Her præsenteres en protokol til fremstilling og bufferkalibrering af celleekstrakter fra exonuklease V knockout-stammer af Escherichia coli BL21 Rosetta2 (ΔrecBCD og ΔrecB). Dette er en hurtig, nem og direkte tilgang til ekspression i cellefrie proteinsyntesesystemer ved hjælp af lineære DNA-skabeloner.