/
/
Gene Knock-in door CRISPR/Cas9 en celsortering in macrofaag- en T-cellijnen
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Capítulos
- 00:05Introduction
- 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
- 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
- 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
- 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
- 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
- 10:16Representative Results
- 10:52Conclusion
Dit protocol maakt gebruik van fluorescerende reporters en celsortering om knock-in experimenten in macrofaag- en T-cellijnen te vereenvoudigen. Twee plasmiden worden gebruikt voor deze vereenvoudigde knock-in experimenten, namelijk een CRISPR/Cas9- en DsRed2-tot expressie brengend plasmide en een homoloog recombinatiedonorplasmide dat EBFP2 tot expressie brengt, dat permanent is geïntegreerd op de Rosa26-locus in immuuncellen.
