Summary
يحدد هذا البروتوكول نموذج الإجهاد المعتدل المزمن غير المتوقع (CUMS) للاكتئاب بناء على النظرية الطبية المنغولية ، إلى جانب طرق التحقق من صحة الاختبارات السلوكية.
Abstract
الاكتئاب هو اضطراب عاطفي سائد ويشكل سببا رئيسيا للإعاقة العالمية. تساهم قيود التدخلات الدوائية الحالية في العبء الصحي الكبير المنسوب إلى هذه الحالة. هناك حاجة ملحة لفهم أعمق للآليات الأساسية للاكتئاب ، مما يجعل النماذج قبل السريرية ذات الإمكانات الانتقالية ذات قيمة عالية. يفترض الطب المنغولي ، وهو مجموعة فرعية من الطب التقليدي ، أن حدوث المرض يرتبط ارتباطا وثيقا بتوازن الرياح والصفراء والبلغم. في هذه الدراسة ، نقدم بروتوكولا لطريقة الإجهاد الخفيف المزمن غير المتوقع (CUMS) في الفئران. في هذا الإطار ، تتعرض الفئران لسلسلة من الضغوطات المتقلبة والخفيفة للحث على نمط ظاهري يشبه الاكتئاب ، يحاكي التسبب في الاكتئاب البشري. تشمل المقايسات السلوكية المستخدمة في هذا البروتوكول اختبار تفضيل السكروز (SPT) ، مما يدل على انعدام التلذذ - وهو أحد الأعراض الأساسية للاكتئاب. اختبار المجال المفتوح (OFT) ، الذي يقيس مستويات القلق ؛ واختبار موريس للمتاهة المائية (MWM) ، الذي يقيم الذاكرة المكانية وقدرات التعلم. توضح طريقة CUMS القدرة على إحداث anhedonia والتسبب في عجز سلوكي طويل الأجل. علاوة على ذلك ، فإن هذا البروتوكول أكثر توافقا مع النظرية الطبية المنغولية من النماذج الحيوانية الأخرى المصممة لاستنباط سلوك يشبه الاكتئاب. يوفر تطوير هذا النموذج الحيواني والبحوث اللاحقة أساسا قويا للدراسات المبتكرة المستقبلية في مجال الطب المنغولي.
Introduction
الاضطراب الاكتئابي الشديد (MDD) هو مرض عقلي منتشر ، ويحتل المرتبة الثالثة كسبب رئيسي للإعاقة على مستوى العالم ويؤثر على أكثر من 300 مليون شخص1,2,3. والجدير بالذكر أن التقديرات تشير إلى أن ما لا يقل عن نصف الأفراد المصابين لا يتلقون العلاج المناسب.4. بالنظر إلى هذه الفجوة ، تعمل النماذج الحيوانية كأداة حاسمة للتحقيق في مسببات الاكتئاب. حتى الآن ، يوجد أكثر من 20 نموذجا حيوانيا مختلفا للاكتئاب5. من بين هؤلاء ، نموذج الإجهاد المعتدل المزمن الذي لا يمكن التنبؤ به (CUMS) ، الذي صقله بول وينر في عام 1987 ، هو الأكثر استخداما6. يعمل نموذج CUMS على فرضية أن تعريض القوارض لمجموعة متنوعة من الضغوطات الاجتماعية والبيئية يؤدي إلى أعراض مشابهة للقلق والتوتر والاكتئاب. تتضمن المنهجية تعريض لضغوط خفيفة مختلفة على مدى عدة أسابيع ، وبلغت ذروتها في مجموعة من التغييرات السلوكية ، بما في ذلك انعدام التلذذ والسلوكيات الشبيهة بالاكتئاب.7,8. ويرافق هذه التغييرات تحولات في ملامح الغدد الصماء والناقلات العصبية ، مثل انخفاض في 5-HT9,10. تعكس هذه النتائج عن كثب تلك التي لوحظت في البشر الذين تم تشخيصهم ب MDD ، وبالتالي التحقق من صحة فائدة النموذج. يتم تقييم نموذج CUMS بشكل خاص لفعاليته في تقييم مضادات الاكتئاب ، مما يدل على مستويات عالية من الصلاحية السطحية والهيكلية والتنبؤية11,12. على عكس النماذج الأخرى ، فإن CUMS حساس لآثار الإدارة المزمنة لمضادات الاكتئاب أحادية الأمين. على سبيل المثال ، ثبت أن مثبطات امتصاص السيروتونين الانتقائية (SSRIs) مثل سيتالوبرام وباروكستين وفلوكستين تمنع وتعكس anhedonia في ظل ظروف الإجهاد المزمن12,13. بالإضافة إلى ذلك ، أثبتت مضادات الاكتئاب الجديدة سريعة المفعول ، مثل الكيتامين ، فعاليتها في هذا النموذج.14,15. في المقابل ، فإن الاختبارات الأخرى مثل اختبار السباحة القسرية (FST) واختبار تعليق الذيل (TST) أقل موثوقية لنمذجة التغيرات السلوكية طويلة المدى ، وغالبا ما تعكس التكيف مع الإجهاد الحاد بدلا من تحمل أعراض الاكتئاب.16. تؤكد هذه الخصائص على الصلاحية القوية لنموذج CUMS في أبحاث الاكتئاب. واحدة من أبرز ميزات نموذج CUMS ، المعترف بها لموثوقيتها العالية في الدراسات الكلاسيكية ، هي anhedonia - عدم القدرة على تجربة المتعة أو الاهتمام بالأنشطة اليومية17,18. يتم تقييم هذه الظاهرة بشكل شائع باستخدام اختبارات تفضيل السكروز ، وقد ثبت أن العديد من مضادات الاكتئاب تعكس انخفاض استهلاك السكروز. كما يتم استخدام العديد من المقاييس الأخرى بشكل شائع في أدبيات CUMS ، بما في ذلك اختبار المجال المفتوح (OFT) ، الذي يقيم السلوك الحركي الإرادي ، والميول الاستكشافية ، والتوتر ، وبالتالي قياس شدة الاكتئاب19. اختبارات أخرى مثل المتاهة المرتفعة زائد (EPM) تقييم السلوكيات الشبيهة بالقلق ، اختبار متاهة موريس المائية (MWM) يفحص الأداء المعرفي20، ويقيم FST القابلية للمشاعر السلبية واليأس السلوكي20. علاوة على ذلك ، فإن غالبية الضغوطات التي تؤثر على البشر ذات طبيعة اجتماعية. الأفراد الذين لديهم علاقات اجتماعية دون المستوى الأمثل ، والتي تتميز بأنشطة اجتماعية وشبكات ودعم محدودة ، معرضون لخطر متزايد للإصابة بأمراض مختلفة21,22. هذا مهم أيضا في حالة القوارض ، الذين هم اجتماعية تعيش في مجموعات. على سبيل المثال ، تظهر الفئران التي يتم إيواؤها في عزلة خصائص ما يسمى بمتلازمة العزلة ، والتي تحفز الإجهاد الاجتماعي وتسرع ظهور الاكتئاب.23.
