Summary

Isolierung von Anfang hämatopoetischen Stammzellen aus Murine Dottersack und AGM

Published: June 27, 2008
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Summary

Dieses Video zeigt, wie Mikro-sezieren den Dottersack und Aorta-Gonaden-Mesonephros Region aus Embryonen und die Verwendung der Durchflusszytometrie, um hämatopoetische Stammzellen zu sortieren.

Abstract

In der Maus-Embryo, tritt frühen Hämatopoese gleichzeitig in mehreren Organen, die den Dottersack und Aorta-Gonaden-Mesonephros Region umfasst. Diese Regionen sind entscheidend bei der Festlegung der Blutkreislauf in die Embryonen und führt zu den eventuellen Bewegung von Stammzellen in der fetalen Leber und dann die Entwicklung von adulten Stammzellen in der bonemarrow. Frühe hämatopoetischen Stammzellen können aus diesen Organen durch Mikrodissektion des Embryos durch durchflusszytometrische Sortierung gefolgt, um eine reine Population zu erhalten, isoliert werden. Es bleibt unklar, wie diese Stammzell-Populationen der fetalen und adulten Stammzellen-Pool beitragen. Auch untersucht unser Labor, wie früh Stammzellen funktionell unterscheiden sich von fetalen und adulten hämatopoetischen Stammzellen. Außerdem testen unsere Labor möglichen verschiedenen Populationen von hämatopoetischen Stammzellen und deren funktionelle Rolle im Kontext einer Vielzahl von genetischen Modellen. In diesem Video haben wir die Mikro-Dissektion Verfahren, das wir verwenden häufig und zeigen auch die Ergebnisse eines typischen FACS plotfter Isolierung dieser seltenen Populationen zeigen, ist es möglich, eine Vielzahl von funktionellen Assays darunter: Kolonie-Assays und Knochenmarktransplantationen.

Protocol

Dissection und Isolierung von frühen hämatopoetischen Stammzellen aus der Maus Dottersack und Aorta-Gonaden-Mesonephros Region Bevor Sie beginnen, ist es wichtig, alle Reagenzien und Instrumenten für die das Verfahren haben: Schere Zange, Größe 4 und chirurgische grade gebogen Spitze Pinzette, Größe 5 / 45 (optional) 30-Gauge-Nadel mit der Spritze 35mm und 100mm Petrischalen PBS mit 10% und 20% fötalem Rinderserum und schließlich, Colla…

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Morgan, K., Kharas, M., Dzierzak, E., Gilliland, D. G. Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM. J. Vis. Exp. (16), e789, doi:10.3791/789 (2008).

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