Journal
/
Imunologia e Infecção
/
נוק-אין של ג'ין על-ידי CRISPR/Cas9 ומיון תאים בקווי תא מקרופאג' ו-T
JoVE Journal
Imunologia e Infecção
Author Produced
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo.  Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
JoVE Journal Imunologia e Infecção
Gene Knock-in by CRISPR/Cas9 and Cell Sorting in Macrophage and T Cell Lines
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

נוק-אין של ג'ין על-ידי CRISPR/Cas9 ומיון תאים בקווי תא מקרופאג' ו-T

DOI:
10.3791/62328-v

•

11:32 min

•

November 13, 2021

•

, , , , , , , , ,
1The Laboratory of Genetic Regulators in the Immune System, School of Laboratory Medicine,Xinxiang Medical University, 2Centre d’Immunologie de Marseille-Luminy,Aix Marseille Université

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
  • 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
  • 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
  • 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
  • 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
  • 10:16Representative Results
  • 10:52Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

פרוטוקול זה משתמש בכתבים פלואורסצנטיים ובמיון תאים כדי לפשט ניסויי נוק-אין בקווי תא מקרופאג' ו- T. שני פלסמידים משמשים לניסויים פשוטים אלה, כלומר CRISPR/Cas9- ו- DsRed2-מבטא פלסמיד ותורם רקומבינציה הומולוגי המבטא את EBFP2, המשולב לצמיתות בלוקוס Rosa26 בתאי מערכת החיסון.

Tags

Keywords: CRISPR/Cas9Gene Knock-inMacrophageT Cell LinesROSA26 LocusSgRNA DesignHomologous RecombinationTargeting VectorFluorescent ReporterCell Sorting

Article

Embed

ADICIONAR À PLAYLIST

Usage Statistics

Vídeos Relacionados

check_url/pt/62328?article_type=v

טיהור אוכלוסייה תאים ספציפיים על ידי מיון פלואורסצנטי תא פעיל (FACS)
check_url/pt/62328?article_type=v

התמרה retroviral של T-cell קולטנים עכבר מתאי T
check_url/pt/62328?article_type=v

גזירת הרתי T-cell לימפומה קווים מ כספומט - / -</sup ו P53 - / -</sup עכברים
check_url/pt/62328?article_type=v

שיטות להעריך מתווכת בטא מוות של תאים על ידי לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיות
check_url/pt/62328?article_type=v

דור Multivirus ספציפיים תאים T כדי למנוע / לטפל זיהומים נגיפיים לאחר השתלת allogeneic תא גזע hematopoietic
check_url/pt/62328?article_type=v

הרחבת לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיים מדם טבורים שציטומגלווירוס יעד, וירוס אפשטיין באר, וadenovirus
check_url/pt/62328?article_type=v

שינוי מערכת Transposon piggyBac של תאי T אנושיים ראשוניים
check_url/pt/62328?article_type=v

העכבר נאיבי CD4<sup> +</supו> בידוד תא T<em> במבחנה</em> בידול לתוך תת תא T
check_url/pt/62328?article_type=v

ניתוח הפונקציות של תאי פיטום ב Vivo באמצעות 'תא התורן לדפוק ב' עכברים
check_url/pt/62328?article_type=v

שיטה פשוטה ויעילה להקים NK וקווים תא T של חולים עם דלקת כרונית פעילה וירוס אפשטיין בר

Read Article