يفترض الطب المنغولي ، وهو فرع مهم من الطب الصيني ، أن ظهور المرض هو تفاعل معقد بين العوامل الجوهرية والخارجية. تشمل هذه العوامل الخارجية ، التي يشار إليها باسم الحالات المساعدة الأربعة ، تغير المناخ ، والنظام الغذائي ، ونمط الحياة ، والأحداث المفاجئة مثل العدوى والحوادث المذهلة والاضطرابات النفسية. يتم تصور عملية المرض على أنها تفاعل مستمر بين ثلاثة عناصر - يشار إليها باسم الأنواع الثلاثة من homors - والمكونات الجسدية السبعة بالتنسيق مع الحالات المساعدة الأربعة24. يرى الطب المنغولي أن جسم الإنسان يعمل ككيان متكامل ، يتم الحفاظ عليه من خلال توازن نسبي بين الهومورز الثلاثة. يعتبر الاضطراب في هذا التوازن مقدمة للمرض24. نظرا للدور المحوري للتجارب على في سد الفجوة بين الطب التقليدي والحديث ، فمن الأهمية بمكان تطوير نماذج حيوانية ذات صلة بالبحث في مجال الطب المنغولي. وفقا لذلك ، استخدمنا منهجية عزل لمدة 28 يوما إلى جانب CUMS لمحاكاة هذه الضغوطات الفسيولوجية والنفسية. اخترنا تسعة ضغوط محددة لا يمكن التنبؤ بها وسعينا إلى دعم طريقة النمذجة هذه من خلال نظرية هومورز الثلاثة للطب المنغولي. يعد إنشاء نموذج حيواني قوي أمرا أساسيا للنهوض بالبحوث الأساسية في الطب المنغولي وسيساهم بشكل كبير في دراساته التأسيسية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
حصلت البروتوكولات التجريبية على موافقة من لجنة أخلاقيات رعاية التجارب على بجامعة منغوليا الطبية الداخلية (YKD202301172) والتزمت بإرشادات المعاهد الوطنية للصحة لرعاية وأخلاقياته. رقم الترخيص لمركز لدينا هو NO.110324230102364187. تم الحصول على أربعة وعشرين من ذكور فأر Sprague-Dawley (SD) ، كل منها يبلغ من العمر 8 أسابيع (200 جم ± 20 جم) ، وإيواؤها في بيئة خاضعة للرقابة بدرجة حرارة 22 درجة مئوية ± 2 درجة مئوية ورطوبة 55٪ ± 15٪. إطعام الفئران مع اتباع نظام غذائي صيانة القوارض والمياه النقية مع الكيزان الذرة للفراش. تعرضت الفئران لدورة ضوء / مظلمة لمدة 12 ساعة / 12 ساعة لمدة أسبوع واحد قبل التجربة.
1. إنشاء نموذج الفئران CUMS
- تجميع
- قسم الفئران ال 24 عشوائيا إلى مجموعتين: مجموعة التحكم (CON) ، والتي لن تتعرض للعزل أو الإجهاد ، ومجموعة النموذج (MOD). تحتوي كل مجموعة على 12 فأرا.
- ضع الفئران في أقفاص قياسية بقياس 55 سم × 40 سم × 20 سم ، مع 6 فئران لكل قفص. احتفظ بتخصيص القفص طوال فترة التأقلم ما لم يذكر خلاف ذلك.
- املأ كل قفص تربية بفراش جديد واستبدله مرتين في الأسبوع.
- إجراء فترة التأقلم 1 أسبوع. السماح للفئران بالوصول غير المقيد إلى الطعام والماء ، إلا أثناء تطبيق CUMS الضغط. الحفاظ على بيئة ثابتة مع درجة حرارة 22 درجة مئوية ± 2 درجة مئوية ، ورطوبة 55٪ ± 15٪ ، ودورة ضوء / مظلمة لمدة 12 ساعة / 12 ساعة من الساعة 08:00 إلى الساعة 20:00 ، ما لم ينص على خلاف ذلك.
- قبل بدء التجربة ، تعامل مع الفئران يوميا لتأقلمها مع الباحث وتقليل الضغط الإضافي أثناء المرحلة التجريبية.
- العزلة مع الإجهاد الخفيف المزمن غير المتوقع
- ضع مجموعات MOD و CON في نفس الوقت في غرف منفصلة. إيواء فئران مجموعة MOD بشكل فردي ، مع الحفاظ على فئران مجموعة CON معا. الحفاظ على جميع الشروط الأخرى ثابتة.
