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Biotin-based Pulldown Assay to Validate mRNA Targets of Cellular miRNAs

Pulldown biotina-baseado do ensaio para validar mRNA miRNAs alvos de celular

DOI:
10.3791/57786-v

•

11:00 min

•

June 12, 2018

•

, , ,
1School of Biotechnology,Kalinga Institute of Industrial Technology University, 21. Center for AIDS Health Disparities Research Department of Biochemistry and Cancer Biology,Meharry Medical College, 3Kalinga Institute of Industrial Technology University

Capítulos

  • 00:04Título
  • 01:34Preparation of Streptavidin Coated Magnetic Beads — I
  • 03:52Preparation of Cell Lysate
  • 05:36Preparation of Streptavidin Magnetic Beads — II
  • 06:34Pull-down of Target mRNA-miRNA Complexes
  • 07:35Total RNA Extracted, cDNA Synthesis, and qPCR
  • 08:57Results: Use of MicroRNAs to Capture the Target mRNA
  • 09:55Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Este relatório descreve um método rápido e confiável para validar alvos de mRNA de miRNAs celulares. O método usa biotinilado sintético baseado no LNA de ácido nucleico trancado miRNA imita para capturar o alvo do mRNA. Posteriormente, grânulos magnéticos streptavidin-revestidas são empregados para pulldown o alvo mRNA para quantificação por qPCR reação em cadeia da polimerase.

Tags

Biotinylated MiRNA MimicsMRNA TargetsPulldown AssayLocked Nucleic AcidsStreptavidin-coated Magnetic BeadsMiRNA-mRNA InteractionsMiRNA BiologyMiRNA Therapeutics

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