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कटिस्नायुशूल तंत्रिका दर्द पर फू के चमड़े के नीचे की सुई की प्रभावकारिता: एक पुरानी कसना चोट चूहा मॉडल में व्यवहार और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल परिवर्तन

Published: June 30, 2023 doi: 10.3791/65406
Automatic Translation
*1,2, *3,4, 5,6, 7,8,9
1Department of Chinese Medicine, Chang Bing Show Chwan Memorial Hospital, 2Graduate Institute of Integrated Medicine, College of Chinese Medicine, China Medical University, 3Institute of Fu's Subcutaneous Needling, Beijing University of Chinese Medicine, 4Clinical Medical College of Acupuncture & Moxibustion and Rehabilitation, Guangzhou University of Chinese Medicine, 5Experimental Animal Center, Department of Molecular Biology and Cell Research, Chang Bing Show Chwan Memorial Hospital, 6Department of Pharmacy and Master Program, Tajen University, 7Department of Physical Medicine and Rehabilitation, China Medical University Hospital, 8Department of Physical Therapy and Graduate Institute of Rehabilitation Science, China Medical University, 9Department of Physical Medicine and Rehabilitation, Asia University Hospital, Asia University
* These authors contributed equally

Summary

हम चूहों में कटिस्नायुशूल तंत्रिका दर्द को प्रेरित करने के लिए एक पुरानी कसना चोट मॉडल में फू के चमड़े के नीचे की सुई का उपयोग करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।

Abstract

फू की चमड़े के नीचे की सुई (एफएसएन), पारंपरिक चीनी चिकित्सा से एक आविष्कार एक्यूपंक्चर तकनीक, दर्द से राहत के लिए दुनिया भर में उपयोग की जाती है। हालांकि, कार्रवाई के तंत्र अभी भी पूरी तरह से समझ में नहीं आए हैं। एफएसएन उपचार के दौरान, एफएसएन सुई डाली जाती है और चमड़े के नीचे के ऊतकों में लंबी अवधि के लिए एक लहराते आंदोलन के साथ बनाए रखा जाता है। हालांकि, शोधकर्ताओं के लिए पशु मॉडल (जैसे, चूहों) में एफएसएन में हेरफेर करते समय एक मुद्रा बनाए रखने से चुनौतियां उत्पन्न होती हैं। असुविधाजनक उपचार एफएसएन सुइयों के लिए भय और प्रतिरोध का कारण बन सकता है, जिससे चोट का खतरा बढ़ सकता है और अनुसंधान डेटा भी प्रभावित हो सकता है। संज्ञाहरण भी अध्ययन के परिणामों को प्रभावित कर सकता है। इसलिए, जानवरों पर एफएसएन थेरेपी में रणनीतियों की आवश्यकता है जो हस्तक्षेप के दौरान चोट को कम करते हैं। यह अध्ययन न्यूरोपैथिक दर्द को प्रेरित करने के लिए स्प्रेग-डॉली चूहों में एक पुरानी कसना चोट मॉडल को नियोजित करता है। यह मॉडल एक परिधीय तंत्रिका के सर्जिकल कसना के माध्यम से मनुष्यों में देखी गई तंत्रिका चोट से प्रेरित दर्द को दोहराता है, तंत्रिका संपीड़न सिंड्रोम और परिधीय न्यूरोपैथी जैसी स्थितियों में देखे गए संपीड़न या फंसाने की नकल करता है। हम आसानी से जानवर के शरीर के नीचे की परत में एक एफएसएन सुई डालने के लिए एक उपयुक्त हेरफेर पेश करते हैं, जिसमें सुई सम्मिलन और दिशा, सुई प्रतिधारण और लहराते आंदोलन शामिल हैं। चूहे की असुविधा को कम करने से चूहे को तनाव से रोकता है, जिससे मांसपेशियों को अनुबंध करने और सुई के प्रवेश में बाधा उत्पन्न होती है और अध्ययन दक्षता में सुधार होता है।

Introduction

न्यूरोपैथिक दर्द, जिसे तंत्रिका क्षति के कारण दर्द के रूप में परिभाषित किया गया है, दुनिया की आबादी का 6.9% -10% प्रभावित करने का अनुमान है, और रिपोर्ट की गई जीवनकाल व्यापकता 49% -70% 1,2 है। इसे प्रबंधित करने के लिए सबसे कठिन दर्द सिंड्रोम में से एक माना जाता है। न्यूरोपैथिक दर्द का प्रबंधन करने के लिए औषधीय एजेंटों के उपयोग ने सीमित सफलता प्राप्त की है क्योंकि आमतौर पर निर्धारित दर्द दवाएं जैसे गैर-स्टेरायडल विरोधी भड़काऊ दवाएं और ओपिओइड ने इस प्रकार के दर्द से राहत देने में बहुत कम प्रभावकारिता दिखाई है 3,4. इसलिए नए उपचार विकल्पों, विशेष रूप से गैर-औषधीय उपचारों का पता लगाने की बहुत आवश्यकता है। एक्यूपंक्चर, एक गैर-औषधीय हस्तक्षेप के रूप में, सोमैटोसेंसरी सिस्टम पर एनाल्जेसिक प्रभाव डालकर संभावित रूप से न्यूरोपैथिक दर्द को कम करता है। नैदानिक और प्रीक्लिनिकल दोनों अध्ययनों से संकेत मिलता है कि एक्यूपंक्चर महत्वपूर्ण दुष्प्रभावों के बिना न्यूरोपैथिक दर्द के लक्षणों से राहत देने में प्रभावी है 5,6,7. हालांकि, न्यूरोपैथिक दर्द में दर्द से राहत के लिए एक्यूपंक्चर उपचार के केंद्रीय तंत्र की आगे जांच की जानी बाकी है।

हाल के वर्षों में, फू के चमड़े के नीचे सुई (एफएसएन) दर्द से संबंधित तंत्रिका संबंधी विकारों के इलाज के लिए लोकप्रियता हासिल कीहै 8. एफएसएन पारंपरिक चीनी एक्यूपंक्चर से उत्पन्न हुआ था और पहली बार 1996 9,10 में पारंपरिक चीनी चिकित्सक झोंगहुआ फू द्वारा वर्णित किया गया था। पारंपरिक एक्यूपंक्चर से उत्पन्न होने पर, एफएसएन मेरिडियन आधारित एक्यूपंक्चर, यिन और यांग सिद्धांतों और एक्यूपंक्चर बिंदु अवधारणाओं से अपनी तकनीकों और सिद्धांतों में काफी भिन्न होता है। एफएसएन मायोफेशियल दर्द11 को प्रभावी ढंग से संबोधित करने के लिए न्यूरोफिज़ियोलॉजिकल और शारीरिक दृष्टिकोण पर अधिक जोर देता है। एफएसएन थेरेपी नैदानिक अभ्यास में विभिन्न दर्दनाक मांसपेशियों के विकारों को संबोधित करने के लिए लागू की जाती है, जो मांसपेशियों से निकटता से जुड़े संयोजी ऊतकों को लक्षित करती है, विशेष रूप से कड़ी मांसपेशियों (टीएम)12के उपचार पर ध्यान केंद्रित करती है। दर्द से राहत के लिए एक पूरक चिकित्सा के रूप में, वहाँ भी नैदानिक सबूत है कि एफएसएन तेजी से दर्द प्रबंधन और नरम ऊतक ऐंठन13,14 में महत्वपूर्ण सुधार प्रदान करने के अलावा नरम ऊतक चोटों के इलाज में प्रभावी है. एफएसएन थेरेपी में स्थिति से जुड़े अंतर्निहित मायोफेशियल ट्रिगर पॉइंट्स (एमटीआरपी) को संबोधित करने के लिए विशिष्ट तकनीकें शामिल हैं। एफएसएन सुई सम्मिलन स्थिति को इन ट्रिगर बिंदुओं के स्थान के आधार पर सावधानीपूर्वक चुना जाता है, जिससे प्रभावित क्षेत्रों का सटीक लक्ष्यीकरण होता है। प्रक्रिया के दौरान, एफएसएन सुई को चमड़े के नीचे की परत में डाला जाता है, जहां इसे जानबूझकर चिकित्सीय प्रभावों को अनुकूलित करने के लिए रोक दिया जाता है। एक विशिष्ट तकनीक लहराते आंदोलन के रूप में जाना जाता है तो कार्यरत है, ऊतकों को उत्तेजित करने और चिकित्सीय प्रतिक्रियाओं10 को बढ़ावा देने के लिए सुई की एक कोमल दोलन गति शामिल. एमटीआरपी का विकास ऊर्जा संकट सिद्धांत से जुड़ा हुआ है, जो बताता है कि पुरानी मांसपेशी अधिभार, अत्यधिक व्यायाम, अनुचित परिश्रम मुद्राएं, मांसपेशी शोष और अध: पतन जैसे कारक मांसपेशियों के ऊतकों इस्किमिया और हाइपोक्सिया की शुरुआत में योगदान कर सकते हैं। मांसपेशियों के ऊतकों के भीतर यह ऑक्सीजन और ऊर्जा की कमी एमटीआरपीएस15,16 के गठन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है। पिछले पशु अध्ययन चूहों में पुराने दर्द के लिए एफएसएन उपचार रूपात्मक संरचना और कुछ हद तक टीएम में माइटोकॉन्ड्रिया के समारोह में सुधार करता है, क्षतिग्रस्त नसों और मांसपेशियों17 की वसूली को बढ़ावा देने के लिए एफएसएन चिकित्सा की क्षमता को मान्य करता है।

