에있는 동물 캡 이식 (ACT) 어세를 사용하여 조직 결정 Xenopus laevis</em
Summary
동물 모자 overexpressing 유전자 제품 (들)은 개발의 측면에 이식 아르<em> Xenopus laevis</em> 배아는 순서대로 조직이 결정 여부를 설정합니다.
Abstract
많은 단백질은 배아 발달의 이중 역할을한다. 특정 조직의 세포 운명 결정을 규제 이들은 또한 배아의 큰 지역의 발전에 영향을 줄 수 있습니다. 이것은 분석하기 어려운 특정 조직에서의 역할을 정의합니다. 예를 들어,<em> 소량</em>의 overexpression<em> Xenopus laevis</em> 태아의 눈을 포함 전체 앞쪽에 영역의 확장을 원인<sup> 1,2</sup>. 이 결과로부터, 그것은 노긴은 신경 조직의 확장을 일으키는하여 눈의 결정 또는에 직접적인 역할을 수행하는 경우, 노긴는 간접적으로 안구 형성에 영향을 알 수 없습니다. 이 복잡한 표현형를 갖는 것은 분석 세포 운명 결정에의 눈을 특정 역할이 어려운 공부합니다. 우리는이 문제를 극복 분석을 개발했습니다. 의 pluripotent 자연을 활용<em> Xenopus laevis</em> 동물 모자<sup> 3</sup> 우리는 같은 유전자 산물의 기능 (들)을 테스트하는 시험을 개발했습니다<em> 소량</em> 또는 눈 필드 전사 요인 (EFTFs)은 배 (胚)의 측면에이 조직을 이식하여 특정 조직이나 세포 종류로 모자를 변환하기<sup> 4</sup>. 우리가 노긴 단백질 치료 또는 전사 요소의 컬렉션 중 하나가 동물 대문자로 망막 세포의 운명을 결정할 수 찾았지만,이 절차는뿐만 아니라 다른 조직을 지정에 관련된 유전자 산물 (들)을 식별하는 데 사용될 수 있습니다.
Protocol
Discussion
이 비디오에서는, 우리는 동물 캡 이식 분석을 만들 재배열 Xenopus의 생물학 자에 의해 사용 고전 기법, 우리의 버전을 증명하고있다. 상온에서, Xenopus의 배아는 단계 9 15 매우 신속하게 개발할 수 있습니다. 14에 그들을 배치함으로써 ° C, 배아의 발달 속도가 느려졌되고 더 많은 이식 한 실험에서 수행할 수 있습니다. 이 세 단계 (> 43분의 42)에 배아를 성장하기 위해 필요한 경우, 우?…
Acknowledgements
이 작품은 실명 (경력 개발 MEZ 및 ASV로 수상 및 안과의학과에 제한 부여), E. 마틸다 지글러 재단 (MEZ 및 ASV)와 국립 안과 연구소 / NIH (MEZ 방지 연구의 교부금에 의해 지원되었다 , 보조금 R01EY015748 및 R01EY017964).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| mMessage mMachine SP6 Kit | Applied Biosystems/Ambion | AM1340 | ||
| Borosilicate Capillary Tubes (1.0mm OD x 0.5mm ID) | FHC, Inc | 27-30-1 | ||
| Sutter Micropipette Puller | Sutter Instruments, Inc. | P-97 | ||
| Gentamicin sulfate [50 mg/ml] | Fisher | BW17-528Z | ||
| Sylgard/elastomer Kit 1.1lb | Fisher | NC9644388 | ||
| 60 x 15 mm polystyrene petri dish | USA Scientific | 8609-0160 | ||
| human chorionic gonadotropin | Intervet | 22219 | ||
| Pico-Injector Microinjection Systems | Harvard Apparatus | 650003 | ||
| Torrey Pines Scientific ECHOtherm Incubator | Fisher | 11-680-21 | ||
| Transfer pipette | Krackeler | 6290-20635A | ||
| Dumostar #5 Forceps | Fisher | 11295-10 |
References
- Smith, W. C., Harland, R. M. Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor localized to the Spemann organizer in Xenopus embryos. Cell. 70, 829-840 (1992).
- Lamb, T. M. Neural induction by the secreted polypeptide noggin. Science. 262, 713-718 (1993).
- Green, J. Molecular Methods in Developmental Biology: Xenopus & Zebrafish. Methods in Developmental Biology. , (1999).
- Viczian, A. S., Solessio, E. C., Lyou, Y., Zuber, M. E. Generation of functional eyes from pluripotent cells. PLoS Biol. 7, e1000174-e1000174 (2009).
- Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. A guide to choosing fluorescent proteins. Nat Methods. 2, 905-909 (2005).
- Brown, A. L., Johnson, B. E., Goodman, M. B. Making patch-pipettes and sharp electrodes with a programmable puller. J Vis Exp. , (2008).
- Lan, L. Noggin Elicits Retinal Fate in Xenopus Animal Cap Embryonic Stem Cells. Stem Cells. , (2009).
