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Routinemäßige Sammlung von hochauflösenden Kryo-EM-Datensätzen mit einem 200-KV-Transmissionselektronenmikroskop
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Bioquímica
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JoVE Journal Bioquímica
Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope
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Routinemäßige Sammlung von hochauflösenden Kryo-EM-Datensätzen mit einem 200-KV-Transmissionselektronenmikroskop

DOI:
10.3791/63519-v

•

09:49 min

•

March 16, 2022

•

, , , , , , , , ,
1Materials and Structural Analysis Division,Thermo Fisher Scientific, 2Max Planck Institute of Biochemistry, Molecular Structural Biology, 3Materials and Structural Analysis Division,Thermo Fisher Scientific

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 01:27Grid Loading, Mapping, and Selection of Best Cryo-EM Grids for Data Collection
  • 02:36Setting up a Data Collection Session in the Single Particle Analysis Software
  • 05:44Final Microscope Alignments Before Starting Data Collection
  • 07:15Results: Gallery of Grids, Cryo-EM Reconstruction of Apo-Ferritin, and Effect of Energy Filtering on Cryo-EM Images
  • 08:56Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Hochauflösende Kryo-EM-Karten von Makromolekülen können auch mit 200-kV-TEM-Mikroskopen erreicht werden. Dieses Protokoll zeigt die Best Practices für die Einstellung genauer optischer Ausrichtungen, Datenerfassungsschemata und Auswahl von Bildbereichen, die für die erfolgreiche Erfassung hochauflösender Datensätze mit einem 200-kV-TEM unerlässlich sind.

Tags

Keywords: Cryo-EM200 KV TEMHigh-resolutionProtein StructureProtein ComplexesMolecular MechanismsStructure-based Drug DesignApoferritinProteasomeAuto GridsLiquid NitrogenAutomated Data CollectionAtlasEPU

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