Flash Frysning och Cryosectioning E12.5 Mouse Brain
Summary
Visats i denna video är de tekniker för flash frysning och sektionering embryonal hjärnvävnad från mus. Användbara tips för att använda kryostat ges, inklusive felsökning metoder som kan användas samtidigt minska för att säkerställa att den resulterande vävnaderna sektionerna är fria från sprickor och andra störningar.
Protocol
Fix vävnad i 4% paraformaldehyd i PBS för önskad tid. Sackaros ingjuta vävnad (cryoprotection) Gör 30% sackaroslösning i PBS w / v under 2059 rör. Skölj vävnad 3x i PBS (~ 5 min med gungande). Placera vävnad i 30% sackaroslösning. Tissue kommer inte att sjunka. Placera vävnad i 4 ° C över natten, eller tills den har sjunkit. Etikett lämplig storlek cryomold med information och orientering. Fyll cryomold med oktober (undvik bubblor). …
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tissue-Tek Cryomold | Ted Pella, Inc. | 27181 | ||
| O.C.T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Sucrose solution | 30% sucrose solution in PBS w/v | |||
| paraformaldehyde | 4% paraformaldehyde in PBS |
Cite This Article
Currle, D. S., Monuki, E. S. Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain. J. Vis. Exp. (4), e198, doi:10.3791/198 (2007).