Всего-клеточные Recordings Света Вызванные Возбуждающие Synaptic токи в сетчатке глаза фрагмент
Summary
Это видео показывает процесс цельноклеточная напряжения зажим записей в сетчатке глаза кусочек водной саламандры тигра. Мы демонстрируем подготовки срез, а также как выполнять записи патч зажим во время визуальной стимуляции сетчатки.
Abstract
Мы используем цельноклеточная патч зажим методика исследования синаптических схему, которая лежит в основе обработки визуальной информации в сетчатке. В этом видео, мы вас через процесс выполнения цельноклеточная записей света вызвало токов отдельных клеток в сетчатке подготовки срез. Мы используем водную тигра саламандры в качестве животной модели. Мы начнем с описания рассечение глаза и показать, как ломтики установлены для электрофизиологических записей. Как только часть находится в записи камеры, мы покажем, как выполнять цельноклеточная записи напряжения зажимом. Затем проект зрительных раздражителей на фоторецепторы в срезе, чтобы выявить световых вызвала текущие ответы. Во время записи мы заливать срез с фармакологическими препаратами, в результате чего 8-канальный перфузии система позволяет быстро переключаться между различными агентами. Сетчатки подготовки ломтик широко используется для записи патч зажим в сетчатке, в частности для изучения amacrine или биполярных клеток, которые не доступны в целом монтажа подготовки.
Protocol
Discussion
Преимущества:
- Все типы клеток, которые доступны
- Легкая идентификация типов клеток, в частности, если флуоресцентный краситель добавляется в раствор электрода
- Фармакологические средства можно легко добраться до клеток-мишеней
- Техника патч зажим позволяет исслед…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Multiclamp 700A | Patch Clamp Amplifier | Molecular Devices | ||
| SZX9 | Dissection Micropscope | Olympus | ||
| BX50WI | Upright Microscope | Olympus | Equipped with 40x, 10x water immersion objective, fluorescent filters and mercury lamp | |
| P-97 | Micropipette Puller | Sutter Instruments | ||
| Lucivid | Microscope image injector | Mbf bioscience | ||
| 8-channel perfusion system | Microperfusion | Parker Hannfin corporation | ||
| Bits++ | Digital Video Processor | Cambridge Research Systems | ||
| Infrared Oculars | Other | ITT | ||
| Adhesive silicone wells | Other | Molecular Probes | 20mm diameter, 1.0mm deep | |
| Membrane Filters | Filter | Milipore | HAWPO1300 | .45µm HA |
| Borosilicate Glass Capillaries | Electrode glass | World Precision Instruments | 1B150-4 | |
| Syringe Filters | Filter | Whatman | 6789-0402 | 4mm filters, .2um Nylon Membrane, Polypropylene housing |
| IR camera | Micropscope mounted camera | Sony | SPT-M324 | Extrawave HAD, B7W video camera |
| Picrotoxin | Reagent | Sigma | P1675 | |
| Strychnine | Reagent | Sigma | S0532 | |
| Imidazole-4-acetic acid sodium salt | Reagent | Sigma | I7013 | |
| Larval tiger salamanders | Animal | Charles E. Sullivan (Nashville, TN) |
References
- Cook, P. B., Lukasiewicz, P. D., McReynnolds, J. S. GABA(C) receptors control adaptive changes in a glycinergic inhibitory pathway in salamander retina. Journal of Neuroscience. 20, 806-812 (2000).
- Heflin, S. J., Cook, P. B. Narrow and wide field amacrine cells fire action potentials in response to depolarization and light stimulation. Visual Neuroscience. 24, 197-206 (2007).
- Ichinose, T., Shields, C. R., Lukasiewicz, P. D. Sodium Channels in the Transient Retinal Bipolar Cells Enhance Visual Responses in Ganglion Cells. J Neurosci.. 25, 1856-1865 (2005).
