Etterligner Dings rullemetode på Notexin-indusert muskelskade hos rotter

Summary

Denne protokollen beskriver en enkel enhet som etterligner Dings rullemetode, etablerer en rottemodell for skjelettmuskelskade og bruker hematoksylin-eosinfarging for å observere patologien til skadet vev og enzymbundet immunosorbentanalyse for å oppdage endringer i serumskademarkører.

Abstract

Dings rullemetode er en av de mest brukte manipulasjonene i tradisjonelle kinesiske massasjeklinikker (Tuina) og en av de mest innflytelsesrike moderne Tuina-manipulasjonene i Kina. Den er basert på den tradisjonelle rullemetoden som vanligvis brukes i enfinger Zen-sjangeren og heter Dings rullemetode. På grunn av sine antiinflammatoriske og blodsirkulasjonsfremmende effekter, har Dings rullemetode lydterapeutiske effekter på myopati. På grunn av det store kraftområdet som påføres menneskelig hud, er Dings rullemetode utfordrende å utføre på forsøksdyr med små hudområder, som rotter og kaniner. I tillegg er styrken til Tuina påført menneskekroppen forskjellig fra den som brukes på forsøksdyr, så det kan hende at styrken er for høy eller for lav til å oppnå den terapeutiske effekten av Tuina under forsøket. Dette eksperimentet tar sikte på å skape en enkel massasjeapparat egnet for rotter basert på Dings rullende manipulasjonsparametere (styrke, frekvens, Tuina-varighet). Enheten kan standardisere manipulering i dyreforsøk og redusere variasjonen i Tuina-kraft som brukes på forskjellige dyr på grunn av subjektive faktorer. En rottemodell av ikke-eksinindusert skjelettmuskelskade ble etablert, og plasmaskademarkørene kreatinkinase (CK) og fettsyrebindende protein 3 (FABP3) ble brukt for å vurdere den terapeutiske effekten av Tuina på skjelettmuskelskade. Resultatene viste at denne Tuina-massøren kunne redusere nivåene av CK- og FABP3-uttrykk og redusere graden av skjelettmuskelskade. Derfor bidrar Tuina-massøren beskrevet her, som etterligner Dings rullemetode, til standardisering av Tuina-manipulasjon i eksperimentell forskning og er til stor hjelp for senere forskning på den molekylære mekanismen til Tuina for myopati.

Introduction

Muskelskader er vanlige traumatiske skader i klinisk og dagligliv, forårsaket av ytre slag (kontusjoner) eller kronisk overbelastning av muskelfibre (stammer), etc., noe som resulterer i muskeldysfunksjon og smerte, selv alvorlig påvirker pasientens livskvalitet¹. Å starte rehabilitering så tidlig som mulig etter en akutt belastningsskade er nøkkelen til å redusere tiden for å komme tilbake til idrett² og for å redusere smerte ^3,4. I moderne vestlig medisin følger klinisk førstehjelp for muskelskader prinsippene om hvile, is, kompresjon og høyde (RICE) for å stoppe skadelig blødning i muskelvevet⁵ og ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler for å lindre smerte⁶. Oppdagelsen av nye terapier som eksosomer⁷ og vevsteknikk⁸ ble potensielle behandlingsstrategier for skjelettmuskelsykdommer, og kompenserte for tidligere farmakologiske behandlingers mangler. Det kan imidlertid også øke behandlingskostnadene for pasienter, og sette dem under enormt økonomisk press⁹. Derfor anbefales alternative og komplementære terapier for behandling av muskel- og skjelettplager¹⁰. Tuina er mye brukt klinisk i Kina som en tradisjonell medisinsk metode og er populær blant pasienter for sin effekt og færre bivirkninger. Tuinaterapi for muskel- og skjelettlidelser kan lindre smerter og forbedre funksjonen^11,12,13. Mr. Ding Jifeng, en berømt Shanghai Tuina-utøver, grunnla Dings rullemetode¹⁴. Det er en unik rulle- og knuseteknikk med et stort kraftområde, jevn og mild kraft og intens penetrasjon.

Ulike dyremodeller er basert på forskjellige etiologier. De har fordeler og ulemper, og valg av riktige og hensiktsmessige dyremodeller er av stor betydning for grunnleggende eksperimenter, som bidrar til å forstå de cellulære og molekylære signalveiene for regenerering og reparasjon etter skjelettmuskelskade for å utvikle nye terapier for behandling av skjelettmuskelsykdommer. Kjemisk induserte modeller av muskelskade er mye brukt, med injeksjoner av skjelettmuskulatur som forårsaker myofibernekrose og produserer regenererte områder som effektivt kan regenerere innen 2 uker¹⁵. Både notexin og bupivakain kan forårsake muskelskader. Notexin kan imidlertid forårsake mer alvorlig myotoksisk skade på skjelettmuskulatur enn bupivakain, og naturlig funksjonell restitusjon er relativt langsommere¹⁶. Drug intramuskulær sprøytestøping tar ikke bare mindre tid, men har også kontrollerte effekter og omfang av skjelettmuskulaturskader. Denne kvantifiserbare kontrollen gjør vellykket støping mindre vanskelig^15,17.

