Recupero degli ovociti mouse
Summary
Questo protocollo illustra la tecnica per l'estrazione di ovociti o di embrioni fecondati in fase iniziale dalla ovidotto di topi. La capacità di identificare i infindibulum e inserire un ago senza punta fine in esso è essenziale per eseguire correttamente la procedura.
Abstract
Fino ad oggi, solo pochi studi hanno riportato manipolazioni successo dell'embriogenesi Peromyscus o biologia riproduttiva. Insieme con la Borsa di Centro Genetico Peromyscus (http://stkctr.biol.sc.edu), si stanno caratterizzando le differenze salienti necessari per sviluppare questo sistema. Un obiettivo primario è stato quello di ottimizzare ovociti / recupero embrione precoce.
Protocol
Discussion
In questo articolo, dimostriamo il recupero di ovociti da ovulazione indotta (superovulated) Peromyscus. L'uso di superovulazione (al contrario di naturale ciclo estrale) è comune a causa del numero molto maggiore che ne derivano. Tuttavia, bisogna fare attenzione nell'interpretare tali risultati utilizzando ovociti / embrioni, in quanto entrambi gli ormoni usati per indurre l'ovulazione e la coltura può avere effetti.
Quando estrale è stata confermata, le femmine sono euthenized e ovidotti recuperato insieme ad una p…
Acknowledgements
Vorrei ringraziare Mike Dewey dal Centro Peromyscus patrimonio genetico per il suo aiuto, la pazienza e la conoscenza.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flushing needle | Tool | Zephyrtronics | ZT5-130-L | 30 gauge blunt |
| Forceps (2) | Tool | Roboz | RS-5060 | |
| Peromyscus | Animal | Peromyscus Genetic Stock Center | ||
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| FHM HEPES Buffered Media | Reagent | Specialty Media | MR-025-d | |
| KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml) | Reagent | Specialty Media | MR-020P-5F | |
| Mouth Pipette | Tool | Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing | ||
| Oocyte holding dish | Tool | Glass container with concave divets |