- تنفيذ نظام الإجهاد لمدة 28 يوما25. لمنع التعود ولضمان عدم القدرة على التنبؤ بالإجهاد ، قم بإدارة ضغوط عشوائية واحدة يوميا ، وتجنب استخدام نفس الضغوطات في أيام متتالية.
- قم بتطبيق أحد الضغوطات التسعة التالية بشكل عشوائي26,27 في أيام مختلفة: الحرمان من الماء لمدة 24 ساعة ، والحرمان من الطعام لمدة 24 ساعة ، والحشو الرطب ، وميل القفص ، وانعكاس دورة الضوء / الظلام ، والتعرض للبرد عند 4 درجات مئوية ، والتعرض للحرارة عند 45 درجة مئوية ، أو 1 دقيقة لقط الذيل ، أو 15 دقيقة من الاهتزاز عند 160 دورة في الدقيقة. ويرد التصميم المحدد في الجدول 1.
- أثناء تطبيق الضغوطات ، قم بتقييد الوصول إلى الطعام والماء لمجموعة MOD حتى ينتهي الضغط ، باستثناء أثناء انعكاس دورة الضوء / الظلام. لم يكن مطلوبا من مجموعة CON تقييد الماء والنظام الغذائي.
- طرق الإجهاد
- ابدأ التجربة من خلال تطبيق محفزات الاكتئاب بالتزامن مع العزل لمدة 28 يوما على جميع الفئران ، باستثناء المجموعة الضابطة. منزل هذه الفئران في أقفاص فردية. راجع الجدول 2 لمعرفة الحالات المتعلقة بمحفزات الاكتئاب.
- لتنفيذ طريقة مشبك الذيل ، قم بتأمين ذيل الفئران من مجموعة MOD عن طريق تثبيت الذيل بمشبك ورق قياسي على مسافة 1-2 سم من جذر ذيل الفئران. قم بقياس وقت التثبيت لمدة 1 دقيقة (ن = 12).
- في طريقة الحرمان من الماء ، احجب الماء عن فأر مجموعة MOD عن طريق إزالة زجاجة الماء الخاصة به وسجلها لمدة 24 ساعة.
ملاحظة: تم تسجيل وقت بدء الحرمان من المياه بحيث يمكن حساب وقت الانتهاء بدقة؛ لوحظ سلوك الفئران خلال هذه الفترة ، بما في ذلك النشاط والشهية والحالة العقلية. - في طريقة الحرمان من الطعام ، حجب الطعام عن فأر مجموعة MOD وسجل لمدة 24 ساعة.
ملاحظة: سجل الوقت الذي يبدأ فيه الحرمان من الطعام بحيث يمكن حساب وقت الانتهاء بدقة ؛ التأكد من أن الفئران رطبة بشكل كاف خلال هذه الفترة ؛ ومراقبة سلوك الفئران خلال هذه الفترة ، بما في ذلك النشاط والحالة العقلية ، إلخ. - للتحفيز البارد عند 4 درجات مئوية ، ضع فأرا من مجموعة MOD في دلو من الماء البارد وسجله لمدة 5 دقائق. تأكد من أن درجة حرارة الماء تظل ثابتة طوال الاختبار. في ختام التجربة ، جفف الفئران بمنفاخ وأعده إلى قفصه الأصلي.
ملاحظة: حافظ على درجة حرارة الماء البارد عند 4 درجات مئوية باستخدام مقياس حرارة ومكعبات ثلج لتنظيم درجة حرارة الماء عند ارتفاعه. يجب تغيير الماء بانتظام للتأكد من أن جودة المياه نظيفة ودرجة الحرارة ثابتة. عند السباحة ، يجب غمر جميع أطراف وجذوع الفئران في الماء البارد باستثناء الرأس. يجب أن يكون عمق الماء أكبر من طول جسم الجرذ لمنع الجرذ من القفز من الماء بسبب ملامسته لقاع الدلو. - لإدارة الإجهاد الحراري 45 درجة مئوية ، ضع فأر مجموعة MOD في حاضنة وسجل لمدة 5 دقائق ، مما يضمن بقاء درجة الحرارة مستقرة طوال الاختبار.
- في انعكاس دورة الضوء والظلام ، قم بتغليف القفص بقطعة قماش سوداء لمدة 1 ساعة لمحاكاة ظلام النهار. بعد ذلك ، قم بإضاءة القفص لمدة 12 ساعة أثناء الليل لتقليد ضوء النهار. سجل سلوك الفئران ، وتناول الطعام والماء ، وأنماط النوم لمدة 24 ساعة.
- لتجربة الحشو الرطب ، أدخل 200 مل من الماء في قفص يحتوي على 100 جرام من الحشو. إيواء فأر مجموعة MOD في القفص الرطب وتسجيل سلوك الفئران تحت ضغط الفراش الرطب ، بما في ذلك النشاط والشهية وتناول الماء وما إلى ذلك. لاحظ ما إذا كانت هناك أي سلوكيات غير طبيعية أو ردود فعل غير مريحة ، مثل حالة الجلد والشعر للفئران ، والتي قد تكون ناجمة عن الحشو الرطب ، وسجلها في الوقت المناسب للتحليل اللاحق لمدة 24 ساعة. بعد الاختبار ، جفف الفئران بمنفاخ وأعده إلى قفص به نشارة خشبية جديدة.
- في طريقة انحدار القفص ، ضع فأر مجموعة MOD في قفص مائل بزاوية 45 درجة على الحائط وسجل لمدة 24 ساعة. استخدم هيكل إطار القفص لضبط الزاوية وتثبيت القفص في مكانه.
ملاحظة: حساب الوقت من البداية إلى النهاية ومراقبة سلوك الفئران خلال فترة إمالة القفص بما في ذلك النشاط والشهية والحالة العقلية، والتأكد من ضبط زاوية القفص المائل بشكل صحيح وبقائه ثابتا لضمان دقة التجربة وقابليتها للتكرار. - للاهتزاز عالي السرعة ، ضع فأرا من مجموعة MOD في شاكر ميكانيكي مضبوط على 160 دورة في الدقيقة وسجل الجرذ لمدة 15 دقيقة. يتم استخدام طرق الاختبار السلوكي لاحقا لتقييم الإنشاء الناجح للنموذج.
