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Collecte de routine d’ensembles de données cryo-EM haute résolution à l’aide d’un microscope électronique à transmission de 200 KV
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Bioquímica
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JoVE Journal Bioquímica
Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope
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Collecte de routine d’ensembles de données cryo-EM haute résolution à l’aide d’un microscope électronique à transmission de 200 KV

DOI:
10.3791/63519-v

•

09:49 min

•

March 16, 2022

•

, , , , , , , , ,
1Materials and Structural Analysis Division,Thermo Fisher Scientific, 2Max Planck Institute of Biochemistry, Molecular Structural Biology, 3Materials and Structural Analysis Division,Thermo Fisher Scientific

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 01:27Grid Loading, Mapping, and Selection of Best Cryo-EM Grids for Data Collection
  • 02:36Setting up a Data Collection Session in the Single Particle Analysis Software
  • 05:44Final Microscope Alignments Before Starting Data Collection
  • 07:15Results: Gallery of Grids, Cryo-EM Reconstruction of Apo-Ferritin, and Effect of Energy Filtering on Cryo-EM Images
  • 08:56Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Des cartes cryo-EM à haute résolution de macromolécules peuvent également être obtenues à l’aide de microscopes TEM de 200 kV. Ce protocole montre les meilleures pratiques pour définir des alignements optiques précis, des schémas d’acquisition de données et la sélection de zones d’imagerie qui sont tous essentiels à la collecte réussie d’ensembles de données haute résolution à l’aide d’un TEM de 200 kV.

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Keywords: Cryo-EM200 KV TEMHigh-resolutionProtein StructureProtein ComplexesMolecular MechanismsStructure-based Drug DesignApoferritinProteasomeAuto GridsLiquid NitrogenAutomated Data CollectionAtlasEPU

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