कटिस्नायुशूल को न्यूरोपैथिक दर्द18 के रूप में वर्गीकृत किया गया है। न्यूरोपैथिक दर्द की उत्पत्ति मोटर एंडप्लेट और मांसपेशियों की बाहरी रेशेदार परत के बीच कहीं भी झूठ माना जाता है, जिसमें सेलुलर स्तर पर माइक्रोवास्कुलर सिस्टम और न्यूरोट्रांसमीटर शामिल होते हैं। मांसपेशियों के संक्रमण और संक्रमित तंत्रिका कोशिकाओं के एपोप्टोसिस का नुकसान तब होता है जब तंत्रिका क्षति19 होती है, जिससे प्रभावित अंग में दर्द से संबंधित चाल होती है। इसके अतिरिक्त, तंत्रिका की पुरानी संपीड़न या जलन तंत्रिका कार्यों के तरीके में कई तरह के बदलाव कर सकती है, जो कटिस्नायुशूल20 के लक्षणों को और बढ़ा सकती है। हालांकि, तंत्रिका तंत्र की जटिलता इसे इन विट्रो में दोहराना मुश्किल बनाती है, इस प्रकार इस तरह के अध्ययनों के लिए पशु मॉडल के उपयोग की आवश्यकता होती है। न्यूरोपैथिक दर्द विकारों की जांच में, मॉडल जीवों को आमतौर पर नियोजित किया जाता है, जिसमें प्रत्यक्ष परिधीय तंत्रिका चोट के विभिन्न तरीके शामिल होते हैं, जैसे कि कटिस्नायुशूल तंत्रिका संयुक्ताक्षर, ट्रांससेक्शन या संपीड़न21,22। स्प्रेग-डॉली चूहों में क्रोनिक कसना चोट (सीसीआई) मॉडल का उपयोग न्यूरोपैथिक दर्द को प्रेरित करने के लिए किया गया है। यह मॉडल एक परिधीय तंत्रिका के सर्जिकल कसना के माध्यम से मनुष्यों में देखी गई तंत्रिका चोट से प्रेरित दर्द को दोहराता है, तंत्रिका संपीड़न सिंड्रोम और परिधीय न्यूरोपैथी जैसी स्थितियों में देखे गए संपीड़न या फंसाने की नकल करता है।

इस अध्ययन में, हमने पुरानी कसना चोट और न्यूरोपैथिक दर्द वाले चूहों में एफएसएन थेरेपी और कम आवृत्ति इलेक्ट्रोथेरेपी (ट्रांसक्यूटेनियस इलेक्ट्रिकल नर्व स्टिमुलेटर, टीएनएस) के एनाल्जेसिक प्रभावों का मूल्यांकन किया। संज्ञाहरण धीमा कर देता है या तंत्रिका आवेगों ब्लॉक और synaptic संचरण और neuronal समारोह23 को प्रभावित करता है के रूप में, जानवरों सभी सुई लगाने प्रक्रियाओं और लहराते आंदोलनों के तहत संवेदनाहारी नहीं किया जा सकता. इसलिए, चूहों में असुविधा को कम करने के लिए एक उपयुक्त सुई तकनीक की आवश्यकता होती है। चूहा सीसीआई मॉडल स्थापित करने के लिए कदम, जिस तरह से चूहों को संज्ञाहरण के बिना एफएसएन संयुक्त लहराते आंदोलन के साथ इलाज किया गया था, व्यवहार्य पशु व्यवहार पैटर्न परीक्षण, और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल जांच का विस्तार से वर्णन किया गया है।

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Protocol

पशु विषयों से जुड़ी सभी प्रक्रियाओं को चांग बिंग शो च्वान मेमोरियल अस्पताल, चंगुआ, ताइवान (111031) की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अक्टूबर 2022 (चित्र 1) को अनुमोदित किया गया था।

1. जानवरों की तैयारी

  1. 48 नर स्प्रैग-डॉली (एसडी) चूहों (आयु: 8-10 सप्ताह, वजन: 250-300 ग्राम) खरीदें।
  2. 24 ± 2 डिग्री सेल्सियस और 12 घंटे अंधेरे और प्रकाश चक्र पर हवादार पिंजरों में व्यक्तिगत रूप से घर के चूहों।
  3. चूहों को उपयोग के लिए तैयार बाँझ पीने के पानी के साथ एक मानक गोली आहार खिलाएं, और नरम बिस्तर प्रदान करें।

2. जानवरों का समूह

  1. बेतरतीब ढंग से 48 एसडी चूहों को छह समूहों (एन = 8 प्रति समूह) में विभाजित करें: शम समूह, सीसीआई समूह, सीसीआई + एफएसएन समूह, सीसीआई + दसियों समूह, एफएसएन अकेले समूह, और टीएनएस अकेले समूह जैसा कि चैन एट अल24द्वारा किए गए पिछले अध्ययन में है।
    नोट: छह समूहों का विवरण: (1) शम समूह: कोई सर्जरी और कोई इलाज नहीं; (2) सीसीआई समूह: बिना किसी उपचार के सर्जरी के लिए तैयार; (3) सीसीआई + एफएसएन उपचार समूह: सफल सीसीआई मॉडलिंग के बाद एफएसएन उपचार; (4) सीसीआई + टीएनएस उपचार समूह: सफल सीसीआई मॉडलिंग के बाद टीएनएस उपचार; (5) एफएसएन उपचार अकेले समूह: सर्जरी के बिना केवल एफएसएन उपचार; (6) TENS उपचार अकेले समूह: सर्जरी के बिना केवल TENS उपचार।

3. सीसीआई चूहा मॉडल की स्थापना

नोट: चूहों में सीसीआई सर्जरी मॉडल बेनेट और ज़ी 198825 में आयोजित के अनुसार संशोधित किया गया था.