- بعد تطبيق الضغوطات ، انقل أقفاص مجموعة MOD من غرفة CUMS إلى غرفة السكن. خلال فترة التعرض للإجهاد لمدة 4 أسابيع ، حافظ على مجموعة CON في أقفاصهم المنزلية الموجودة في غرفة السكن.
- الاحتياطات أثناء التجارب
- نقل أقفاص مجموعة MOD مرة أخرى إلى غرفة السكن العامة بعد تطبيق الضغط في غرفة CUMS.
- مراقبة الحيوانات أثناء نمذجة CUMS
- أثناء لقط الذيل ، من المرجح أن يكافح بسبب التحفيز المستحث. طوال هذه الفترة ، راقب المشبك باستمرار. إذا تم إزاحته ، فقم بإيقاف المؤقت مؤقتا ، وأعد تطبيق المشبك ، ثم استأنف المؤقت لمدة 1 دقيقة.
- لا تفرض الحرمان من الماء وضغوط الفراش الرطب في وقت واحد.
ملاحظة: يساعد تجنب الفرض المتزامن للحشو الرطب والحرمان من الماء في الحفاظ على سلامة التجارب ، ويقلل من المتغيرات المربكة ، ويعزز رفاهية. - قد تؤدي درجة حرارة جسم ودرجة حرارة الغرفة المحيطة إلى رفع درجة حرارة الماء أثناء السباحة في الماء البارد. لذلك ، اضبط عن طريق إضافة الماء المثلج أو مكعبات الثلج للحفاظ على درجة حرارة ثابتة للماء.
- مراقبة الفئران على فترات 30 دقيقة أثناء تطبيق الضغوطات ، إلا أثناء انعكاس النهار. انتبه بشكل خاص لعلامات الضيق غير العادي ، مثل الارتعاش أو الخمول أو قلة الحركة. إذا لوحظت مثل هذه الأعراض - خاصة انخفاض حرارة الجسم المحتمل أثناء السباحة في الماء البارد 4 درجات مئوية والفراش الرطب - قم بإزالة الجرذ على الفور من الضغط.
ملاحظة: قم بإزالة التجارب من الدراسة عندما يكون لديها مشاكل صحية ، مثل العدوى ، والصدمات الشديدة ، والسلوكيات العدوانية ، والحركة غير الطبيعية ، وما إلى ذلك ، وعادة ما تدور شروط إزالة من الدراسة حول حماية صحتهم وسلامتهم مع ضمان سلامة النتائج التجريبية. - إجراء عمليات تفتيش يومية للجروح أو غيرها من التشوهات الجسدية أو السلوكية في كل فئران. إذا لوحظت أي تشوهات ، استشر الطبيب البيطري المختبري لتحديد ما إذا كان ينبغي استبعاد الفئران من التجربة.
- تزن كل فأر كل 3 أيام. إذا فقد أكثر من 20٪ من وزن جسمه القاعدي قبل التغذية ، فيجب استبعاده من التجربة.
2. الاختبارات السلوكية
- للبدء ، قم بإعطاء محفزات الاكتئاب بالتزامن مع العزل لمدة 28 يوما لجميع الفئران ، باستثناء المجموعة الضابطة. منزل الفئران في أقفاص فردية. راجع الجدول 2 للحصول على تفاصيل حول حالات محفزات الاكتئاب.
- لاختبار المجال المفتوح ، قسم الصندوق الأسود إلى 25 قسما مربعا بمساحة متساوية. قم بتثبيت نظام تحليل تتبع الفيديو في المربع. ضع الجرذ في الساحة المركزية وراقب أنشطته الأفقية والرأسية لمدة 5 دقائق.
ملاحظة: أبعاد الصندوق 500 مم × 500 مم × 300 مم. سيتم جمع بيانات النشاط باستخدام نظام تتبع الفيديو لتقييم السلوكيات المرتبطة بالقلق في القوارض عند تعرضها لبيئة جديدة. - بعد ذلك ، قم بإحصاء عدد المربعات التي اجتازها الجرذ ، باستخدام جميع الكفوف ، لتحديد النشاط الأفقي. عد حالات الوقوف والاستمالة كمؤشرات للنشاط الرأسي. بعد كل اختبار ، قم بتعقيم الصندوق باستخدام 75٪ كحول للتخلص من أي روائح متبقية للفئران للاختبارات اللاحقة.
- بعد ذلك ، يتم تقييم anhedonia من خلال اختبار تفضيل السكروز. ضع زجاجتين على غطاء القفص: تحتوي الزجاجة A على ماء نقي ، بينما تحتوي الزجاجة B على محلول سكروز بنسبة 1٪. السماح بالوصول إلى كلا الحلين للفئران. قم بوزن الزجاجات قبل الاستهلاك وبعده لحساب معدلات تفضيل السكروز لمدة 60 دقيقة في الأيام 0 و 7 و 14 و 21 و 28. الصيغة هي كما يلي:
استهلاك السكروز =
× 100٪ - لقياس الذاكرة المكانية وقدرات التعلم ، استخدم اختبار متاهة موريس المائية. قسم المجموعة إلى أربعة أرباع ، مرقمة من واحد إلى أربعة. ضع منصة استراحة مغمورة 1 سم تحت سطح الماء في الربع الثالث.
- أدخل الحليب إلى المسبح لزيادة عتامة الماء والحفاظ على درجة حرارة الماء حوالي 23 درجة مئوية طوال الإجراء التجريبي.
