Lésion d’ischémie-reperfusion d’organe en simulant des changements hémodynamiques dans le modèle de greffe de foie de rat
Summary
Cet article fournit une description détaillée de la façon de construire un modèle animal de la phase anhépatique (ischémie hépatique) chez les rats pour faciliter la recherche fondamentale sur les lésions ischémiques-reperfusion après la transplantation hépatique.
Abstract
La transplantation orthotopique de foie (OLT) chez les rats est un modèle animal éprouvé utilisé pour des études préopératoires, peropératoires, et postopératoires, y compris des dommages d’ischémie-reperfusion (IRI) des organes extrahépatiques. Ce modèle nécessite de nombreuses expériences et dispositifs. La durée de la phase anhépatique est étroitement liée au temps de développement de l’IRI après transplantation. Dans cette expérience, nous avons employé des changements hémodynamiques pour induire des dommages extrahepatic d’organe chez les rats et avons déterminé le temps maximum de tolérance. Le temps jusqu’à ce que la blessure d’organe la plus grave variait pour différents organes. Cette méthode peut facilement être reproduite et peut également être utilisée pour étudier l’IRI des organes extrahépatiques après la transplantation hépatique.
Introduction
La lésion d’Ischemia-reperfusion (IRI) est une complication commune après transplantation de foie. L’IRI hépatique est un processus pathologique impliquant des dommages cellulaires ischémiques et une détérioration anormale de la réperfusion hépatique. L’IRI hépatique et la réponse immunitaire innée locale peuvent être divisés en IRI chaud et froid, selon les différences dans l’environnement clinique1. L’IRI chaud est induit par des dommages de cellules souches, habituellement en raison de la transplantation de foie, du choc, et du trauma2. L’IRI froid est une complication de la transplantation hépatique provoquée par des cellules endothéliales et la circulationpériphérique 3. Les rapports cliniques ont prouvé que l’IRI hépatique est associé à 10% des échecs tôt d’organe et peut augmenter l’incidence du rejet aigu etchronique 4,5. En outre, l’IRI hépatique peut également induire les syndromes multiples de dysfonctionnement d’organe ou le syndrome inflammatoire systémique de réponse, avec la mortalitéélevée 6. Les patients présentant la participation extrahepatic d’organe tendent à rester plus longtemps à l’hôpital, dépensent plus d’argent, et ont un pronosticplus mauvais 7. Le développement des complications est étroitement lié à la longueur de la phase anhepatic de la transplantation hépatique8.
La transplantation orthotopique de foie (OLT) chez les rats a été rapportée pour la première fois par le professeur américain Lee en 1973. L’opération expérimentale a simulé les étapes de la transplantation clinique de foie et de l’anastomosis des vaisseaux sanguins et du canal biliaire commun (CBD) utilisant la méthode de suture. La procédure est difficile et longue avec un faible taux de succès9. En 1979, Kamada et coll. ont apporté une amélioration significative à l’OLT chez les rats en utilisant de façon créative la « méthode à deux poignets » pour l’anastomose de la veine portail pour contrôler la phase anhépatique dans les 26 minutes10. La même année, Zimmermann proposa la « méthode unique de l’en-avant biliaire ». Sur la base des travaux de Lee, Zimmermann a utilisé des tubes de polyéthylène pour anastomoser directement la CDB du donneur et du receveur, a simplifié la reconstruction de la CDB et préservé la fonction du sphincter, et cette méthode est devenue la norme pour la reconstruction biliaire des modèles OLT11. En 1980, Miyata et coll. ont proposé la « méthode des trois poignets » où la veine portail (PV), le véna cava suprahépatique (SVC) et le véna cava intrahépatique (IVC) étaient anastomosés par la méthode du brassard. Cependant, il y a un risque de distorsion de la canule avec cette méthode, qui peut mener à l’obstruction du reflux inférieur de cava de vena12. En 1983, la « méthode à deux poignets » a été proposée en utilisant la méthode du brassard pour l’anastomose du PV et de l’IVC, mais en adoptant la méthode de suture pour le SVC13. Cette méthode a été adoptée par les chercheurs du monde entier pour établir des modèles olt. Depuis lors, les étapes d’anastomose de manchette ont été améliorées pour raccourcir la phase anhepatic et améliorer le taux de survie des rats14. De même, des méthodes améliorées sont utilisées dans la pratique clinique pour raccourcir la phase anhépatique15. Cependant, la recherche fondamentale sur IRI après transplantation hépatique a montré que le taux de survie est inversement lié au degré de blessure aux organes extrahépatiques. Par conséquent, d’autres recherches sont nécessaires, et un modèle animal simple et reproductible est nécessaire pour simuler iri après la transplantation hépatique.