  1. सुनिश्चित करें कि ऑपरेटर एक सर्जिकल मास्क, डिस्पोजेबल ऑपरेटिंग कैप और बाँझ दस्ताने पहनता है।
  2. 70% इथेनॉल के साथ शल्य चिकित्सा तालिका की सतह कीटाणुरहित. उपकरणों (जैसे, कैंची, संदंश, और retractors), धुंध, स्टेपल, और कपास झाड़ू autoclaving द्वारा बाँझ.
    नोट: सर्जिकल प्रक्रिया के दौरान सड़न रोकनेवाला तकनीकों का उपयोग किया जाता है।
  3. मानक त्वचा की तैयारी (शेविंग) के बाद 4% आइसोफ्लुरेन के साथ चूहों को एनेस्थेटाइज करें और 2% आइसोफ्लुरेन(चित्रा 2ए)के साथ बनाए रखें।
    1. हिंद पंजा चुटकी और प्रक्रिया के दौरान संवेदनाहारी चूहों की निगरानी के बाद प्रतिक्रिया की कमी को देखकर संज्ञाहरण की उचित गहराई की पुष्टि करें।
    2. सुखाने से सुरक्षा के लिए आंखों पर पर्याप्त पशु चिकित्सा नेत्र मरहम लागू करें।
  4. ऑपरेटिंग टेबल पर प्रवण स्थिति में चूहे रखें और दाहिने हिंद पैर के किनारे पर बालों को दाढ़ी, फिर पोविडोन-आयोडीन समाधान और 75% इथेनॉल के साथ त्वचा को तीन बार कीटाणुरहित करें। पूरी प्रक्रिया में थर्मल सहायता प्रदान करें और सर्जिकल साइट को कवर करने के लिए बाँझ पर्दे का उपयोग करें।
    1. लगभग 20-50 मिमी की फीमर के नीचे 3-4 मिमी त्वचा में एक समानांतर चीरा बनाओ।
    2. ग्लूटस मैक्सिमस और बाइसेप्स फेमोरिस की स्थिति की पहचान को प्राथमिकता दें। सर्जिकल कैंची का उपयोग करके परत द्वारा चमड़े के नीचे की वसा और सतही प्रावरणी परत को अलग करें, मांसपेशियों को बेनकाब करने के लिए आसपास के संयोजी ऊतक के माध्यम से काटें (चित्र 2बी)।
      नोट: चमड़े के नीचे वसा और सतही प्रावरणी परतों को अलग करने के लिए, बनावट और रंग का निरीक्षण करें। चमड़े के नीचे की वसा परत को पीले या सफेद रंग की उपस्थिति के साथ नरम और व्यवहार्य दिखाई देनी चाहिए। सतही प्रावरणी एक पतली रेशेदार परत है जो सीधे चमड़े के नीचे की वसा के नीचे स्थित होती है। परतों के बीच अंतर धीरे palpating या एक कुंद साधन के साथ जांच करके, यह देखते हुए कि चमड़े के नीचे वसा सतही प्रावरणी की तुलना में दबाव के लिए अधिक प्रतिरोध प्रदान करता है.
  5. कुंद कैंची का प्रयोग, सतही ग्लूटस और बाइसेप्स femoris मांसपेशियों के बीच संयोजी ऊतक कटौती.
    1. कटिस्नायुशूल तंत्रिका (चित्रा 2 सी) का पर्दाफाश करने के लिए एक रिट्रैक्टर का उपयोग करके इन दो मांसपेशियों के बीच की खाई को चौड़ा करें।
      नोट: नेत्रहीन एक चूहे में sciatic तंत्रिका की पहचान करने के लिए, जांघ क्षेत्र पर ध्यान केंद्रित. कटिस्नायुशूल तंत्रिका कल्पना करने के लिए जांघ क्षेत्र के मध्य बिंदु का पता लगाएँ. आमतौर पर, तंत्रिका जांघ के पीछे के पहलू के साथ चलती है, कूल्हे क्षेत्र से शुरू होती है और घुटने की ओर फैलती है।
    2. तंत्रिका आकृति विज्ञान को बदलने के बिना, एक अच्छा प्रकाश स्रोत के माध्यम से एक microneedle के साथ sciatic तंत्रिका उठाने. 3-0 क्रोमिक आंत संयुक्ताक्षर का उपयोग करके दो बार कटिस्नायुशूल तंत्रिका को लिगेट करें, दो टांके के बीच लगभग 1 मिमी के अलावा संयुक्ताक्षर बिंदुओं की स्थिति।
    3. प्रत्येक संयुक्ताक्षर के लिए एक ढीला पाश के साथ शुरू, पाश के करीब संयुक्ताक्षर के सिरों को समझ और कसने जब तक पाश सिर्फ सुखद है, सुनिश्चित करें कि संयुक्ताक्षर तंत्रिका के साथ पर्ची नहीं करता है. बंधाव (चित्रा 2 डी) के दौरान अंग की मामूली मरोड़ मनाया जाता है जब बंद करो.
  6. 4-0 सिवनी लाइनों के साथ परत द्वारा मांसपेशियों और त्वचा परत बंद करें. अंत में, आयोडीन (चित्रा 2E) के साथ घाव कीटाणुरहित.
  7. बारीकी से संज्ञाहरण के दौरान चूहों 'महत्वपूर्ण संकेत की निगरानी और उन्हें व्यक्तिगत वसूली पिंजरों में जगह जब तक वे उन्हें अपने पिंजरों में वापस रखने से पहले जाग रहे हैं. बेहोश जानवरों में श्वासावरोध को रोकने के लिए फ्लैट पेपर बिस्तर के साथ पिंजरों को लाइन करें। पोस्ट-ऑपरेटिव अंग में एक संक्षिप्त चिकोटी एक सफल ऑपरेशन(चित्रा 2एफ)इंगित करता है।
  8. सीसीआई (बेसलाइन) से पहले और सीसीआई के बाद अलग-अलग समय बिंदुओं पर कई बार दर्द अतिसंवेदनशीलता परीक्षण करें।
  9. मॉडल निर्माण के बाद 1, 3, 5 और 7 दिनों में सहज दर्द और व्यवहार परिवर्तन के लिए निरीक्षण करें।
    नोट: सही हिंद अंग की चाल और मुद्रा और अंग पर चाट और काटने की उपस्थिति का निरीक्षण करें।
    1. मॉडल की सफल स्थापना का निर्धारण करने और असफल चूहों को बाहर करने के लिए न्यूरोपैथिक दर्द की उपस्थिति को पहचानें।
      नोट: इस तरह के निचले अंग चलने में कमजोरी के रूप में संकेत देखकर मॉडल की सफलता का आकलन करें, दाहिने अंग के पैर की उंगलियों हल्के वाल्गस, लगातार झूलने, और भूमि के लिए अनिच्छा के साथ एक साथ आयोजित. वजन का समर्थन बाएं हिंद अंग के साथ खड़े चूहे का निरीक्षण करें, जबकि सही हिंद अंग उठाया और पेट के करीब है.