- ضع كل فأر في أرباع مختلفة من المتاهة ، مما يسمح لهم ب 120 ثانية لتحديد موقع المنصة المخفية. يجب أن تعتمد الفئران على الذاكرة المكانية ومهارات التعلم لتذكر موقع المنصة. بمجرد أن يتعلموا موقع المنصة ، يمكنهم السباحة إليها مباشرة. سجل وقت الكمون باستخدام نظام تتبع فيديو متاهة المياه موريس.
- ضع الفئران في مكان ثابت في حمام السباحة. إذا فشل الموضوع في تحديد موقع النظام الأساسي المخفي في غضون 120 ثانية ، فقم بتسجيل زمن الوصول على أنه 120 ثانية.
- أخيرا ، قم بإزالة المنصة المخفية ، ووضع الجرذ مرة أخرى في الماء ، وسجل عدد معابر المنطقة خلال فترة 120 ثانية.
× 100٪3. التحليل الإحصائي
- لتقييم الاختلافات الكبيرة في المعلمات البيوكيميائية ، استخدم تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعا باختبار دنكان اللاحق. قدم البيانات كمتوسط ± الخطأ المعياري (SE) واعتبر قيمة p أقل من 0.05 ذات دلالة إحصائية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
نتائج الاختبارات السلوكية في نموذج اكتئاب الفئران الناجم عن CUMS
لتأكيد فعالية إجراء CUMS للحث على سلوكيات شبيهة بالاكتئاب ، تم إجراء فحص للتلاعب. تم تخصيص ذكور الفئران Sprague-Dawley (SD) بشكل عشوائي إما لمجموعة MOD أو CON لمدة 4 أسابيع ، كما هو موضح في الخطوة 1.2.3. بعد ذلك ، تم التضحية بالفئران ، وتم تشريح الحصين بالكامل لتقييم 5-HT ، وهو ناقل عصبي مرتبط بقوة بالفيزيولوجيا المرضية للاكتئاب10 ، باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)28.
قبل تحريض CUMS ، لم تلاحظ فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات المختبرة في درجة OFT أو تفضيل السكروز أو تحليل MWM.
بعد إنشاء نموذج CUMS ، كشف تحليل أحادي الاتجاه للتباين (ANOVA) عن تأثير كبير ل CUMS على سلوكيات قلق الفئران. على وجه التحديد ، في OFT ، لوحظت اختلافات كبيرة بين المجموعات. أظهرت مجموعة MOD درجات رأسية وأفقية أقل مقارنة بمجموعة CON (** P < 0.01; الشكل 1A ، B ، E) ، مما يشير إلى أن إجراء CUMS كان فعالا في إحداث القلق.
بعد ذلك ، تم إجراء اختبار تفضيل السكروز (SPT) على مدار 5 أيام ، كما هو موضح في الخطوة 2.4 ، لتقييم ما إذا كانت الفئران أظهرت علامات التعرض لانعدام التلذذ بعد التعرض ل CUMS. أشارت النتائج إلى عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في نسبة تفضيل السكروز بين المجموعات في اليوم 0. ومع ذلك ، كشفت ANOVA أحادية الاتجاه عن اختلاف كبير في تناول السكروز بين المجموعات في اليوم 28. على وجه التحديد ، كانت نسبة تفضيل السكروز في مجموعة MOD أقل من تلك الموجودة في مجموعة CON (** P < 0.01; الشكل 1C) ، مما يؤكد فعالية بروتوكول CUMS في إحداث انعدام التلذذ.
كشفت ANOVA أحادية الاتجاه أن CUMS أثرت بشكل كبير على الذاكرة المكانية وقدرات التعلم للفئران ، كما تم تقييمها بواسطة اختبار MWM. كان زمن انتقال مجموعة MOD لتحديد موقع النظام الأساسي أطول بشكل ملحوظ من زمن انتقال مجموعة CON (** P < 0.01). من حيث أوقات العبور ، عبرت مجموعة MOD مرات أقل من مجموعة CON (** P < 0.01; الشكل 1D ، F). تدعم هذه النتائج فعالية بروتوكول CUMS في إحداث ضعف الذاكرة في الفئران.
نتائج مستويات الحصين 5-HT في نموذج اكتئاب الفئران الناجم عن CUMS
أشار ANOVA أحادي الاتجاه على مستويات الحصين 5-HT إلى اختلاف كبير بين المجموعات (** P < 0.01). أظهرت مجموعة MOD انخفاض مستويات الحصين 5-HT بالمقارنة مع مجموعة CON (الشكل 2). تشير هذه النتائج إلى أن بروتوكول CUMS قلل بشكل فعال من مستويات الحصين 5-HT ، وهي ظاهرة شائعة في الاكتئاب البشري29.
الشكل 1: آثار نموذج اكتئاب الفئران الناجم عن CUMS. (أ) الدرجات الرأسية لاختبار المجال المفتوح (OFT). (ب) الدرجات الأفقية لاختبار المجال المفتوح. (ج) مستويات استهلاك السكروز (٪) في اليومين 0 و28. انعدام التلذذ الناجم عن CUMS وتقليل تفضيل السكروز في الفئران. (د) وقت الكمون وأرقام عبور المنطقة في اختبار MWM. يتم عرض النتائج كمتوسط ± SE (n = 12 فأرا لكل مجموعة). ** يشير P < 0.01 إلى تغييرات كبيرة في مجموعة النموذج (MOD) مقارنة بمجموعة التحكم (CON) المحسوبة باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA). ه: مسارات OFT للفئران في كل مجموعة. (F) مسارات MWM لكل مجموعة من الفئران. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: التأثير على مستويات 5-HT في الدماغ في نموذج الاكتئاب الناجم عن CUMS في الفئران. أظهرت الفئران التي خضعت ل 4 أسابيع من CUMS انخفاضا كبيرا في مستويات الحصين 5-HT مقارنة بمجموعة التحكم (CON). يتم عرض النتائج كمتوسط ± SE (n = 12 فأرا لكل مجموعة). ** يشير P < 0.01 إلى تغييرات كبيرة في مجموعة النموذج (MOD) مقارنة بمجموعة CON المحسوبة باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| الضغوطات | أيام |
| مشبك الذيل 1 دقيقة | 1, 7, 20 |
| الحرمان من الماء 24 ساعة | 3, 18, 28 |
| الحرمان من الطعام 24 ساعة | 2, 16, 25 |
| السباحة في ماء بارد 4 درجات مئوية 5 دقائق | 4, 11, 19, 23 |
| 45 درجة مئوية الإجهاد الحراري 5 دقيقة | 5, 14, 17, 27 |
| انعكاس دورة الظلام الخفيفة | 6, 12, 22 |
| حشوة رطبة | 9, 15, 26 |
| انحدار القفص 24 ساعة | 10, 21 |
| اهتزاز عالي السرعة 15 دقيقة | 8, 13, 24 |
الجدول 1: جدول الإجهاد الخفيف المزمن غير المتوقع (CUMS). الضغوطات ومواعيد التنفيذ لتحريض CUMS في مواضيع الفئران.
