인간 제대 베인 내피 세포의 절연 (HUVEC)

Summary

이 비디오 프로토콜은 인간의 탯줄에서 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)의 고립과 문화를 보여줍니다. 일단 이러한 세포도 휴스 연구소에 의해 입증 최적화된 섬유소 젤 비드 분석처럼 체외의 angiogenesis의 assays에서 사용할 수 있습니다 고립.

Abstract

Angiogenesis는 angiogenic 자극에 대한 응답으로, 새로운 선박은 기존 vasculature에서 만들어지는 복잡한 다단계 프로세스입니다. 이 단계는 다음과 같습니다 코드, 루멘 형성, 문합, 새로운 지하 막 형성에 세포외 기질, EC의 정렬에 내피 세포의 지하 막, 증식 및 마이 그 레이션 (돋아) (EC)의 저하. 시험 관내 assays의 많은이 과정을 연구하기 위해 개발하지만, 대부분의 전용 angiogenesis의 특정 단계를 모방하고, morphologically 혈관 종종 생체내에서 선박과 유사하지되었습니다. 여기서 우리는 인간 제대 정맥 EC와 섬유아 세포를 이용 체외의 angiogenesis 분석에 최적화된 보여줍니다. 중요한 것은이 모델 recapitulates angiogenesis의 핵심 초기의, 그리고 선박 편광 EC 둘러싸인 세포 특허 루멘을 표시합니다. 선박 쉽게 위상 대조 및 시간 경과 현미경으로 관찰하고, 다운 스트림 애플 리케이션을위한 순수한 형태로 복구할 수 있습니다.

Protocol

절차 초과 피를 닦아 패드와 지문에 대한 코드를 놓는다. 코드의 양쪽에 신선한 상처를 확인하십시오. 정맥로, ON 플라스틱 바늘 피복과 함께 21 1 / 2 G 바늘을 삽입합니다. (정맥 최대 개방이며 2 작은 것들은 동맥 있습니다) hemostat과 장소에 바늘을 고정하고 바늘로 행크스의 20cc 주사기를 첨부합니다. 적당한 압력으로 정맥을 통해 행크?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
0.1% Collagenase				10ml per cord, warmed to 37°C
Tissue culture flasks				T75, one per cord.
Hanks medium
scissors				sterile
beaker				sterile
50 ml tubes