4. एफएसएन हेरफेर का प्रशासन

  1. एफएसएन उपचार समूह (सीसीआई + एफएसएन और एफएसएन अकेले समूह सहित) के चूहे को कृंतक संयम में ठीक करें, प्रभावित अंग को बाद में उजागर करें। पूरी प्रक्रिया के दौरान थर्मल सपोर्ट प्रदान करें। दोनों समूहों एफएसएन डिस्पोजेबल सुइयों (चित्रा 3 ए) के साथ इलाज किया गया.
  2. संज्ञाहरण के बिना, चूहे के हिंद अंगों को धीरे-धीरे और धीरे-धीरे बढ़ाएं जब तक कि वे तंग (चित्रा 3बी)तक नहीं बढ़ाते।
    नोट: चूहे सिर पशु शांत और स्थिर रखने के लिए एक शल्य चिकित्सा कपड़ा के साथ कवर किया गया है. चूहे को चोट पहुंचाने के लिए पैर को अधिक न बढ़ाएं। संकट या बेचैनी के किसी भी लक्षण के लिए चूहे की प्रतिक्रिया का बारीकी से निरीक्षण करें। यदि चूहा दर्द या बेचैनी के लक्षण दिखाता है, तो एक्सटेंशन को रोकें और फिर से प्रयास करने से पहले एक ब्रेक प्रदान करें।
  3. एफएसएन सुई की रक्षा म्यान निकालें।
    1. एफएसएन सुई की नोक को टीएम (एमटीआरपी के साथ मांसपेशियों) की ओर डालें, लगभग ग्लूटस मैक्सिमस मांसपेशी के करीब, पीठ के निचले हिस्से और पीछे स्थित है।
  4. एफएसएन सुई फ्लैट रखें और लगभग 15 डिग्री के कोण पर त्वचा में प्रवेश करें।
    1. पूरी तरह से डाला जब तक चूहे में तनाव को रोकने के लिए त्वचा के माध्यम से और चमड़े के नीचे अंतरिक्ष में ध्यान से और जल्दी से धक्का. सुनिश्चित करें कि सुई पूरी तरह से त्वचा के नीचे नरम ट्यूब दफन करने के लिए पर्याप्त डाला जाता है.
    2. जब आगे धक्का, थोड़ा त्वचा उभार सुई टिप (चित्रा 3C) के साथ चलता है अगर निरीक्षण करने के लिए सुई टिप उठा.
  5. तर्जनी, मध्यमा उंगली और अनामिका को एक सीधी रेखा में संरेखित रखते हुए अंगूठे के साथ एफएसएन सुई टिप को आसानी से और धीरे से पंखा करके लहराते आंदोलन करें।
    1. आमने-सामने की स्थिति में मध्य उंगली और अंगूठे के बीच एफएसएन सुई को पकड़ें, और तर्जनी और अनामिका का उपयोग करके आंदोलन को आगे और पीछे वैकल्पिक करें।
    2. आवृत्ति को प्रति मिनट 100 स्ट्रोक पर सेट करें और लगभग 1 मिनट(चित्रा 3डी)के लिए ऑपरेशन करें।
  6. हेरफेर पूरा करने के बाद, जल्दी से एफएसएन सुई वापस ले लें।
    नोट: ऑपरेशन हर 2 दिनों में कुल चार सत्रों (सीसीआई मॉडल बनाए जाने के बाद 1, 3, 5 और 7 दिन) के लिए किया गया था। डिस्पोजेबल एफएसएन सुइयों का उपयोग एक बार किया जाना चाहिए। बार-बार उपयोग सुई को कुंद कर देगा और चूहों में दर्द बढ़ जाएगा।

5. TENS हेरफेर का प्रशासन

  1. कृंतक संयम में TENS उपचार समूह (CCI + TENS और TENS अकेले समूह सहित) के चूहे को ठीक करें, प्रभावित अंग को बाद में उजागर करें। पूरी प्रक्रिया के दौरान थर्मल सपोर्ट प्रदान करें। सुनिश्चित करें कि इलाज से पहले फर मुंडा है।
    नोट: इलेक्ट्रोड को 5 मिमी (चौड़ाई)(चित्रा 4ए)द्वारा 45 मिमी (लंबाई) में काट दिया गया था।
  2. TENS के लिए स्थानों के रूप में Zusanli बिंदु (ST36) और Sanyinjiao बिंदु (SP6) चुनें। यह न्यूरोपैथिक दर्द26,27 के इलाज के लिए सिद्धांत पर आधारित है.
    1. ज़ुसानली बिंदु (एसटी 36) घुटने28 के ठीक नीचे टिबिया और फाइबुला के बीच टिबिया के पूर्वकाल ट्यूबरकल के लिए लगभग 5 मिमी पार्श्व का पता लगाएँ।
    2. टिबिया के पीछे की सीमा पर Sanyinjiao बिंदु (SP6) का पता लगाएँ, औसत दर्जे का malleolus28 के लिए 3 मिमी समीपस्थ।
      नोट: इन दोनों एक्यूपंक्चर बिंदुओं को स्टक्स और पोमेरानज़ द्वारा वर्णित मैनुअल निरीक्षण द्वारा और पशु एक्यूपंक्चर एटलस28,29(चित्रा 4बी)में स्थित किया गया है।
  3. तंत्रिका के चारों ओर पैर पर लागू इलेक्ट्रोड के साथ TENS डिवाइस का उपयोग करके 10 मिनट के लिए कम आवृत्ति विद्युत उत्तेजना (2 हर्ट्ज निरंतर साइन लहर, 3 एमए) वितरित करें। यह शांत और स्थिर रखने के लिए एक शल्य चिकित्सा कपड़ा के साथ चूहे सिर के सिर को कवर.
    नोट: यह प्रक्रिया कुल चार सत्रों (सीसीआई मॉडल बनाए जाने के बाद दिन 1, 3, 5 और 7) के लिए हर 2 दिनों में की जाती है।

6. शारीरिक माप पशु व्यवहार परीक्षण प्रदर्शन

नोट: कटिस्नायुशूल समारोह सूचकांक (एसएफआई)30 पैथोलॉजी और तंत्रिका चोटों के संभावित उपचार का अध्ययन करने वाले शोधकर्ताओं द्वारा व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला सूचकांक है, जो कि विपरीत पंजा के साथ घायल चूहों में प्रभावित हिंद पंजा की ज्यामिति की तुलना करके और विपरीत पंजा के साथ तुलना करके निर्धारित किया जाता है।

  1. चलने के दौरान चूहों के पैरों के निशान और शरीर के उन्मुखीकरण को पकड़ने के लिए स्पष्ट plexiglass और झुकाव दर्पणों के साथ चूहे के रास्ते को डिजाइन करें।
    नोट: वॉकवे एक मंच है जो 10 सेमी लंबा, 50 सेमी चौड़ा और 15 सेमी ऊंचा है जिसमें तल पर एक श्वेत पत्र अस्तर है (चित्र 5A)।
  2. धीरे और स्वतंत्र रूप से बॉक्स में चूहों जगह और उन्हें रिकॉर्डिंग से पहले कम से कम 5 मिनट के लिए अपने नए वातावरण के लिए अभ्यस्त करने के लिए अनुमति देते हैं.
    नोट: विशेष देखभाल postural मांसपेशी तनाव पर इसके संभावित प्रभाव से बचने के लिए जानवर पर अनावश्यक तनाव को कम करने के लिए लिया जाता है.
  3. लाल स्याही में चूहे के पंजे डुबकी और चूहे walkway पट्टी के साथ चलने के लिए अनुमति देते हैं, बैकिंग कागज पर निशान छोड़ने. प्रत्येक परीक्षण के लिए निरंतर चलने के कम से कम 2 एस रिकॉर्ड। चूहे को एक दिशा में कम से कम 3 बार चलें (चित्र 5बी)।
    नोट: हिंद पैरों के निशान स्पष्ट रूप से दिखाई देने के लिए दोनों हिंद पैरों के लिए त्वरित सुखाने, गैर विषैले, पानी में घुलनशील लाल स्याही लागू करें।
  4. प्रयोग के अंत में, मापदंडों को मापने के लिए walkway स्ट्रिप्स सूखी. एक शासक के साथ उनके पैरों के निशान को मापें और निकटतम 0.5 मिमी तक गोल करें।
    नोट: प्रत्येक चूहे से तीन स्पष्ट पैरों के निशान कई पैरों के निशान से चुने गए थे, और तीन अलग अलग मापदंडों मापा गया. एसएफआई के कारकों में प्रिंट लंबाई (पीएल), टो स्प्रेड (टीएस), और इंटरमीडिएट टो स्प्रेड (आईटीएस) शामिल हैं।
    SFI मानों की गणना निम्न सूत्र31 का उपयोग करके की जाती है:
    Equation 1
    (ईपीएल, प्रयोगात्मक प्रिंट लंबाई; एनपीएल, सामान्य प्रिंट लंबाई; ईटीएस, प्रयोगात्मक पैर की अंगुली फैल गई; एनटीएस, सामान्य पैर की अंगुली फैल गई; ईआईटी, प्रयोगात्मक मध्यवर्ती पैर की अंगुली फैल गई; एनआईटी, मध्यवर्ती पैर की अंगुली फैल गई।
    एसएफआई = 0 और - 100 सामान्य और पूर्ण शिथिलता को इंगित करता है। अपने पैर की उंगलियों को खींचने वाले चूहों को मनमाने ढंग से -100 का मान सौंपा गया था। सामान्य न्यूरोलॉजिकल फ़ंक्शन के लिए, एसएफआई 0 के आसपास दोलन करता है, जबकि लगभग -100 एसएफआई पूर्ण शिथिलता32 का प्रतिनिधित्व करता है।

7. इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल माप द्वारा न्यूरोफिजियोलॉजिकल मूल्यांकन33

नोट: इलेक्ट्रोमोग्राफी का उपयोग इस अध्ययन में इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल गतिविधि को रिकॉर्ड करने के लिए किया गया था। यौगिक मांसपेशी क्रिया क्षमता (सीएमएपी) तंत्रिका द्वारा आपूर्ति की गई लक्ष्य मांसपेशी में मांसपेशी फाइबर की सक्रियता के कारण होती है। सीएमएपी आयाम और विलंबता की जांच की जाती है। सीएमएपी आयाम को बेसलाइन से नकारात्मक शिखर तक मापा जाता है। सीएमपी की विलंबता उत्तेजना के आवेदन और यौगिक कार्रवाई क्षमता की शुरुआत के बीच के समय को मापने के द्वारा निर्धारित की जाती है, जो उत्तेजना साइट और रिकॉर्डिंग साइट के बीच की दूरी से प्रभावित होती है। इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी चूहों में परिधीय तंत्रिका समारोह का एक उद्देश्य मूल्यांकन प्रदान करता है।

  1. चूहों को एनेस्थेटाइज करने के लिए ज़ोलेटिल 50 (40 मिलीग्राम/किग्रा, आईपी) का प्रशासन करें। मानक प्रोटोकॉल (शेविंग) के अनुसार त्वचा तैयार करें।
  2. निर्दिष्ट क्षेत्रों पर डिस्पोजेबल चिपकने वाला सतह इलेक्ट्रोड (20 मिमी बाहरी व्यास) रखें। गैस्ट्रोकनेमियस मांसपेशी (चित्रा 6 ए) के पार्श्व और पृष्ठीय सतहों पर रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड को ठीक करें।
  3. सही समीपस्थ sciatic तंत्रिका स्टेम करने के लिए विद्युत उत्तेजना (तीव्रता 1.2 एमए) लागू करें. गैस्ट्रोकनेमियस मांसपेशी (चित्रा 6बी)के पेट पर एक यौगिक मांसपेशी क्रिया क्षमता (सीएमएपी) रिकॉर्ड करें।
    नोट: मांसपेशियों के ऊतकों से बचने के लिए इलेक्ट्रोड डालने पर सावधान रहें।
  4. प्रत्येक चूहे के लिए तीन दोहराया माप के प्रभाव रिकॉर्ड.
    नोट: सीएमएपी को प्रत्येक समूह के एसडी ± माध्य के रूप में व्यक्त किया जाता है। सिग्नल को एक एम्पलीफायर द्वारा प्रवर्धित किया गया था, फ़िल्टर किया गया (0.3-3 kHz)। एकीकरण के बाद (समय स्थिरांक = 0.05 सेकंड), मूल संकेत और एकीकृत संकेत दोनों इनपुट हैं। मूल सिग्नल और एकीकृत सिग्नल को तब पावरलैब सिस्टम में डिजिटाइज़ किया जाता है और कंप्यूटर हार्ड डिस्क पर संग्रहीत किया जाता है।
  5. इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी प्रक्रियाओं को पूरा करने के बाद, चूहे को एक अलग पिंजरे में ले जाएं और इसकी निगरानी करें जब तक कि यह एक स्टर्नल लेटा हुआ स्थिति बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना प्राप्त न कर ले। एक बार चूहा पूरी तरह से संवेदनाहारी से बरामद किया है, यह अपने मूल पिंजरे में वापस हस्तांतरण.

8. सांख्यिकी:

  1. विचरण (एनोवा) के बार-बार उपायों के विश्लेषण का उपयोग करके समूहों के बीच एसएफआई और सीमैट में अंतर का मूल्यांकन करें।
  2. उन सहायकों द्वारा डेटा की मात्रा निर्धारित करें जो प्रयोगात्मक स्थितियों के लिए अंधे हैं। आँकड़ों को मानक विचलन के माध्य ± रूप में व्यक्त कीजिए।
  3. डेटा की तुलना करें, जब उपयुक्त हो, छात्र के दो-पूंछ वाले युग्मित और अयुग्मित टी-परीक्षण का उपयोग करके। पी < 0.05 के रूप में सांख्यिकीय महत्व स्थापित करें।

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Representative Results

एसएफआई के पदचिह्न और दृढ़ संकल्प
हमने अकेले सीसीआई में एसएफआई के विकास की जांच की, सीसीआई + एफएसएन, और सीसीआई + टीएनएस समूह (चित्र 7)। सीसीआई सर्जरी के लिए 7 दिन एफएसएन और टीएनएस उपचार के 4 सत्रों के बाद, सीसीआई + एफएसएन (-15.85 ± 3.46) और सीसीआई + टीएनएस (-29.58 ± 9.19) समूहों में एसएफआई अकेले सीसीआई समूह (-87.40 ± 14.22) की तुलना में काफी सुधार हुआ। सीसीआई + टीएनएस समूह (चित्रा 7 ए) की तुलना में सीसीआई + एफएसएन समूह में सुधार महत्वपूर्ण था।

हमने एसएफआई की जांच दिखावा (0.02 ± 0.52), अकेले एफएसएन (0.06 ± 1.75), और अकेले टीएनएस (-2.36 ± 1.22) समूहों में भी की। परिणामों से पता चला है कि इन अंतिम दो समूहों में से कोई भी और नकली समूह एक दूसरे (चित्रा 7 बी) से कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। यह इंगित करता है कि एफएसएन और टीएनएस सुरक्षित उपचार हैं जो चूहों को उनकी स्वस्थ अवस्था (तालिका 1) में कोई नुकसान नहीं पहुंचाते हैं।

इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल प्रतिक्रिया
हमने अकेले सीसीआई में सीएमएपी के आयाम के विकास की जांच की, सीसीआई + एफएसएन, और सीसीआई + टीएनएस उपचार समूहों (चित्रा 8)। सीसीआई + एफएसएन (5.01 एमवी ± 0.67 एमवी) और सीसीआई + टीएनएस (4.64 एमवी ± 1.96 एमवी) समूहों में सीएमएपी के आयाम में सीसीआई अकेले समूह (1.80 एमवी ± 0.34 एमवी) (तालिका 2) की तुलना में काफी सुधार हुआ। सीसीआई + एफएसएन और सीसीआई + दसियों समूहों ने कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया(चित्र 8ए)।

हमने अकेले CCI, CCI + FSN और CCI + TENS समूहों में CMAP की विलंबता चोटियों के विकास की भी जांच की। सीसीआई + एफएसएन (2.46 एमएस ± 0.72 एमएस) और सीसीआई + दसियों (2.26 एमएस ± 0.97 एमएस) समूहों में सीएमएपी की विलंबता चोटियों ने सीसीआई अकेले समूह (1.23 एमएस ± 0.22 एमएस) (तालिका 3) की तुलना में काफी सुधार किया। सीसीआई + एफएसएन और सीसीआई + टीएनएस समूहों ने कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया(चित्रा 8सी)।

सीएमएपी आयाम और विलंबता की जांच दिखावा (5.80 एमवी ±0.53 एमवी; 2.35 एमएस ± 0.37 एमएस), अकेले एफएसएन (5.70 एमवी ± 0.45 एमवी; 2.64 एमएस ± 0.41 एमएस), और अकेले दसियों (5.54 एमवी ± 0.92 एमवी; 2.61 एमएस ± 0.20 एमएस) समूहों में जांच की गई थी, उनमें से किसी के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नोट नहीं किया गया था। यह इंगित करता है कि एफएसएन और टीएनएस दोनों सुरक्षित उपचार हैं और चूहों को उनके स्वस्थ राज्य (चित्रा 8बी, डी) में नुकसान नहीं पहुंचाते हैं।