| الضغوطات | أربعة شروط مساعدة | ثلاثة هومورز يتغيرون |
| مشبك الذيل 1 دقيقة | عوامل مفاجئة | الرياح↑ الصفراء↑ |
| الحرمان من الماء 24 ساعة | النظام الغذائي | ريح↑ |
| الحرمان من الطعام 24 ساعة | النظام الغذائي | ريح↑ |
| السباحة في 4 درجات مئوية ماء بارد 5 دقائق | عيش | بلغم↑ |
| 45 درجة مئوية الإجهاد الحراري 5 دقائق | المعيشة, تغير المناخ | الصفراء↑ |
| انعكاس دورة الظلام الخفيفة | عيش | ريح↑ |
| حشوة رطبة | عيش | بلغم↑ |
| انحدار القفص 24 ساعة | عيش | ريح↑ |
| اهتزاز عالي السرعة 15 دقيقة | عوامل مفاجئة | ريح↑ |
الجدول 2. تسعة ضغوط مع الشروط المساعدة الأربعة ونظرية ثلاثة هومورز في الطب المنغولي. العلاقة الجوهرية بين الضغوطات التسعة ، ونظرية الهومومور الثلاثة ، وأربعة حالات مساعدة في الطب المنغولي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الاكتئاب هو اضطراب عقلي يتميز بأعراض مثل انخفاض الحالة المزاجية وقلة المتعة وانخفاض الطاقة30. في مجال أبحاث الاكتئاب ، يعد إنشاء نموذج حيواني موثوق به أمرا بالغ الأهمية لتعزيز التدخلات العلاجية. من بين النماذج الحيوانية المختلفة ، يعد نموذج CUMS جديرا بالملاحظة بشكل خاص لموثوقيته العالية وصلاحيته وتطابقه مع خصائص الاكتئاب البشري31. إنه مناسب تماما لمحاكاة الآثار التراكمية للضغوط منخفضة المستوى على مدى فترة طويلة عبر بيئات مختلفة. في هذه الدراسة ، أنشأنا نموذج الاكتئاب الناجم عن CUMS في الفئران ، باستخدام مجموعة من الضغوطات الموضحة في الخطوة 1.2.3 والجدول 2. العديد من جوانب بروتوكول الإجهاد حاسمة لنجاح النموذج. أولا ، يجب إيواء الفئران في جميع مجموعات MOD بشكل فردي ، على عكس تلك الموجودة في مجموعة CON. ثانيا ، يجب التخطيط لنظام الإجهاد CUMS بعناية للحفاظ على عدم القدرة على التنبؤ. على وجه التحديد ، يجب أن تخضع الفئران لاختيار عشوائي لسبعة من أصل تسعة ضغوط محتملة على أساس أسبوعي. يعد تباين هذه الضغوطات وعدم القدرة على التنبؤ بها أمرا ضروريا لفعالية النموذج32,33. أخيرا ، يجب تقليل الاستخدام المتكرر لنفس الضغوطات لمنع الفئران من التكيف ، مما قد يضر بسلامة النتائج التجريبية. علاوة على ذلك ، تم تصميم إعدادات الإجهاد لتكون قابلة للتعديل طوال فترة الدراسة.
يوفر نموذج CUMS العديد من المزايا كنموذج للاكتئاب. يتماشى بشكل وثيق مع التسبب في الاكتئاب البشري ويمثل بدقة معظم الأعراض السريرية والآليات الأساسية34. واحدة من نقاط قوتها الرئيسية هي أنها تستخدم anhedonia ، أو عدم وجود متعة ، كمؤشر قابل للقياس الكمي 6,7. يمثل النموذج أيضا العوامل المختلفة التي تساهم في ظهور الاكتئاب35,36. الأهم من ذلك ، تم تصميم نموذج CUMS للتطبيق على المدى الطويل ، ويمتد لعدة أشهر. تتوافق هذه المدة مع احتياجات نموذج الاكتئاب وتسمح بتقييم الأدوية في نظام الجرعات المزمن ، وكذلك تحديد المركبات ذات آليات العمل السريعة36. نظرا لطبيعته الشاملة ، أصبح نموذج CUMS مقبولا على نطاق واسع في الأدبيات العلمية.
