparin | Fresenius Kabi | 42592K | |
Hot plate | Corning | PC-351 | For warming resusscitation fluid |
Isoflurane | Henry Schein | 29405 | |
Lactated ringers | Baxter | 2B2074 | |
Large petri dish | Fisher Scientific | FB0875713 | For donor graft while in chilled saline |
Meloxicam | Henry Schein | 49755 | |
micro Collin Hartmann retractor | |||
Micro dissecting scissors | Roboz | RS-5841 | |
Microfibrillar collagen powder | BD | 1010590 | For hemostasis |
Microvascular clips | Roboz | RS-5420 | |
Normal saline | Baxter | 2F7124 | |
Opthalmic lube | Dechra | IS4398 | |
Rapmycin | MedChem Express | HY-10219 | |
Small petri dish | Fisher Scientific | FB0875713A | For warmed resusscitation fluid |
Sterile drapes | ProAdvantage | N207100 | |
Surgical gown | Cardinal Health | 9511 | |
Surgical mask | 3M | 1805 | |
Surgical microscope, optic model OPMIMD | Zeiss | 169756 | |
Surgical microscope, Universal S3 | Zeiss | 243188 | |
Suture 10-0 nylon | Covidien | N2512 | |
Suture 5-0 vicryl | Ethicon | J213H | |
Suture 7-0 silk tie | Teleflex | 103-S | |
Tape | 3M | 1530-1 | |
Ultrasonic instrument cleaner | Roboz | RS-9911 | |
Vessel dilation forceps | Roboz | RS-5047 |