Angiogenesis के अध्ययन के लिए अनुकूलित आतंच जेल मनका परख
Summary
इस वीडियो इन विट्रो angiogenesis परख में एक के प्रोटोकॉल को दर्शाता है कि angiogenesis के कई चरणों का स्मरण दिलाता है. अंकुरण के समय चूक छवियों, लुमेन गठन, शाखाओं में बंटी और सम्मिलन – angiogenesis की प्रमुख विशेषताएं – दिखाए जाते हैं.
Abstract
Angiogenesis एक जटिल बहु कदम प्रक्रिया है, जहां angiogenic stimuli करने के लिए प्रतिक्रिया में, नए जहाजों मौजूदा vasculature से बनाया जाता है. इन चरणों में शामिल हैं: तहखाने झिल्ली प्रसार और प्रवास (अंकुरण) endothelial कोशिकाओं के बाह्य मैट्रिक्स, चुनाव आयोग के तार में संरेखण में (ईसी) की गिरावट, शाखाओं में बंटी, लुमेन गठन, सम्मिलन, और एक नया तहखाने झिल्ली के गठन. इन विट्रो assays में कई करने के लिए इस प्रक्रिया का अध्ययन किया गया विकसित किया है, लेकिन अधिकांश केवल angiogenesis के कुछ चरणों की नकल, और आकृति विज्ञान assays के भीतर वाहिकाओं अक्सर vivo में जहाजों समान नहीं है. Nehls और Drenckhahn द्वारा पिछले काम के आधार पर, हम इन विट्रो angiogenesis परख है कि मानव नाल की शिरा चुनाव आयोग और fibroblasts इस्तेमाल में एक अनुकूलित है. यह मॉडल स्मरण दिलाता है angiogenesis की महत्वपूर्ण प्रारंभिक दौर के सभी और, महत्वपूर्ण बात, बर्तन पेटेंट कहनेवाला polarized चुनाव आयोग से घिरे lumens प्रदर्शन. चुनाव आयोग cytodex microcarriers पर लेपित हैं और एक आतंच जेल में एम्बेडेड. Fibroblasts जेल, जहां वे आवश्यक घुलनशील कारकों है कि चुनाव आयोग मोतियों की सतह से अंकुरण को बढ़ावा देने प्रदान के शीर्ष पर स्तरित हैं. कई दिनों के बाद, कई जहाजों मौजूद है कि आसानी से चरण विपरीत और माइक्रोस्कोपी समय चूक के तहत मनाया किया जा सकता है. इस वीडियो इन संस्कृतियों की स्थापना में महत्वपूर्ण कदम दर्शाता है.
Protocol
Discussion
वहाँ एक से बढ़ आम सहमति है कि इन विट्रो angiogenesis assays में तीन आयामी (3 डी) एक मॉडल है जो बहुत vivo में वास्तविक पर्यावरण के लिए करीब से 2D संस्कृतियों का प्रयोग कर प्राप्त किया जा सकता है है की पेशकश है. यह स्पष्ट है कि बेहतर 3D ?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytodex-3 Beads | Reagent | Amersham Pharmacia | 17-0485-01 | 10 g/bottle. 1. 0.5 g of dry beads are hydrated and swollen in 50 mL PBS (pH=7.4) for at least 3 hours at RT. Use a 50 mL tube and place it on the rocker. 2. Let the beads settle down (~ 15 min). Discard the supernatant and wash the beads for a few minutes in fresh PBS (50 mL). 3. Discard the PBS and replace with fresh PBS: 25 mL -> 20 mg/mL => 60000 beads/mL or 50 mL -> 10 mg/mL => 30000 beads/ mL 4. Place the bead suspension in a siliconized glass bottle (Windshield Wiper or Sigmacote). 5. Sterilize the beads by autoclaving for 15 min at 115C. 6. Store it at 4C. |
| Aprotinin | Reagent | Sigma | A-1153 | 10mg/bottle. Reconstitute lyophilized aprotinin at 4 U/mL in DI water. Sterile filter. Make aliquots of 1 mL each. Store at -20C. |
| Fibrinogen Type I | Reagent | Sigma | F-8630 | 1g. Dissolve 2 mg/mL fibrinogen in DPBS Note clottable protein % and adjust accordingly Heat in a 37C-water bath to dissolve the fibrinogen. Mix by inverting the tube. Do not vortex. Sterile filter through 0.22 um |
| Thrombin | Reagent | Sigma | T-3399 | 22 mg=1000 units. Reconstitute in sterile water at 50 U/mL. Make aliquots of 0.5 mL each. Store at -20C. |
References
- Nehls, V., Drenckhahn, D. A microcarrier-based cocultivation system for the investigation of factors and cells involved in angiogenesis in three-dimensional fibrin matrices in vitro. Histochem Cell Biol. 104, 459-466 (1995).
- Nehls, V., Drenckhahn, D. A novel, microcarrier-based in vitro assay for rapid and reliable quantification of three-dimensional cell migration and angiogenesis. Microvasc Res. 50, 311-322 (1995).