على الرغم من هذه المزايا ، فإن نموذج CUMS لا يخلو من القيود 5,37. أحد العيوب الرئيسية هو طبيعتها كثيفة الاستخدام للموارد ، مما يتطلب استثمارات كبيرة في البيئة والقوى العاملة والوقت ، مما يؤدي بالتالي إلى انخفاض قابلية التكاثر38. هناك أيضا تناقضات في الأدبيات المتعلقة باختيار وشدة الضغوطات ، وكذلك التسلسل الذي يتم تطبيقهفيه 38. مثل هذه التناقضات تجعل من الصعب تكرار النموذج عبر مختبرات مختلفة. علاوة على ذلك ، تفتقر الأدبيات إلى جدول زمني مفصل لتطبيق الضغوطات ، مما يضيف طبقة أخرى من الغموض39,40. تنشأ مشكلة أخرى من الاختلاف في أساليب الجمع المستخدمة عبر الدراسات المختلفة. وغالبا ما تفتقر هذه إلى الأساس المنطقي الصريح، مما يخلق صعوبات في تكرار النموذج. الخاضعة حساسة للغاية للتغيرات الطفيفة في تصميم الإجهاد ، مما يساهم أيضا في انخفاض قابلية التكاثر40. علاوة على ذلك ، يمكن أن يؤدي استخدام عدد محدود من الضغوطات إلى التعود بين الخاضعة ، مما يجعل تصميم الإجهاد متوقعا. أخيرا ، تظهر من مختبرات مختلفة استجابات متنوعة للضغوط ، مما يساهم في ضعف قابلية التكاثر عبر الدراسات. في الأدبيات الحالية ، تم تحديد فئران Wistar Kyoto (WKY) على أنها معرضة بشكل خاص للنمط الظاهري الشبيه بالاكتئاب بعد التعرض ل CUMS25,41. هذا يشير إلى أن التباين بين الإجهاد يمكن أن يؤثر بشكل كبير على التعرض للتغيرات السلوكية الناجمة عن الإجهاد. وبالمثل ، فإن SPT ، وهو مقياس رئيسي يستخدم غالبا لتقييم فعالية نماذج الاكتئاب ، يقدم مجموعة من التحديات الخاصة به. على وجه التحديد ، تظهر الفئران الفردية تباينا في استهلاكها لمحلول السكروز 1٪20,42. في ظل ظروف الإجهاد ، تظهر كل من المعرضة للإجهاد والمقاومة للإجهاد تغيرات في استهلاكها للحلول الحلوة. وبالتالي ، يصبح من الصعب التأكد من نسبة داخل دفعة معينة التي تكون مقاومة حقا للإجهاد أو تنتمي إلى الفئة المقابلة. قد يؤدي هذا التباين إلى عرض بعض لنتائج SPT التي لا تعكس بدقة حالة مرضها.
لتعزيز موثوقية نموذج CUMS ، نقترح العديد من التحسينات المنهجية. أولا ، من الأهمية بمكان فصل في مجموعة CON عن تلك الموجودة في مجموعة MOD للتخفيف من تأثير المحفزات الشمية والبصرية والسمعية ، والتي يمكن أن تحفز الإجهاد في43,44. ثانيا ، لتقليل التباين ، ينصح بتعيين واحد أو اثنين من موظفي المختبرات ذوي الخبرة لإجراء جميع التجارب. يعمل هذا النهج على تقليل الأخطاء التي تعزى إلى عوامل فردية. بالإضافة إلى ذلك ، حددت الأبحاث السابقة الاختبار المقاومة للإجهاد13 ؛ ومن ثم، سيكون من الحكمة فحص هذه المجموعات إما قبل التجريب الرسمي أو بعد ذلك لتفسير النتائج بشكل أفضل. فيما يتعلق باختبار SPT ، وهو تقييم سلوكي قائم على المكافأة يقيس انعدام التلذذ الجوهري ، من الضروري تحديد تركيز السكروز الأمثل قبل بدء بروتوكول CUMS. يمكن أن يؤدي تحديد التفضيل بشكل مبدئي على أساس تركيز السكروز إلى تعزيز الحساسية التمييزية للاختبار بشكل ملحوظ20. ومع ذلك ، تجدر الإشارة إلى أن الفئران التي تتعرض للحرمان من الطعام والماء لمدة 24 ساعة قد تستهلك بشكل عشوائي أي سائل متاح بسبب العطش الشديد35,45. للحصول على مقياس أكثر دقة لتفضيل السكروز ، نوصي بتقييم الاستهلاك خلال المرحلة الليلية من الدورة البيولوجية ، عندما تكون القوارض أكثر نشاطا. يمكن أن تؤدي الضغوطات المطبقة خلال المرحلة النهارية (غير النشطة) إلى الحرمان المزمن من النوم ، وبالتالي إدخال ضغوط غير مقصودة46,47. أخيرا ، من الضروري التحكم بدقة في تأثير العوامل التي يمكن التحكم فيها الموضحة أعلاه لضمان موثوقية البيانات التي تم جمعها قدر الإمكان.
غالبا ما تأتي أنظمة العلاج السريري الغربية الحالية للاكتئاب مع آثار جانبية سامة واضحة واحتمال كبير للانتكاس عند التوقف عن الدواء. إن التحقيق في مناهج العلاج المتجذرة في الطب التقليدي والخوض في التسبب في الاكتئاب من خلال عدسة نظرية الطب المنغولي يمكن أن يقدم رؤى مبتكرة حول مسببات المرض. في هذا السياق ، فإن تطوير نماذج حيوانية للاكتئاب تتماشى مع مبادئ الطب التقليدي يقف كخطوة محورية في أبحاث الطب المنغولي. اختيار الضغوطات التسعة في طريقة نمذجة CUMS للثقافة الانفرادية جدير بالملاحظة بشكل خاص. وهو مستوحى من نظرية الطب المنغولي عن الهومورات الثلاثة والعلاقة المتأصلة بين الحالات المساعدة الأربعة والهومورات الثلاثة. يظهر هذا النهج درجة عالية من التوافق مع المبادئ الفريدة للطب المنغولي. تكشف تحليلات النمط الظاهري للاكتئاب ، بالاقتران مع العوامل الخارجية ، عن ارتباطات كبيرة مع المفاهيم الطبية المنغولية للرياح والبلغم (انظر الجدول 2). على وجه التحديد ، تظهر الاختلالات المرتبطة بالرياح سريريا كأعراض مثل فقدان الطاقة والأرق والنسيان والتعب والألم. من ناحية أخرى ، تؤدي الاختلالات المتعلقة بالبلغم إلى مظاهر سريرية مثل عدم الاستجابة وعدم وضوح الوعي والتشاؤم والسلبية. تتوافق هذه الأعراض بشكل وثيق مع الأعراض الأساسية ل MDD48,49. لذلك ، فإن نموذج CUMS المذكور أعلاه بمثابة نموذج مرضي يحاكي بشكل فعال التفاعلات المعقدة بين الظروف الخارجية وتوازن الأنواع الثلاثة من homors ، كما تفترض نظرية الطب المنغولي ، وبالتالي المساهمة في ظهور المرض.