Inflammatorisk respons er en viktig biologisk respons som har blitt grundig studert i sammenheng med myopati^18,19. I de tidlige stadiene av skjelettmuskelskade forstyrrer myofibernekrose lokal muskelhomeostase, og mange inflammatoriske celler infiltrerer skadestedet og utskiller mange proinflammatoriske cytokiner¹⁹. Kreatinkinase (CK) er en tradisjonell serumbiomarkør for vurdering av skjelettmuskelskade. Imidlertid mangler den vevsspesifisitet²⁰ og sensitivitet²¹, noe som begrenser evnen til å vurdere omfanget av legemiddelindusert muskelskade og indirekte rapportere omfanget av muskelgjenoppretting etter skade. Nye biomarkører, inkludert fettsyrebindende protein 3 (FABP3), har nylig vist relativt høy vevsspesifisitet og følsomhet i gnagermodeller av skjelettmuskelskade. FABP3 er en familie av bindende proteiner uttrykt primært i hjerte- og skjelettmuskelceller og involvert i fettsyremetabolisme, transport og signalering²². Derfor valgte vi en kombinasjon av to biomarkører, CK og FABP3, for å vurdere omfanget av noteksinindusert skjelettmuskelskade og restitusjon etter behandling.

Hos gnagere er musklene grunne, og hudområdet er lite, noe som også bestemmer at de forskjellige parametrene for massasje hos gnagere ikke vil være de samme som hos mennesker, for eksempel i dyreterapi, bør massasjeterapeuten behandle dem med mindre kraft ved hjelp av Dings rullemetode, og kan ikke bidra til driften av denne teknikken på grunn av den lille størrelsen på det skadede området, som til slutt kan føre til en reduksjon i effektiviteten av massasjen. Derfor benyttet eksperimentet den rullende massøren laget internt, som samsvarer med egenskapene til Dings rullemetode, for å gripe inn og evaluere den terapeutiske effekten av den notexininduserte skjelettmuskelskademodellen hos rotter, noe som bidrar til å standardisere parametrene til Tuina i eksperimentelle dyreforsøk for å undersøke den molekylære virkningsmekanismen til Tuina, en tradisjonell kinesisk medisin behandlingsmetode, på muskuloskeletale sykdommer.

Protocol

Prosedyrer som involverer dyr er godkjent av Institutional Care and Use Committee ved Hunan University of Chinese Medicine. 1. Montering av rullende massasjeapparat Velg en massasjeenhet som består av en gummirulle, gaffelholder, fjær, grensebaffel, justeringsskinne, skrue og akrylhåndtak (figur 1). Forsikre deg om at gummirullen måler 3 cm lang og 1,6 cm i diameter, fjæren måler 3 cm lang og 0,9 cm i diameter, grensebaffelen er 3 …

Representative Results

For å observere de morfologiske egenskapene til rotteskjelettmuskulatur etter skade, ble gastrocnemiusmuskelen farget med hematoksylin og eosin, og de fargede bildene ble lest med et analyseprogram som beskrevet i protokollen for 8 rotter per gruppe. Hos rotter med gastrocnemius muskelskade indusert av notexin (NTX-gruppen) ble mange muskelceller sprukket, atrofiske, nekrotiske og uregelmessig arrangert. Det var også høy infiltrasjon av nøytrofile granulocytter og lymfocytter rundt affisert område (<strong class="xf…

Discussion

Her beskrev vi en protokoll for Tuina-behandling av skjelettmuskelskade hos rotter og analyserte deretter graden av skjelettmuskelskade etter behandling for å verifisere effektiviteten av metoden. Spesielt kan modeller for skjelettmuskelskader hos rotter, inkludert, men ikke begrenset til, legemiddelinduksjon (notexin, bupivakain)16, stump kontusjon ²⁶, knus 27 og iskemi-reperfusjon²⁸, interveneres med Tuina. Gjennom HE-fargi…

Materials

1 mL syringe	JIANGXI FENGLIN	20220521
1.5 microtubes	Servicebio	EP-150X-J
15 mL centrifuge tube	Servicebio	EP-1501-J
30G needle	CONPUVON	220318
5 mL blood collection tube	Servicebio	QX0023
Acrylic handle	Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd	65643645
Adjustment splint	CREROMEM	20220729
Cotton Swab	INOHV	22080215
Enzyme-labeled Instrument	Rayto	RT-6100
Ethanol	INOHV	211106
Fork holder	Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd	JL001
Hair removal cream	Veet, France	LOTC190922002
Hematoxylin dyeing solution set	Wuhan Google Biotech	G1005
Imaging system	Nikon, Japan	Nikon DS-U3
IODOPHOR disfecting solution	Hale&Hearty	20221205
Light microscope	Nikon, Japan	Nikon Eclipse E100
Limit baffle	CREROMEM	20220724
Notexin	Latoxan S.A.S.	L8104-100UG
Pentobarbital sodium	Merck KGaA	P3761
Rat creatine kinase (CK) ELISA kit	LunChangShuoBiotech	YD-35237
Rat fatty acid-binding protein 3 (FABP3) ELISA kit	LunChangShuoBiotech	YD-35730
Rubber roller	Hebei Mgkui Chemical Technology Co.,Ltd	202207
Screw	Weiyan Hardware	B05Z122
Sprague Dawley rats	Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co.	SYXK2019-0009
Spring	Bingzhang Hardware	TH001
Surgical blade	Covetrus	#23
Weigh controller	Iyoys	HY-XSQ