Imaging in vivo del transgenico parassiti Leishmania in un host live
Summary
Un<em> In vivo</em> Sistema di imaging viene utilizzato per generare misurazioni quantitative di infezione murino con il protozoo Trypanosomatid<em> Leishmania</em>. Questo è un metodo non invasivo e non letali per il rilevamento di parassiti esprimere luciferasi in molti tessuti nel corso della cronica<em> Leishmania</em> Spp. infezione.
Abstract
Specie diverse di<em> Leishmania,</em> Un protozoo parassita della famiglia<em> Trypanosomatidae</em>, In genere causano diverse manifestazioni della malattia umana. Le forme più comuni della malattia sono la leishmaniosi viscerale (VL) e la leishmaniosi cutanea (CL). Modelli murini di leishmaniosi sono ampiamente utilizzati, ma la quantificazione degli oneri parassiti durante la malattia murino richiede topi per l'eutanasia in vari momenti dopo l'infezione. Carichi parassita vengono poi misurate al microscopio, limitando test di diluizione, qPCR o amplificazione del DNA del parassita. Il<em> In vivo</em> Immagine di sistema (IVIS) è un pacchetto software integrato che consente il rilevamento di un segnale bioluminescente associato con le cellule negli organismi viventi. Sia per ridurre al minimo dell'uso di animali e di seguire longitudinalmente infezioni negli individui, nei modelli in vivo per l'imaging<em> Leishmania</em> Spp. causando VL o CL sono stati stabiliti. I parassiti sono stati progettati per esprimere la luciferasi, e questi sono stati introdotti in topi o intradermica o endovenosa. Misurazioni quantitative della bioluminescenza guida luciferasi del transgenico<em> Leishmania</em> Parassiti all'interno del mouse sono stati realizzati utilizzando IVIS. Topi individuali possono essere ripreso più volte durante gli studi longitudinali, che ci permette di valutare la variabilità inter-animale nel inoculi iniziali parassita sperimentali, e di valutare la moltiplicazione dei parassiti nei tessuti del mouse. I parassiti sono rilevati con elevata sensibilità in luoghi cutanea. Anche se è molto probabile che il segnale (fotoni / secondo / parassita) è più basso in organi viscerali profondi della pelle, ma il confronto quantitativo di segnali in siti superficiali rispetto profondo non sono stati fatti. E 'possibile che i numeri parassita tra i siti corpo non sono direttamente confrontabili, anche se i carichi parassita nei tessuti stessi possono essere confrontati tra topi. Esempi di una specie visceralizing (<em> L. infantum chagasi</em>) E una specie che causano la leishmaniosi cutanea (<em> L. mexicana</em>) Sono mostrati. La procedura IVIS può essere utilizzata per monitorare e analizzare modelli animali piccoli di una vasta gamma di<em> Leishmania</em> Specie che causano le diverse forme di leishmaniosi umana.
Protocol
Discussion
Il sistema di imaging in vivo (IVIS) fornisce un metodo per l'imaging animale intero o in vivo modelli sperimentali di infezione di imaging diverse forme di leishmaniosi. 18,16 La Leishmania spp. parassiti può essere progettato per esprimere la luciferasi lucciola a un livello che viene rilevato in vivo con la tecnologia di imaging IVIS. Uno dei principali vantaggi di questo metodo è che permette non invasivo visualizzazione di Leishmania spp. dentro l'os…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato finanziato in parte da una borsa di studio al merito recensione dal Department of Veterans Affairs, da sovvenzioni NIH AI045540, AI067874, AI076233-01 e AI080801 (MEW), e da AI29646 (SMB). Il lavoro è stato svolto in parte durante finanziamento di CT e JG dal NIH T32 AI07511.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-Luciferin Potassium Salt | Reagent | Caliper LifeSciences (Formerly Xenogen) | 122796 | |
| IVIS Imaging System 200 Series | Equipment | Caliper LifeSciences | Other IVIS models that can be used include: Lumina II, Lumina XR, Kinetic, and Spectrum. |
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