La obtención de hemocitos de la hawaiana Squid Bobtail Euprymna scolopes Y la observación de su adhesión a las bacterias simbióticas y no simbióticas-
Summary
Este vídeo muestra cómo obtener hemocitos (células sanguíneas) de la hawaiana calamar bobtail,<em> Euprymna scolopes</em> Para su uso en ensayos de adhesión celular biológica y bacteriana. Hemocitos se tiñen con un colorante fluorescente y se expone a las buenas prácticas agrarias con etiqueta bacterias.
Abstract
Estudios sobre el papel del sistema inmune en la mediación de señalización molecular entre bacterias beneficiosas y sus anfitriones tienen, en los últimos años, hizo importantes contribuciones a nuestra comprensión de la co-evolución de los eucariotas con la microbiota presente. La asociación simbiótica entre el hawaiano calamar bobtail,<em> Euprymna scolopes</em> Y la bacteria bioluminiscente<em> Vibrio fischeri</em> Se ha utilizado como un sistema modelo para entender los efectos de las bacterias beneficiosas en el desarrollo animal. Estudios recientes han demostrado que los macrófagos-hemocitos, el único componente celular del sistema inmune innato del huésped calamar, probablemente juegan un papel importante en la mediación de la creación y el mantenimiento de esta asociación. Este protocolo se mostrará cómo obtener hemocitos de<em> E. scolopes</em> Y luego usar estas células en ensayos de unión bacteriana. Adultos calamar son los primeros anestesiados antes de la hemolinfa se recoge con una jeringa de los vasos sanguíneos principales cefálica. Los hemocitos de acogida, contenida en la hemolinfa extraída, se adhieren a cubreobjetos de vidrio de cámara y luego se exponen a la proteína verde fluorescente marcada con simbiótica<em> Vibrio fischeri</em> Y no simbiótica-<em> Vibrio harveyi</em>. Los hemocitos son contrastados con un tinte fluorescente (celular Rastreador de Orange, Invitrogen) y luego se visualizan mediante microscopía de fluorescencia.
Protocol
Discussion
Estudios sobre el papel del sistema inmune en la mediación de señalización molecular entre bacterias beneficiosas y sus anfitriones tienen, en los últimos años, hizo importantes contribuciones a nuestra comprensión de la co-evolución de los eucariotas con la microbiota presente. El sistema de squid / vibrio ha demostrado ser un sistema modelo manejable para responder preguntas fundamentales en este campo 2,3,5,6,8. La luz de los órganos del calamar scolopes Euprymna permite la colonización e…
Acknowledgements
Fuentes de financiación: Universidad de Connecticut, Fundación para la Investigación y el Departamento de Biología Molecular y Celular de SVN, Sigma Xi Grant-in-Ayuda de Investigación y Antonio H. y R. Majorie
Romano de Educación para Graduados de Becas para AJC
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
References
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