Basé sur la définition de la phase anhepatic, nous avons simulé les changements hémodynamiques dans la transplantation de foie ayant pour résultat IRI des organes extrahépatiques chez les rats. Ci-dessous, nous fournissons une description détaillée de la façon de construire un modèle animal de la phase anhépatique (ischémie hépatique) chez les rats pour faciliter la recherche fondamentale sur iri après transplantation hépatique.
Protocol
Representative Results
Discussion
OLT chez les rats est un modèle idéal pour étudier la préservation des organes dans la transplantation hépatique, IRI, rejet de greffe, tolérance immunitaire, pathologie de transplantation et pharmacologie, homotransplantation, et la xénotransplantation. À l’heure actuelle, il est largement utilisé dans la recherche expérimentale de la transplantation hépatique.
Au cours d’études pilotes, nous avons d’abord administré l’anesthésie intraperitoneal pentobarbital de sodium e…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous tenons à souligner les suggestions utiles faites par le Dr Wen-tao Li et le Dr Ji-hua Wu du deuxième hôpital affilié de l’Université médicale du Guangxi. Les auteurs remercient nos coéquipiers pour leurs commentaires et discussions utiles. Les auteurs aimeraient également remercier les critiques anonymes et les éditeurs de JoVE pour leurs commentaires. Nous remercions tout remercie tout œux les parents du Dr Yuan pour leur soutien et leurs encouragements continus. Les travaux ont été soutenus par la Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248).
Materials
| 4% paraformaldehyde solution | Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd | P804536 | |
| air drying oven | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | BPG | |
| Alanine aminotransferase (ALT)Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K235-S | |
| ammonia | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10002118 | |
| amylase Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K005-M | |
| anhydrous ethanol | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 100092183 | |
| Animal anesthesia machine | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | R640 | |
| aspartate aminotransferase (AST)kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| automatic biochemical analyzer. | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems (when nessary) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | BL-420F | |
| Centrifuge | Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| cover glass | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd | 10212432C | |
| creatinine Kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | |
| dewatering machine | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Donatello Series 2 | |
| embedding machine | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL1 | |
| frozen machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| hematoxylin-eosin dye solution | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G1005 | |
| high-efficiency paraffin wax | Shanghai huayong paraffin wax co., Ltd | Q/YSQN40-91 | |
| hydrochloric acid | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10011018 | |
| intraocular lens (IOL)forceps | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| Isoflurane | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | — | |
| micro Scissors(when nessary) | Shanghai Surgical Instrument Factory | WA1010 | |
| needle holders | Shanghai Surgical Instrument Factory | J32010 | |
| neutral gum | Shanghai Huashen Healing Equipment Co.,Ltd. | — | |
| normal optical microscope | Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd | Nikon Eclipse CI | |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | J3CO30 | straight |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | JD1060 | bending |
| ophthalmic Scissors | Shanghai Surgical Instrument Factory | J1E0 | |
| pathological slicer | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| pipettes | Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | 7010101008 | |
| retractors | Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd. | JNT-KXQ | |
| scanner | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Pannoramic 250 | |
| slide | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G6004 | |
| xylene | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 1330-20-7 |
Referências
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