단일 분자 단지를 떠올리 VIVO에서 고급 형광 현미경을 사용하여
Summary
여기 기능성 분자 단지가 추적 및 계량, 감지 있도록 박테리아 세포를 생활에 단일 분자 형광 현미경을 수행하는 프로토콜을 보여줍니다.
Abstract
살아있는 세포의 메커니즘에 전체 통찰력은 세포 수준에서 사건을 이끌어하고 직접 핵심 프로세스를 조사하여 얻을 수 있습니다. 생물 학적 시스템의 전단 복잡 날짜하려면 대신 상대적으로 원유 대량 앙상블 평균 측정을 사용하여 단일 시스템 연구에 초점을 맞추고, 너무 요구하는 정확한 단일 분자 실험가 발생했습니다. 그러나 많은 중요한 과정은 단지 하나의 수준에서 살아있는 세포 또는 몇 분자에서 발생, 앙상블 측정은 일반적으로이 사건의 확률과 이기종 자연을 마스크. 여기, 고급 광학 현미경 및 분석 영상 분석 도구를 사용하여 우리는 하나의 살아있는 세균 단일 분자의 정밀도로 휴대 방법과 우리가 생물 학적 기계 작동에 분자 단지 내의 역학 관계를 볼 수 있습니다 내에서 단백질을 모니터링하는 방법을 보여줍니다. 기술은 생리학 직접 관련이있다. 그들은 최소한 – 섭동의 공부에서 생물 학적 샘플을 비침습이며, 완전히 살아있는 재료에 수사 숙련 있으며, 생물 물리학의 다른 단일 분자 접근법에 즉시 사용할 수 없습니다 있습니다. 또한, 생물 학적 표본은 모든으로 자연스럽게 발생하는 것보다 훨씬 더 많은 단백질을 생성하기위한보다 일반적인지만 그다지 좋지 접근 방식에 반대하는 수정되지 않은 세포 변종 ( "게놈 인코딩") 거의 동일 수준의 찬란 – 태그 단백질 생산을 공부 ( '플라스미드 표현'). 따라서, 조사하게 될 실제 생물 학적 샘플이 자연의 생물에 매우 가까이 있으며, 실제 생리 프로세스에 따라서 관측 관련성이.
Protocol
Discussion
케어는이 이후 닿는 박테리아보고에 대해 "이상의 전단"세포가 flagellar 모터의 기능을 손상 수하지 않도록해야합니다. 그들은 산소가 고갈 될 수 있으므로 현미경 슬라이드에 한 시간보다 훨씬 오래 세포를 사용하는 것이 중요합니다. 상당한 최적화가 가장 현미경 이미징 조건 조사중인 특정 생물 학적 시스템에 음식을 제공 했었죠 찾을 수 필요할 수 있습니다. 그것은 특정 현미경 시스템…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 교수 유디트 아미티지 (옥스포드 대학, 영국)와 교수 콘라드 뮬리노 (런던 퀸 메리 대학, 영국)의 그룹에서 세균성 긴장의 종류의 기부금을 인정합니다. IMD는 공동 생화학 뎁트 오브 (옥스포드 대학)과 OCISB에 의해 후원되며 AR는 공학 및 물리 과학 연구위원회 (EPSRC) DTC의 학생이기 의해 후원되며 ND는 생물 공학 및 생물 과학 연구 협의회 (BBSRC)에서 재정 지원되며 MCL입니다 로열 사회 대학의 연구 활동에 의해 자금.
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