Это видео показывает процесс цельноклеточная напряжения зажим записей в сетчатке глаза кусочек водной саламандры тигра. Мы демонстрируем подготовки срез, а также как выполнять записи патч зажим во время визуальной стимуляции сетчатки.
Abstract
Мы используем цельноклеточная патч зажим методика исследования синаптических схему, которая лежит в основе обработки визуальной информации в сетчатке. В этом видео, мы вас через процесс выполнения цельноклеточная записей света вызвало токов отдельных клеток в сетчатке подготовки срез. Мы используем водную тигра саламандры в качестве животной модели. Мы начнем с описания рассечение глаза и показать, как ломтики установлены для электрофизиологических записей. Как только часть находится в записи камеры, мы покажем, как выполнять цельноклеточная записи напряжения зажимом. Затем проект зрительных раздражителей на фоторецепторы в срезе, чтобы выявить световых вызвала текущие ответы. Во время записи мы заливать срез с фармакологическими препаратами, в результате чего 8-канальный перфузии система позволяет быстро переключаться между различными агентами. Сетчатки подготовки ломтик широко используется для записи патч зажим в сетчатке, в частности для изучения amacrine или биполярных клеток, которые не доступны в целом монтажа подготовки.
Protocol
Решения Внутриклеточное решение для ганглиозных клеток (в мм): 100 К-глюконат, 8 KCl, 1 MgCl 2, 1 EGTA, 10 HEPES, 4 АТФ, ГТФ 0,5, 90 мкМ Sulforhodamine B (для окрашивания), доводят до рН = 7,4 с КОН Внутриклеточное решение для биполярных клеток (в мм): 90 К-глюконат, 8 KCl, 1 2 MgCl, 10 BAPTA, 10 HEPES, 4 АТФ, ГТФ 0,5, 90 …
Discussion
Преимущества:
Все типы клеток, которые доступны
Легкая идентификация типов клеток, в частности, если флуоресцентный краситель добавляется в раствор электрода
Фармакологические средства можно легко добраться до клеток-мишеней
Техника патч зажим позволяет исслед…
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Multiclamp 700A
Patch Clamp Amplifier
Molecular Devices
SZX9
Dissection Micropscope
Olympus
BX50WI
Upright Microscope
Olympus
Equipped with 40x, 10x water immersion objective, fluorescent filters and mercury lamp
Werner, B., Cook, P. B., Passaglia, C. L. Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice. J. Vis. Exp. (17), e771, doi:10.3791/771 (2008).