Murine Colitis Modeling met dextraansulfaat Natrium (DSS)
Summary
Dextransulfaat natrium (DSS) toegediend in het drinkwater is een gevestigde murine inflammatoire letsel model van acute colitis. Dit protocol beschrijft de methode voor DSS behandeling en de preparatie van de weefsels.
Abstract
Colitis kunnen het gevolg zijn van virale of bacteriële infecties, ischemische beledigen of auto-immuunziekten, met name colitis ulcerosa en de dikke variant van de ziekte van Crohn – Crohn Colitis. Acute colitis kunnen presenteren met buikpijn en buik, malabsorptie, diarree, hematochezia en slijm in de ontlasting. We beginnen de complexe interacties tussen milieu, genetica, en de epitheliale barrière dysfunctie bij inflammatory bowel disease en dierlijke modellen van colitis zijn essentieel in het bevorderen van onze kennis van deze ziekte te begrijpen. Een populair model betreft tot aanvulling van het drinkwater van muizen met een laag moleculair gewicht Dextran natriumsulfaat (DSS), wat resulteert in beschadiging van het epitheel en een robuuste ontstekingsreactie in de dikke darm meerdaagse<sup> 1</sup>. Variaties van deze aanpak kan worden gebruikt om acuut letsel, acute blessure gevolgd door reparatie, en herhaalde cycli van DSS afgewisseld met herstel van het modelleren chronische inflammatoire ziekten model<sup> 2</sup>. Na een enkele vier-daagse behandeling van 3% DSS in het drinkwater, muizen vertonen tekenen van acute colitis waaronder gewichtsverlies, bloederige ontlasting en diarree. Muizen zijn gedood aan het einde van de behandeling cursus en bij autopsie ontleed dubbele punten zijn verwerkt en kunnen worden 'Zwitsers gerold "<sup> 3</sup> Om microscopische analyse van de gehele dikke darm toe te staan of toegediend met formaline als "worst" tot macroscopische analyse mogelijk te maken. Weefsel wordt vervolgens ingebed in paraffine, coupes, en gekleurd voor histologisch onderzoek.
Protocol
Discussion
Dit protocol kan worden aangepast om acuut letsel, letsel-reparatie, of chronische colon letsel te modelleren.
Acuut letsel Wijziging:
DSS behandeling ad lib voor 4-6 dagen gevolgd door onmiddellijke offer
Injury-Repair Modification:
Letsel met 4-6 dagen van DSS-behandeling gevolgd door herstel periode van 3-4 dagen en opoffering (zoals beschreven in bovenstaande protocol).
Chronische C…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Financiering door NIH (1 K08 DK080221-01) en de Vanderbilt institutionele ontwikkeling fondsen.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dextran Sulfate Sodium Salt | USB Corp | 9011-18-1 | mol wt 40,000-50,000 | |
| 10% Buffered Formalin Phosphate | Fisher Scientific | SF100-4 | ||
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | NDC 57319-474-06 | ||
| TISSUE PATH Macrosette Cassettes | Fisher Healthcare | 15182706 | ||
| BD 10 ml Syringe | B-D | 309604 | ||
| Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | E190 | Dilute to 70% with distilled water | |
| 20G Straight Feeding Needle | VWR | 20068-612 | ||
| 27G1/2 PrecisionGlide Needle | B-D | 305109 | ||
| Dissecting Scissors Sharp/Blunt Tip | VWR | 82027-588 | ||
| Waugh Forceps | VWR | 82027-428 | ||
| Non-absorbable Suture | LOOK Surgical Specialties | SP116 | ||
| Whatman Blotting Paper | VWR | 28298-020 | Cut as needed | |
| Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter | Cole-Parmer | EW-06731-2 | ||
| Carbon fiber composites digital caliper | Fisher Scientific | 15-007-958 |
References
- Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).
- Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis. Gastroenterology. 131 (2), 579-588 (2006).
- Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. The “Swiss roll”: a simple technique for histological studies of the rodent intestine. Lab Anim. 15 (1), 57-59 (1981).
- Mahler, M. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).
- Aharoni, R. Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease. J Pharmacol Exp Ther. 318 (1), 68-78 (2006).
- Hahm, K. B. Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease. Gut. 49 (2), 190-198 (2001).
- Green, B. T. Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287 (6), G1238-1246 (2004).
- Dieleman, L. A. Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines. Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).
