Encyclopedia of Experiments: Biology
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- En las moscas de la Drosophilia, un estímulo visual que indica el enfoque de un depredador activa circuitos neuronales que desencadenan una respuesta de escape. Para manipular el circuito neuronal que controla tal respuesta, expresar una opsina transgénica sensible a la luz, como la channelrhodopsin-2 en neuronas específicas dentro de ese circuito.
Channelrhodopsin es un canal de catión fotosensible que se abre cuando se expone a la luz azul brillante. La posterior entrada de iones de sodio aumenta un potencial de acción que hace que la neurona dispare y transmita información a lo largo del circuito. Además del estímulo de la luz, el cofactor all-trans-retinal es necesario para que la channelrhodopsin se abra.
Por lo tanto, proporcionar toda la retina trans en el alimento de mosca, ya que por lo general está presente en cantidades muy pequeñas. Además, al investigar el papel de las neuronas en un circuito neural implicado en una respuesta a un estímulo visual, utilizar moscas que son visualmente ciegas para prevenir otras respuestas de luz.
Por último, utilice una luz LED azul para desencadenar el mismo comportamiento causado por el estímulo que se avecina. En el protocolo de ejemplo, veremos la preparación de alimentos y la respuesta conductual inducida por la luz de las moscas que expresan channelrhodopsin en las neuronas del lóbulo óptico.
- Comience por derretir los alimentos estándar de mosca de la harina de maíz en un microondas, y dejar que se enfríe hasta que esté caliente al tacto. Una vez enfriado, mezcle 50 microlitros de retina trans de 20 mililitros previamente preparados en cada vial.
Primero, anestesia brevemente las moscas sobre hielo. Luego, coloca moscas individuales en puntas de pipeta P1000 con la punta cortada para formar un diámetro de poro de alrededor de 2,25 milímetros, y sella cada extremo con cinta adhesiva. Una vez que la mosca se haya despertado y esté explorando la punta de la pipeta, retira la cinta y coloca rápidamente la punta en la ranura en el soporte vertical.
Las moscas normalmente exploran la punta durante entre 30 y 60 segundos. A medida que la mosca se acerca a la parte superior de la punta, inicia la grabación de la cámara justo antes de que la mosca emerja en la plataforma.
