Эмбриональных стволовых клеток-производных эндотелиальных клеток для лечения ишемии задней конечности
Summary
Хирургические процедуры на поставку эмбриональных стволовых клеток эндотелиальных клеток ишемического задних конечностей свидетельствует, с неинвазивным путем отслеживания биолюминесценции изображений.
Abstract
Заболевания периферических артерий (PAD) обусловлено сужением периферических артерий, которые снабжают кислородом кровь и питательные вещества для ног и ступней, Эта патология вызывает симптомы, такие как перемежающаяся хромота (боль при ходьбе), болезненные язвы ишемический, или даже опасным для конечностей гангрены. Считается, что эндотелий сосудов, монослой эндотелиальных клеток, которые инвестирует просвета поверхность всех кровеносных и лимфатических сосудов, играет доминирующую роль в сосудистой гомеостаза и сосудистой регенерации. В результате, на основе стволовых клеток регенерации эндотелия может быть перспективным для лечения PAD.
В этом видео, мы демонстрируем трансплантации эмбриональных стволовых клеток (ЭСК)-производные эндотелиальных клеток для лечения одностороннего hindimb ишемии как модель PAD, а затем неинвазивного отслеживания клеточных самонаведения и выживание биолюминесценции изображений. Конкретные материалы и процедуры для доставки клеток и изображения будут описаны. Этот протокол следует за другой публикации в описании индукции задних конечностей ишемии Niiyama и др. 1.
Protocol
Discussion
ЭСК являются перспективным источником ячейки для лечения ишемии тканей из-за своей пластичности дифференциации и их способность вызывать ячейки линий включающий все три зародышевых листков, в том числе эндотелиальных клеток. Чтобы преодолеть этические проблемы, связанные с стволовых клеток, ин…
Acknowledgements
Авторы выражают благодарность Андреа Акстелл, Сатоши Ито, доктор медицинских наук, Джефф Velotta, доктор медицинских наук, Грант Хойт, Роберт С. Роббинс, доктор медицинских наук, Цзинь Юй, доктор медицинских наук, Тим Дойл, кандидат наук, и Стэнфордского небольшое ядро изображениями животных для оказания технической помощи. Авторы также выражают благодарность А. М. Бикфорд, Inc для поддержки ветеринарное оборудование. Это исследование было поддержано исследовательских грантов от Национального института здоровья (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), Табак Калифорнии соответствующей программы исследований Заболевание Калифорнийского университета (15IT-0257 и 1514RT-0169) , и Калифорнийского института регенеративной медицины (RS1-00183).
NH поддерживает общение с Американской ассоциации сердца. может кардиологической ассоциации.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical tools | Tool | Fine Science Tools | ||
| Syringe needle | Tool | BD | 28G insulin syringe is preferred | |
| Phosphate Buffered Saline | Reagent | Invitrogen | ||
| D-luciferin | Reagent | Biosynth International, Inc | Prepare D-luciferin in advance into filtered stock solutions of 15 mg/mL in PBS | |
| IVIS 200 Bioluminescence imaging system and acquisition software | Equipment | Xenogen Corporation |
References
- Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. JoVE. , (2008).
- Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. Endothelial cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).
- Yamashita, J., Itoh, H., Hirashima, M., Ogawa, M., Nishikawa, S., Yurugi, T., Naito, M., Nakao, K., Nishikawa, S. Flk1-positive cells derived from embryonic stem cells serve as vascular progenitors. Nature. 408, 926-926 (2000).
- De, A., Yaghoubi, S. S., Gambhir, S. S. Applications of lentiviral vectors in noninvasive molecular imaging. Methods Mol Biol. 433, 177-202 (2008).
- Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization. J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).
- Cook, M. J. The anatomy of the laboratory mouse. , (1976).
- Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. Bioluminescent indicators in living mammals. Nature Med. 4, 245-247 (1998).
- Ray, P., De, A., Min, J. J., Tsien, R. Y., Gambhir, S. S. Imaging tri-fusion multimodality reporter gene expression in living subjects. Cancer Res. 64, 1323-1330 (2004).
- Huang, N. F., Lee, R. J., Li, S. Chemical and physical regulation of stem cells and progenitor cells: potential for cardiovascular tissue engineering. Tissue Eng. 13, 1809-1823 (2007).
- Cao, F., Lin, S., Xie, X., Ray, P., Patel, M., Zhang, X., Drukker, M., Dylla, S. J., Connolly, A. J., Chen, X., Weissman, I. L., Gambhir, S. S., Wu, J. C. In vivo visualization of embryonic stem cell survival, proliferation, and migration after cardiac delivery. Circulation. 113, 1005-1114 (2006).
- Wilson, K., Yu, J., Lee, A., Wu, J. C. In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells. J Vis Exp. , (2008).