Figure 1
चित्रा 1: सीसीआई चूहा मॉडल की स्थापना के लिए समयरेखा का योजनाबद्ध दृश्य। दर्द थ्रेसहोल्ड मॉडलिंग (-7 दिन) के बाद पहले दिन से मापा जाता है और फिर उसके बाद हर 2 दिन (-5, -3, -1 दिन) से मापा जाता है। दिन 1 पर मापा दर्द थ्रेसहोल्ड सफल मॉडलिंग का संकेत मिलता है। मॉडलिंग के बाद, हस्तक्षेप और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल माप 1 दिन पर शुरू किए जाते हैं। CCI+FSN, CCI+TENS, अकेले FSN, और TENS अकेले समूहों को क्रमशः 1, 3, 5 और 7 दिनों में निश्चित समय बिंदुओं पर FSN या TENS के साथ व्यवहार किया गया था। चूहों को इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल और शारीरिक माप के बाद 7 वें दिन बलिदान किया गया था। संक्षिप्ताक्षर: FSN: फू की चमड़े के नीचे की नीडलिंग; दसियों: transcutaneous विद्युत तंत्रिका उत्तेजना; सीसीआई: पुरानी कसना चोट; एसएफआई: sciatic समारोह सूचकांक. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: चूहों के sciatic तंत्रिका के neuropathic दर्द उत्प्रेरण के लिए क्रोनिक कसना चोट (सीसीआई). (ए) स्थिति और कीटाणुशोधन के बाद, चूहे के दाहिने हिंद पैर मुंडा है. फीमर से 3-4 मिमी ऊपर त्वचा में एक समानांतर चीरा लगाया जाता है। (बी) मांसपेशियों को तनाव देते समय, मांसपेशियों के तंतुओं को अलग करते हुए, और फिर उन्हें पूरी तरह से बंद किए बिना परतों में हटाते हुए साइट को सावधानी से दर्ज किया जाता है। सतही ग्लूटस और बाइसेप्स फेमोरिस मांसपेशियों के बीच संयोजी ऊतक को उकसाया जाता है और प्रावरणी को परत दर परत अलग किया जाता है। (सी) चीरा खुला रहता है, सही पार्श्व sciatic तंत्रिका को उजागर. (डी) संयुक्ताक्षर एक 3-0 क्रोमियम सिवनी का उपयोग कर sciatic तंत्रिका के चारों ओर बंधा हुआ है, यह सुनिश्चित करना कि संयुक्ताक्षर जगह में सुरक्षित है और तंत्रिका के साथ पर्ची नहीं करता है और तंत्रिका के बाहरी झिल्ली के लिए रक्त के प्रवाह को प्रतिबंधित है. (ई) मांसपेशियों की परत और त्वचा को टांके का उपयोग करके बंद कर दिया जाता है। (एफ) पश्चात अंग में एक संक्षिप्त चिकोटी (लाल घेरे sciatic तंत्रिका के टर्मिनल शाखा का संकेत देते हैं) एक सफल ऑपरेशन इंगित करता है. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: फू के चमड़े के नीचे सुई (एफएसएन) में हेरफेर। (ए) हिंद अंगों के साथ कृंतक संयम में चूहे को ठीक करें, तनाव से बचें (बी) एफएसएन सुई को कड़ा मांसपेशियों की ओर डाला जाता है, लगभग ग्लूटस मैक्सिमस मांसपेशी के करीब। (ग) सुई त्वचा में डाला जाता है सुई टिप त्वचा के लिए लगभग 15 डिग्री पर रखा के साथ. (डी) फू चमड़े के नीचे की सुई के लहराते आंदोलन (काला पंखा)। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: स्थिति और transcutaneous विद्युत तंत्रिका उत्तेजना (TENS) लागू करने के लिए चूहे की त्वचा की सतह पर इलेक्ट्रोड के निर्धारण. (ए) इलेक्ट्रोड, 5 मिमी (चौड़ाई) से 45 मिमी (लंबाई) में कटौती, चूहे पर रखा. (बी) एसटी 36 और एसपी 6 एक्यूपॉइंट्स का स्थान। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्रा 5: वॉकवे पर पैरों के निशान रिकॉर्डिंग। (ए) कटिस्नायुशूल कार्यात्मक सूचकांक (एसएफआई) मूल्यांकन द्वारा शारीरिक माप के लिए वॉकवे। (बी) 7वें दिन पोस्टऑपरेटिव रूप से रिकॉर्ड किए गए पैरों के निशान। कई पशु पंजा मापों में अंतर दिखावटी, CCI, CCI+FSN, CCI+TENS, अकेले FSN और TENS अकेले समूहों के पंजे के बीच अंतर कर सकता है। इंटर-टो (आईटी, दूसरे पैर की अंगुली से चौथे पैर की अंगुली के बीच अनुप्रस्थ दूरी), पैर की अंगुली प्रसार (टीएस, पहले से पांचवें पैर की अंगुली के बीच अनुप्रस्थ दूरी), और पंजा लंबाई (पीएल) जैसे माप का उपयोग मूल्यों की गणना करने के लिए किया जाता है एसएफआई। संक्षिप्ताक्षर: FSN: फू की चमड़े के नीचे की नीडलिंग; दसियों: transcutaneous विद्युत तंत्रिका उत्तेजना; सीसीआई: पुरानी कसना चोट। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 6
चित्रा 6: इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के माध्यम से चूहों की उत्तेजना तीव्रता और डिस्टल रिकॉर्डिंग साइट माप के एक समारोह के रूप में डिजिटल तंत्रिका गतिविधि में भिन्नता। (ए) यौगिक मांसपेशी क्रिया क्षमता (सीएमएपी) रिकॉर्डिंग के लिए इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल माप। रिकॉर्डिंग और संदर्भ इलेक्ट्रोड (नीले पैच) पार्श्व और औसत दर्जे का गैस्ट्रोकनेमियस मांसपेशियों पर रखा जाता है, क्रमशः, और विद्युत उत्तेजना संज्ञाहरण प्रेरित और Zoletil के साथ बनाए रखा के तहत सही sciatic तंत्रिका ट्रंक के समीपस्थ अंत करने के लिए लागू किया जाता है. (बी) प्रतिनिधि सीएमएपी 4 उपचार (जानवर की इच्छामृत्यु से पहले) के बाद शम, सीसीआई, सीसीआई + एफएसएन, सीसीआई + टीएनएस, अकेले एफएसएन, और अकेले टीएनएस समूहों का पता लगाता है। बेसलाइन-टू-पीक (बी-पी) और पीक-टू-पीक (पी-पी) यौगिक मांसपेशी क्रिया क्षमता (सीएमएपी) आयामों की गणना करने के लिए, तरंग को बेसलाइन (I) से नकारात्मक शिखर (II) और नकारात्मक शिखर (II) से क्रमशः सकारात्मक शिखर (III) तक मापा जाता है। X-अक्ष समय (ms) का प्रतिनिधित्व करता है, और Y-अक्ष वोल्टेज (mV) का प्रतिनिधित्व करता है। संवेदनशीलता: 1 एमवी; अवधि: 2 एमएस, 1 एमएस प्रति फ्रेम। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 7
चित्रा 7: प्रत्येक समूह के लिए sciatic कार्यात्मक सूचकांक (एसएफआई)। (ए) सीसीआई, सीसीआई + एफएसएन, और सीसीआई + दसियों समूहों के बीच एसएफआई की तुलना (* पी < 0.05)। (बी) एसएफआई की तुलना दिखावटी, एफएसएन अकेले और अकेले टीएनएस समूहों के बीच। संक्षिप्ताक्षर: FSN: फू की चमड़े के नीचे की नीडलिंग; दसियों: transcutaneous विद्युत तंत्रिका उत्तेजना; सीसीआई: पुरानी कसना चोट; एसएफआई: sciatic समारोह सूचकांक. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 8
चित्रा 8: प्रत्येक समूह के लिए इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल निष्कर्ष। (ए) सीएमपी का आयाम, सीसीआई, सीसीआई + एफएसएन, और सीसीआई + टीएनएस समूहों के बीच तुलना (* पी < 0.05)। (बी) सीएमपी का आयाम, शम, एफएसएन अकेले और अकेले दसियों समूहों के बीच तुलना। (सी) सीमैप की विलंबता चोटियों, सीसीआई, सीसीआई + एफएसएन, और सीसीआई + टीएनएस समूहों के बीच तुलना (* पी < 0.05)। (डी) सीमैप की विलंबता चोटियों, शम, एफएसएन अकेले और अकेले टीएनएस समूहों के बीच तुलना। संक्षिप्ताक्षर: FSN: फू की चमड़े के नीचे की नीडलिंग; दसियों: transcutaneous विद्युत तंत्रिका उत्तेजना; सीसीआई: पुरानी कसना चोट; CMAP: यौगिक मांसपेशी क्रिया क्षमता। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

