Ottenere ematociti concentrati dal hawaiano Bobtail Squid Euprymna scolopes L'osservazione e la loro aderenza ai batteri simbionti e non Symbiotic
Summary
Questo video dimostra come ottenere ematociti concentrati (cellule del sangue) dal hawaiano bobtail calamari,<em> Euprymna scolopes</em> Per l'utilizzo in saggi di adesione cellulare biologico e batteriche. Ematociti concentrati sarà tinto con un colorante fluorescente ed esposto a GFP-etichettata batteri.
Abstract
Studi riguardanti il ruolo del sistema immunitario nella mediazione di segnale molecolare tra batteri benefici ei loro ospiti hanno, negli ultimi anni, dato un contributo significativo alla nostra comprensione della co-evoluzione degli eucarioti, con la loro flora batterica. L'associazione simbiotica tra l'hawaiano bobtail calamari,<em> Euprymna scolopes</em> E il batterio bioluminescente<em> Vibrio fischeri</em> È stato utilizzato come sistema modello per la comprensione degli effetti di batteri benefici sullo sviluppo animale. Recenti studi hanno dimostrato che macrofagi come ematociti concentrati, il componente esclusivo cellulare del sistema immunitario dell'ospite calamaro, probabilmente svolgono un ruolo importante nel mediare la creazione e il mantenimento di questa associazione. Questo protocollo dimostrerà come ottenere ematociti concentrati da<em> E. scolopes</em> E poi usare queste cellule batteriche in saggi di binding. Adulti calamari vengono prima anestetizzati prima di emolinfa viene raccolta da siringa dal vaso sanguigno principale cefalica. Il ematociti concentrati host, contenuta nel emolinfa estratte, sono rispettati coprioggetto di vetro a camera e poi esposto alla proteina verde fluorescente etichettati simbiotico<em> Vibrio fischeri</em> E non-simbiotico<em> Vibrio harveyi</em>. Il ematociti concentrati sono di contrasto con un colorante fluorescente (Cell Tracker Orange, Invitrogen) e poi visualizzate utilizzando la microscopia a fluorescenza.
Protocol
Discussion
Studi riguardanti il ruolo del sistema immunitario nella mediazione di segnale molecolare tra batteri benefici ei loro ospiti hanno, negli ultimi anni, dato un contributo significativo alla nostra comprensione della co-evoluzione degli eucarioti, con la loro flora batterica. Il calamaro / vibrione del sistema si è dimostrato come sistema modello trattabile per rispondere alle domande fondamentali in questo campo 2,3,5,6,8. La luce-organo del Euprymna calamari scolopes permette di colo…
Acknowledgements
Fonti di finanziamento: University of Connecticut Research Foundation e dal Dipartimento di biologia molecolare e cellulare a SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid-di Ricerca e Antonio H. e R. Majorie
Romano Graduate Education Fellowship per AJC
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
References
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