Geliştirici Maya replikatif Ömrü Ölçüm
Summary
Bu yazıda, maya anne hücreleri replikatif ömrü ölçümü için genel bir protokol mevcut.
Abstract
Yaşlanma, hücresel bileşenleri ve ölüm ile sonuçlanan organelleri ilerleyici bir bozulma ile karakterize dejeneratif bir süreç. Maya<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Yaşlanma biyolojisi okumak için yaygın olarak kullanılan olmuştur ve maya uzun ömürlü birkaç belirleyicileri solucanlar da dahil olmak üzere, çok hücreli ökaryotlarda korunacak, sinekler ve fareler edilmiştir<sup> 1</sup>. Maya yaşlanma kolayca sayısal yaşla ilişkili fenotipler eksikliği nedeniyle, iki farklı ortak kullanım ömrü paradigmalar farklı bağlamlarda hücrelerinin ömrü ölçerek neredeyse sadece test edilmiştir<sup> 2</sup>. Kronolojik ömrü olmayan bir bölme, sükunet gibi devletin bir anne hücrenin hayatta olduğu zaman süresini ifade eder ve çok hücreli ökaryotlarda post-mitotik hücrelerin yaşlanma için bir model olarak hizmet etmek için önerilmiştir. Replikatif ömrü, kontrast, yaşlılık önce bir anne hücre tarafından üretilen kızı hücrelerinin sayısı anlamına gelir, ve mitotik aktif hücrelerin yaşlanma bir model olduğu düşünülmektedir. Burada Maya anne hücreleri replikatif ömrü ölçmek için genelleştirilmiş bir protokol mevcut. Replikatif ömür testinin amacı, kaç kez, her anne hücre tomurcukları belirlemek için. Anne ve kızı hücreler Zeiss Axioscope 40 ya da benzeri başka bir model gibi standart bir ışık mikroskobu (toplam büyütme 160x), deneyimli bir araştırmacı tarafından kolaylıkla ayırt edilebilir. Anne hücreleri kızı hücrelerinin fiziksel olarak ayrılması, fiber-optik bir iğne ile donatılmış manuel mikromanipülatör kullanarak elde edilir. Tipik laboratuvar maya suşları anne ortalama 20-30 yavru hücreye üretmek ve bir ömür deneyi 2-3 hafta gerektirir.
Protocol
Acknowledgements
Bu çalışma, MK ve BKK Ellison Tıp Vakfı için bir hibe ile desteklenmiştir. MK Yaşlanma Ellison Tıp Vakfı Yeni Scholar. Biz çekimler sırasında yardım almak için Soumya'den Kotireddy teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Bacto-Peptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) | |
| Glucose |
References
- Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. Recent developments in yeast aging. PLoS Genet. 3, (2007).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109-120 (2006).
- Smith, E. D. Quantitative evidence for conserved longevity pathways between divergent eukaryotic species. Genome Res. 18, 564-570 (2008).
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29-54 (2008).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63, 113-121 (2008).
- Jiang, J. C., Jaruga, E., Repnevskaya, M. V., Jazwinski, S. M. An intervention resembling caloric restriction prolongs life span and retards aging in yeast. Faseb J. 14, 2135-2137 (2000).
- Kaeberlein, M., Kirkland, K. T., Fields, S., Kennedy, B. K. Sir2-independent life span extension by calorie restriction in yeast. PLoS Biol. 2, E296-E296 (2004).
- Lin, S. J., Defossez, P. A., Guarente, L. Requirement of NAD and SIR2 for life-span extension by calorie restriction in Saccharomyces cerevisiae. Science. 289, 2126-2128 (2000).
- Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Large-scale identification in yeast of conserved ageing genes. Mech Ageing Dev. 126, 17-21 (2005).
- Kaeberlein, M. Regulation of yeast replicative life span by TOR and Sch9 in response to nutrients. Science. 310, 1193-1196 (2005).