N औसत एसडी
धोखा 8 0.02 0.52
सीसीआई 8 -87.40 14.22
सीसीआई + एफएसएन 8 -15.85 3.46
सीसीआई + दस 8 -29.58 9.19
एफएसएन 8 0.06 1.75
दस 8 -2.36 1.22
एफएसएन: फू की चमड़े के नीचे की नीडलिंग;
दसियों: transcutaneous विद्युत तंत्रिका उत्तेजना;
सीसीआई: पुरानी कसना चोट।

तालिका 1: चूहों में sciatic कार्यात्मक सूचकांक के मूल्यों का सारांश.

N माध्य (mV) एसडी
धोखा 8 5.80 0.53
सीसीआई 8 1.80 0.34
सीसीआई + एफएसएन 8 5.01 0.67
सीसीआई + दस 8 4.64 1.96
एफएसएन 8 5.70 0.45
दस 8 5.54 0.92
एफएसएन: फू की चमड़े के नीचे की नीडलिंग;
दसियों: transcutaneous विद्युत तंत्रिका उत्तेजना;
सीसीआई: पुरानी कसना चोट;
CMAP: यौगिक मांसपेशी क्रिया क्षमता।

तालिका 2: चूहों में सीएमएपी आयाम पर इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल प्रतिक्रिया के मूल्यों का सारांश।

N मीन (एमएस) एसडी
धोखा 8 2.35 0.37
सीसीआई 8 1.23 0.22
सीसीआई + एफएसएन 8 2.46 0.72
सीसीआई + दस 8 2.26 0.97
एफएसएन 8 2.64 0.41
दस 8 2.61 0.20
एफएसएन: फू की चमड़े के नीचे की नीडलिंग;
दसियों: transcutaneous विद्युत तंत्रिका उत्तेजना;
सीसीआई: पुरानी कसना चोट।

तालिका 3: चूहों में विलंबता चोटियों पर इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल प्रतिक्रिया के मूल्यों का सारांश।

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Discussion

यह अध्ययन चूहे सीसीआई मॉडल में न्यूरोपैथिक दर्द पर एफएसएन उपचार के प्रभाव को देखता है। यह अध्ययन एफएसएन या टीएनएस उपचार के बाद चिकित्सीय प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए एसएफआई और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल परीक्षण के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। इसके अतिरिक्त, यह दिखाता है कि गैर-व्यवहार व्यवहार परीक्षण और शारीरिक माप का उपयोग करके घायल तंत्रिका की कार्यात्मक वसूली का मूल्यांकन कैसे किया जाए। परिणामों से पता चला कि सीसीआई-प्रेरित कटिस्नायुशूल तंत्रिका दर्द के बाद एफएसएन उपचार ने टीएनएस उपचार की तुलना में सभी रोगनिरोधी संकेतकों में काफी बेहतर सुधार दिखाया। इस शोध में बुनियादी अनुसंधान और नैदानिक अनुप्रयोग के बीच की खाई को पाटने के लिए एफएसएन थेरेपी पर केंद्रित पशु अध्ययन में भविष्य के अनुप्रयोगों के लिए काफी संभावनाएं हैं। यह अध्ययन रोग तंत्र को बेहतर ढंग से समझकर रोगी के परिणामों में सुधार करेगा

एक्यूपंक्चर 3000 से अधिक वर्षों के लिए चीन में इस्तेमाल किया गया है और अक्सर मनुष्यों और प्रयोगात्मक जानवरों34,35 में दर्द से राहत के लिए एक सुरक्षित और प्रभावी तरीका माना जाता है. पिछले नैदानिक अध्ययनों ने पुष्टि की है कि एक्यूपंक्चर सीसीआई मॉडल36 में दर्द व्यवहार को कम कर सकता है। एफएसएन, पारंपरिक चीनी एक्यूपंक्चर37 से विकसित एक एक्यूपंक्चर तकनीक के रूप में, व्यापक रूप से कई दर्द से संबंधित मस्कुलोस्केलेटल विकारों38,39 के इलाज के लिए उपयोग किया जाता है। दर्दनाक मस्कुलोस्केलेटल विकारों में इसकी संतोषजनक प्रभावकारिता के बावजूद, एफएसएन उपचार का अंतर्निहित तंत्र स्पष्ट नहीं है। जानवरों पर एक्यूपंक्चर प्रयोगों प्रदर्शन की कठिनाइयों, जटिलता और पारंपरिक एक्यूपंक्चर तकनीक और जानवर की असहज मुद्रा यों की कठिनाई सहित, एक्यूपंक्चर के लिए भय और प्रतिरोध के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, उचित एक्यूपंक्चर तकनीक और बिंदु स्थिति और अधिक कठिन बनाने, चोट का खतरा बढ़ रही है और प्रयोगात्मक डेटा40 को प्रभावित. जानवरों के अध्ययन में हाल के शोध ने एक्यूपंक्चर एनाल्जेसिया के अंतर्निहित तंत्र पर प्रकाश डाला है; एक्यूपंक्चर प्रेरित एनाल्जेसिया अंतर्जात ओपिओइड पेप्टाइड्स41 की रिहाई के साथ जुड़ा हुआ है। हालांकि, परिधि से प्रांतस्था तक दर्द संकेतों के संचरण के दौरान दर्द की धारणा पूरी तरह से संशोधित नहीं होती है, यह दर्शाता है कि अन्य कारक और तंत्र भी दर्द के अनुभव को प्रभावित कर सकते हैं।

सिमंस एट अल.42,43 द्वारा प्रस्तुत परिकल्पना के आधार पर, एमटीआरपी गठन दर्द संवेदना में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। ट्रिगर पॉइंट गठन के रोगजनन को मांसपेशियों के भीतर असामान्य मोटर एंडप्लेट से संबंधित माना जाता है। अत्यधिक acetylcholine रिलीज असामान्य समापन क्षमता और पट्टियों के गठन जो स्थानीय ischemia और हाइपोक्सिया hyperalgesia और असामान्य दर्द44,45 के लिए अग्रणी के परिणामस्वरूप लगातार मांसपेशियों में ऐंठन के लिए नेतृत्व कर सकते हैं की ओर जाता है. हांग46 द्वारा स्थापित सूखी सुइयों का उपयोग करके खरगोशों पर एमटीआरपी अध्ययन के लिए एक पशु मॉडल दर्शाता है कि सूखी सुई मांसपेशियों और रीढ़ की हड्डी में समीपस्थ एमटीआरपी को संशोधित कर सकती है। हालांकि, इस प्रयोग में केवल एक्यूपंक्चर और मांसपेशियों के बीच संबंधों पर चर्चा की गई थी, और तंत्रिका चोट के संबंध में कम पशु प्रयोग किए गए थे। एफएसएन तकनीक और सैद्धांतिक आधार के संदर्भ में पारंपरिक एक्यूपंक्चर या सूखी सुई के समान नहीं है। एफएसएन उपचार घायल तंत्रिका पर सीधे काम नहीं करता है, लेकिन चिकित्सकीय प्रभावी47,48 है. यह दिखाया गया था कि कई नैदानिक न्यूरोलॉजिकल विकारों में, मुख्य समस्या तंत्रिका के बजाय मांसपेशियों पर हो सकती है। इस अध्ययन में, सीसीआई के साथ एक तंत्रिका चोट मॉडल को शामिल करके और एफएसएन के साथ कटिस्नायुशूल तंत्रिका के आसपास की मांसपेशियों का इलाज करके, एफएसएन थेरेपी ने न्यूरोपैथिक दर्द में उल्लेखनीय कमी दिखाई और घायल तंत्रिका और मांसपेशियों की वसूली को बढ़ावा दिया।

