Recuperación de los ovocitos de ratón

Summary

Este protocolo se muestra la técnica para la extracción de los ovocitos o embriones en estadio temprano fertilizados del oviducto de los ratones. La capacidad de identificar la infindibulum e insertar una aguja de punta roma en que es esencial para la correcta realización del procedimiento.

Abstract

Hasta la fecha, sólo unos pocos estudios han informado de manipulaciones éxito de la embriogénesis Peromyscus o la biología reproductiva. Junto con el archivo Peromyscus Centro Genético (http://stkctr.biol.sc.edu), estamos caracterizando las diferencias relevantes necesarios para desarrollar este sistema. Un objetivo principal ha sido optimizar los ovocitos / recuperación temprana del embrión.

Protocol

Los ovocitos / embriones de recuperación Al menos dos horas antes de la recuperación de ovocitos / embriones, KSOM se coloca en el 37 º C incubadora de CO 2 y FHM se deben descongelar a partir de -20 º. Un plato de vidrio que contiene tres pozos de poca profundidad cóncava se utiliza a las caídas de la casa de KSOM en la incubadora. Para prevenir la deshidratación, la KSOM y el plato se colocan en un recipiente con tapa que tiene el agua en la parte inferior. Este aparato evita la evaporaci?…

Discussion

En este artículo, se demuestra la recuperación de los ovocitos de la ovulación inducida (superovuladas) Peromyscus. El uso de superovulación (en comparación con el ciclo estral natural) es común debido a un número mucho mayor resultado. Sin embargo, se debe tener cuidado al interpretar los resultados de la utilización de ovocitos como / embriones, ya que tanto las hormonas utilizadas para inducir la ovulación y el cultivo puede tener efectos.

Cuando estro ha sido confirmado, las mujeres son euthenized y los oviductos se rec…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Flushing needle	Tool	Zephyrtronics	ZT5-130-L	30 gauge blunt
Forceps (2)	Tool	Roboz	RS-5060
Peromyscus	Animal	Peromyscus Genetic Stock Center
Scissors	Tool	Roboz	RS-5880
FHM HEPES Buffered Media	Reagent	Specialty Media	MR-025-d
KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml)	Reagent	Specialty Media	MR-020P-5F
Mouth Pipette	Tool			Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing
Oocyte holding dish	Tool			Glass container with concave divets