측정 식물 세포 벽 확장 (크리프)는 산성 산도에 의해 및 알파 Expansin에 의해 유도된

Summary

우리는 산성 버퍼와 expansin 단백질에 의해 유도된 식물 세포 벽의 표본의 장기 연장 (크리프)를 측정하기 위해 일정한 – 강제 신장계의 사용을 보여줍니다.

Abstract

성장 식물 세포 벽 특질상 우리가 그들이 낮은 PH (<5) ^1에서 더 확장 의미하는 '산성의 성장'으로 알려진 속성을 나타냅니다. 식물 호르몬 옥신은 급격히 산성 성장 메커니즘 ^{2, 3} 적어도 일부 젊은 줄기 및 유사 조직의 세포 신장을 자극. 옥신은 H를 활성화 ⁺ 플라즈마 막에 펌프를, 세포 벽 솔루션의 산성화을 불러 일으킨다. 벽면 산성화은 세포 벽이 셀 turgor 압력에 의해 만들어진 벽면 긴장에 항복로 인해, 내생 세포 벽 – 느슨해진 단백질 ^4아르 expansins를 활성화됩니다. 그 결과, 세포가 급속하게 확대하기 시작합니다. 이 '산성 성장'현상이 쉽게 격리 (nonliving) 세포 벽 표본 단위로 측정됩니다. 산성 유도 확장자를 받아야하는 세포 벽의 능력은 단순히 세포 벽의 다당류 (예 : pectins)의 구조 배열의 결과 아니라, expansins ⁵ 활동에 따라 달라집니다. Expansins은 알려진 효소 활동을하지 않으며 expansin 활동에 대해 분석하는 유일한 방법은 세포 벽 확장 자신의 유도를 측정하는 것입니다. 이 비디오 보고서는 세부 expansin의 assays에 적합한 벽 자료를 얻기위한 소스와 준비 기술과 산성 유발 확장 및 성장 오이 hypocotyls에서 준비 벽 샘플 expansin 유발 확장을 보여주기에갑니다.

적당한 세포 벽 샘플을 얻으려면, 오이 모종이 어둠 속에서 재배, hypocotyls가 -80에서 잘라 냉동 ° C. 냉동 hypocotyls는 abraded 평평하고 신장계 측정을위한 특별한 쿠베트에 일정한 장력에 고정되어 있습니다. 산성 유도 확장을 측정하려면 벽은 처음에 기본 셀 벽면의 구성 요소 expansins의 낮은 활동의 결과, 중성 산도에서 버퍼입니다. 산성 산도에 버퍼 교환시 expansins가 활성화하고 세포 벽이 급속하게 확장하고 있습니다. 우리는 또한 reconstitution 분석에 expansin 활동을 보여줍니다. 이 부분에 대한, 우리는 세포 벽 샘플에서 네이티브 expansins을 변성하는 간단한 열처리를 사용합니다. 이러한 inactivated 세포 벽 산성 버퍼에도 확장할 수 없지만, 세포 벽에 expansins의 또한 급속하게 확장하는 능력을 복원합니다.

Protocol

1 부 : 재배와 적합한 식물 자료를 저장 우리의 경험에서 etiolated 오이 모종의 젊은 hypocotyls이 실험을 위해 세포 벽 재료의 편리한 소스로 제공하고 있습니다. 오이 씨앗 26에서 설정한 일정한 온도 룸에서 어두운 캐비닛에 보관되는 빛을 증거 상자 ° C.에 서부 유럽 표준시 종이에 sown 아르 C가 괜찮을 20 °와 30 ° 사이에 아무것도로 정확한 온도가 중요한 것은 아니지만 온도가 묘목 개발의 ?…

Discussion

그들이 처리하고 좋은 감도와 반응하기 쉬운 벽 샘플의 신뢰할 수있는 원본으로 입증해야하기 때문에이 실험을 위해 우리는 오이 hypocotyls의 세포 벽를 사용했습니다. 우리는 또한 어린 시금치 잎과 셀러리 줄기로 슈퍼마켓에서 다른 모종뿐만 아니라 재료에서 벽 좋은 성공을 있었다. 기본적으로, 젊고 부드럽고 빠르게 성장하는 식물의 조직이 쉽게이 기술을 측정 가능성이 있지만, 거친, 이전, ?…