इस प्रयोग का एक अतिरिक्त ध्यान संज्ञाहरण के बिना एफएसएन उपचार के लाभ है. एक पिछले अध्ययन से पता चला है कि संज्ञाहरण के बिना चूहों पर एक्यूपंक्चर प्रयोगों प्रदर्शन स्थिर तनाव49 के कारण हृदय गति, रक्तचाप, और हार्मोन के स्तर के रूप में शारीरिक मापदंडों को बदल सकते हैं. हालांकि, कुछ शोधकर्ताओं ने तर्क दिया है कि संज्ञाहरण के बिना एक्यूपंक्चर प्रयोगों के संचालन के लाभ स्थिरीकरण तनाव के संभावित प्रभावों पल्ला झुकना, यहां तक कि स्थिरीकरण तनाव50 के प्रभाव का प्रतिकार करते हैं। कृन्तकों के छोटे आकार और एनेस्थेटिक्स और एनाल्जेसिक के लिए उनकी अंतर संवेदनशीलता के कारण, सामान्य संज्ञाहरण के कारण चेतना के नुकसान के अलावा, जानवर दर्द का अनुभव नहीं कर सकते हैं। हालांकि, बेहोश जानवरों में, दर्दनाक उत्तेजनाओं अभी भी प्रेषित और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र51 के माध्यम से संसाधित कर रहे हैं. कृंतक जानवरों के छोटे आकार और एनेस्थेटिक्स और एनाल्जेसिक के लिए उनकी अंतर संवेदनशीलता के अलावा, बेहोश जानवरों में, दर्दनाक उत्तेजनाओं को अभी भी केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के माध्यम से प्रेषित और संसाधित किया जाता है। संज्ञाहरण के तहत इलाज जानवरों में μ- और δ-ओपिओइड रिसेप्टर विरोधी का उपयोग भी एक्यूपंक्चर40,52 की प्रभावकारिता के उलट कारण हो सकता है.

हमने इस अध्ययन के लिए नियंत्रण समूह के रूप में TENS का चयन किया। TENS एक दर्द निवारक उपचार है जो दवा53 के उपयोग के बिना इलेक्ट्रोड के माध्यम से त्वचा के माध्यम से प्रेषित कम आवृत्ति स्पंदित विद्युत धाराओं का उपयोग करता है। यह देखा गया कि कम आवृत्ति TENS संवहनी प्रतिक्रिया को बढ़ाने में उच्च आवृत्ति TENS की तुलना में अधिक प्रभावी था और CCI54 के कारण न्यूरोपैथिक दर्द के लिए एक संभावित उपचार हो सकता है। एक्यूपंक्चर न्यूरोपैथिक दर्द सहित स्थितियों के लिए प्रभावी है। हालांकि, परिणाम55 चुने गए एक्यूपंक्चर बिंदु के आधार पर काफी भिन्न हो सकते हैं, जबकि TENS विभिन्न स्थानों56 के चयन में कम परिवर्तनशीलता के साथ केंद्रीय निरोधात्मक मार्गों को सक्रिय करके नोसिसेप्टिव अतिसंवेदनशीलता को कम करता है।

हालांकि इस अध्ययन के परिणाम उत्साहजनक हैं, कुछ अध्ययन सीमाओं पर ध्यान दिया जाना चाहिए। फू के मार्गदर्शन के अनुसार, एक पूर्ण एफएसएन उपचार पद्धति में लहराते आंदोलन (निष्क्रिय उपचार) और रीपरफ्यूजन तकनीक (सक्रिय उपचार) शामिल होना चाहिए। हालाँकि, इस प्रयोग में केवल एक लहराता आंदोलन है; भविष्य में एक बेहतर पशु प्रयोग डिजाइन करना आवश्यक है। पिछले मानकीकृत परीक्षणों तंत्रिका संपीड़न के पशु मॉडल के आकलन व्यवहार विश्लेषण, इलेक्ट्रोमोग्राफी, immunohistochemistry और रूपात्मक मूल्यांकन57 सहित कई संकेतकों के एकीकरण की आवश्यकता है कि स्थापित किया है. हमारे अध्ययन में, हमने मुख्य रूप से एफएसएन थेरेपी की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए व्यवहार विश्लेषण और इलेक्ट्रोमोग्राफी का उपयोग किया। हालांकि, इस संदर्भ में इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री और रूपात्मक मूल्यांकन के संभावित महत्व के कारण, हम इस प्रकार की बीमारी में सुधार के लिए एफएसएन थेरेपी की प्रभावशीलता को बेहतर ढंग से मान्य करने के लिए भविष्य के अनुवर्ती परीक्षणों में इन घटकों को प्राथमिकता देने की आवश्यकता को पहचानते हैं।

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Disclosures

लेखक घोषणा करते हैं कि हितों का कोई प्रतिस्पर्धी टकराव मौजूद नहीं है।

Acknowledgments

इस अध्ययन को चांग बिंग शो च्वान मेमोरियल अस्पताल, चंगुआ, ताइवान के पशु केंद्र से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था। लेखक इस शोध परियोजना में उनके अमूल्य समर्थन और सहायता के लिए शो च्वान मेमोरियल अस्पताल आईआरसीएडी ताइवान को धन्यवाद देना चाहते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Forceps World Precision Instruments 14098
Fu’s subcutaneous needling Nanjing Paifu Medical Science and Technology Co.  FSN needles are designed for single use. The FSN needle is made up of three parts: a solid steel needle core (bottom), a soft casing pipe (middle), and a protecting sheath (top).
Medelec Synergy electromyography Oxford Instrument Medical Ltd. 034W003  Electromyogram (EMG) are used to help in the diagnosis and management of disorders such as neuropathies. Contains a portable two-channel electromyography/nerve conduction velocity system.
Normal saline (0.9%) 20 mL Taiwan Biotech Co.,Ltd. 4711916010323 Lot: 1TKB2022
POLYSORB 4-0 VIOLET 30" CV-25 UNITED STATES SURGICAL, A DIVISION OF TYCO HEALTHC GL-181
Retractor COOPERSURGICAL, INC.(USA) 3311-8G
Rompun Elanco Animal Health Korea Co. Ltd. 27668
SCISSORS CVD 90MM BBRUAN XG-LBB-BC101R
Transcutaneous Electrical Nerve Stimulation Well-Life Healthcare Co. Model Number 2205A Digital unit which offers TENS. Supplied complete with patient leads, self-adhesive electrodes, 3 AAA batteries and instructions in a soft carry bag. Interval ON time 1–30 s. Interval OFF time 1–30 s.
Zoletil  VIRRBAC 8V8HA

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References

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Chiu, P. E., Fu, Z., Lai, D. W., Chou, L. W. Efficacy of Fu's Subcutaneous Needling on Sciatic Nerve Pain: Behavioral and Electrophysiological Changes in a Chronic Constriction Injury Rat Model. J. Vis. Exp. (196), e65406, doi:10.3791/65406 (2023).

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