Este artigo fornece uma descrição detalhada de como construir um modelo animal da fase anháptica (isquemia hepática) em ratos para facilitar a pesquisa básica sobre a lesão isquemia-reperfusão após o transplante hepático.
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Artigo de método
Lesão por Isquemia-Reperfusão de Órgãos simulando alterações hemodinâmicas no modelo de transplante de fígado de rato
Neste artigo
Resumo
Resumo
O transplante hepático ortotópico (OLT) em ratos é um modelo animal testado e comprovado usado para estudos pré-operatórios, intraoperatórios e pós-operatórios, incluindo lesão isquemia-reperfusão (IRI) de órgãos extraháticos. Este modelo requer inúmeros experimentos e dispositivos. A duração da fase anháptica está intimamente relacionada com o tempo de desenvolvimento do IRI após o transplante. Neste experimento, usamos alterações hemodinâmicas para induzir danos extraháticos de órgãos em ratos e determinamos o tempo máximo de tolerância. O tempo até a lesão mais grave do órgão variou para diferentes órgãos. Este método pode ser facilmente replicado e também pode ser usado para estudar IRI dos órgãos extrahápticos após o transplante de fígado.
Introdução
A lesão por isquemia-reperfusão (IRI) é uma complicação comum após o transplante de fígado. Hepatic IRI é um processo patológico que envolve danos celulares mediados por isquemia e deterioração anormal da reperfusão hepática. O IRI hepático e a resposta imune inata local podem ser divididos em IRI quente e frio, de acordo com diferenças no ambiente clínico1. O IRI quente é induzido por lesão de células-tronco, geralmente como resultado de transplante de fígado, choque e trauma2. O IRI frio é uma complicação do transplante hepático causado por células endoteliais e circulação periférica3. Relatório....
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Protocolo
O Comitê de Ética Animal aprovou o experimento da Universidade Médica de Guangxi (No20190920). Todos os animais foram fornecidos pelo Centro de Experimentos Animais da Universidade Médica de Guangxi. Usamos ratos sprague dawley macho sprague (200-250 g, 10-12 semanas), mantidos sob a temperatura ambiente de 25 ± 2°C e umidade de 50 ± 10%. A alimentação foi interrompida 24 horas antes da operação; no entanto, a água foi fornecida.
NOTA: Um operador pode realizar todas as operações sem uma base de microcirurgia ou microscópio cirúrgico.
1. Operação
- Após a pesagem, anestesia os ratos com isoflurane (5%) us....
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Resultados
Tolerância dos ratos à isquemia hepática
Neste modelo animal, os locais em que os vasos sanguíneos foram ligados durante a operação são mostrados na Figura 1. Os ratos foram divididos aleatoriamente em 5 grupos para isquemia por 15 minutos (grupo I15), 30 minutos (grupo I30), 45 minutos (grupo I45), 60 minutos (I60) e grupo falso, com 10 ratos em cada grupo. A taxa de sobrevivência de cada grupo foi observada 14 dias após a operação. Todos os ratos sobreviveram no grupo I.......
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Discussão
OLT em ratos é um modelo ideal para estudar a preservação de órgãos em transplante hepático, IRI, rejeição de transplantes, tolerância imunológica, patologia de transplante e farmacologia, homotransplantação e xenotransplante. Atualmente, é amplamente utilizado na pesquisa experimental de transplante de fígado.
Durante os estudos-piloto, primeiro administramos anestesia intraperitoneal de sódio pentobarbital e descobrimos que isso levou à alta mortalidade pós-operatória e à curta tolerância a .......
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Divulgações
Os autores deste manuscrito não têm conflitos de interesse para divulgar.
Agradecimentos
Gostaríamos de reconhecer as sugestões úteis dadas pelo Dr. Wen-tao Li e pelo Dr. Ji-hua Wu do Segundo Hospital Afiliado da Universidade Médica de Guangxi. Os autores gostariam de agradecer aos nossos companheiros de equipe por comentários e discussões úteis. Os autores também gostariam de agradecer aos revisores anônimos e editores do JoVE por seus comentários. Um agradecimento especial deve ir aos pais do Dr. Yuan por seu apoio contínuo e encorajamento. O trabalho contou com o apoio da Fundação Ningbo de Ciências Naturais (2014A610248).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Solução de paraformaldeído a 4% | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd | P804536 | |
| forno de secagem ao ar | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | de | |
| Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-BC-K235-S | ||
| amônia | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10002118 | |
| kit de amilase | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-BC-K005-M | |
| etanol anidro | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 100092183 | |
| Animal máquina de anestesia | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | R640 | |
| kit de aspartato aminotransferase (AST) | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| . | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems (quando necessário) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | Centrífuga BL-420F | |
| Baiyang | Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| , Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | ||
| máquina de desidratação | Hungria 3DHISTECH Co., Ltd | Donatello Série 2 | |
| máquina de incorporação | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL1 | |
| máquina congelada | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| solução de corante de hematoxilina-eosina | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G1005 | |
| cera de parafina de alta eficiência | Xangai huayong cera de parafina co., Ltd | Q / YSQN40-91 | |
| ácido clorídrico | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10011018 | |
| pinça de lente intraocular (LIO) | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| Isoflurano | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | — | |
| micro tesouras (quando nessary) | Fábrica de instrumentos cirúrgicos de Xangai | WA1010 | |
| titulares de agulhas | Xangai Fábrica de instrumentos cirúrgicos | J32010 | |
| goma neutra | Shanghai Huashen Healing Equipment Co., Ltd. | — | |
| microscópio óptico normal | Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd | Nikon Eclipse CI | |
| pinça oftálmica | Shanghai Surgical Instrument Factory | J3CO30 | |
| pinça oftálmica | Shanghai Surgical Instrument Factory | JD1060 | dobra |
| tesoura oftálmica | Surgical Instrument Factory | J1E0 | |
| fatiador patológico | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| pipetas | Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | ||
| afastadores | Beijing Jinuotai Technology Development Co., Ltd. | Varredor de JNT-KXQ | |
| Hungria 3DHISTECH Co., biotecnologia | corrediça de Pannoramic 250 | ||
| , Ltd | G6004 | ||
| Xylene | Sinopharm Ltd | 1330-20-7 |
Referências
- Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms. Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).
- Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q.
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Reimpressões e permissões