نقاط القوة في هذا النموذج متعددة الأوجه. أولا ، تلتزم بالنظريات المسببة الطبية المعاصرة ، وتفي بالمعايير المحددة للنماذج الحيوانية في مجال الطب الحديث. ثانيا ، يتضمن مبادئ من الطب المنغولي التقليدي لتكرار أعراض محددة للأمراض البشرية في ، وبالتالي تجسيد الخصائص الفريدة للممارسات الطبية المنغولية. نظرا لمواءمته مع كل من النظريات الطبية الحديثة والتقليدية ، فإن هذا النموذج بمثابة منصة فعالة للبحث التأسيسي في الطب المنغولي. لذلك ، فإن دمج الأمراض والأعراض في هذا النموذج الحيواني يمثل التقاء البحث في الطب المنغولي والحديث. في حين أن النموذج له حدوده ، فإن تحسينه المستمر سيساهم بشكل كبير في مستقبل البحوث الأساسية في الطب المنغولي.
أصبحت النماذج الحيوانية لا غنى عنها في استكشاف الاكتئاب بسبب التحديات الأخلاقية والعملية المرتبطة بالدراسة المباشرة للدماغ البشري. على الرغم من القيود المتأصلة في تكرار تعقيدات الاكتئاب بشكل كامل ، فإن تطور هذه النماذج والتحقق من صحتها لا يزالان عملية مستمرة. في هذه الدراسة ، قمنا بدمج مبادئ من كل من الطب المنغولي والحديث لتطوير نموذج حيواني للاكتئاب. يقدم هذا النهج التعاوني رؤى قيمة لبناء نموذج حيواني أكثر شمولا يشمل كلا من النظريات الطبية المنغولية التقليدية والحديثة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
Acknowledgments
نحن ممتنون للأجهزة والمختبرات المقدمة من قبل نعرب عن امتناننا لكلية الطب المنغولية في الجامعة الطبية المنغولية الداخلية ، الصين.تم دعم هذه الدراسة من قبل ، لتوفير الأجهزة اللازمة ومرافق المختبرات. وتلقت هذه الدراسة دعما ماليا من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنحة رقم 81760762) ومشروع جامعة منغوليا الطبية الداخلية في الصين (المنحة رقم. YKD2022MS074)، ومشروع البحث العلمي للتعليم العالي في منغوليا الداخلية، الصين (المنحة رقم. NJZY22661) ومشروع الصندوق المفتوح للمختبر الرئيسي للطب الصيني والمنغولي في منطقة منغوليا الداخلية المتمتعة بالحكم الذاتي ، الصين (المنحة رقم. MYX2023-K07).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.5 mL centrifuge tube | service Biotechnology Co., Ltd | EP-150-M | |
| 1000 µL Pipette | service Biotechnology Co., Ltd | IC021198160223 | |
| 10 µL pipette tip | service Biotechnology Co., Ltd | IC012395160823 | |
| 10 µL pipette tip | service Biotechnology Co., Ltd | TP-10 | |
| 1250 µL pipette tip | service Biotechnology Co., Ltd | TP-1250 | |
| 2 mL centrifuge tube | service Biotechnology Co., Ltd | EP-200-M | |
| 200 µL pipette tip | service Biotechnology Co., Ltd | TP-200 | |
| 200 µL pipette tip | service Biotechnology Co., Ltd | IC021029160323 | |
| 300 µL Multi-Channel Pipette | service Biotechnology Co., Ltd | IC091006161022 | |
| 50 µL Pipette | service Biotechnology Co., Ltd | DS35110 | |
| Automatic plate washing machine | rayto Life Sciences Co., Ltd | RT-3100 | |
| Benchtop High-Speed Freezing Centrifuge | dalong construction Co., Ltd | D3024R | |
| electronic balance | Mettler Toledo International Trade (Shanghai) Co., Ltd | ME203E/02 | |
| Electrothermal blast drying oven | Labotery Experimental Instrument Equipment Co., Ltd | GEL-70 | |
| Enzyme Label Detector | BioTeK Co., Ltd | Epoch | |
| High Speed Tissue Grinder | service Biotechnology Co., Ltd | KZ- -F |
|
| Horizontal Freezer | Mellow Group Co., Ltd | BCD-318AT | |
| Laboratory Ultrapure Water Machine | Jinan Aiken Environmental Protection Technology Co., Ltd | AK-RO-C2 | |
| Morris water maze video trail analysing system | Tai Meng Tech Co., Ltd | WMT-200 | |
| Rat 5-HT ELISA Kit | Lian Ke bio Co., Ltd,China | 96T/48T | |
| SPF grade Sprague Dawley (SD) rats | SPF (Beijing) Biotechnology Co | SCXK(JING)2019-0010 | |
| Sprague Dawley rats | Beijing Biotechnology Co., Ltd, China | SCXK (JING) 2019-0010 | |
| Vertical Refrigerated Display Cabinet | Xingx Group Co., Ltd | LSC-316C | |
| video tracking system | Tai Meng Tech Co., Ltd | ZH-ZFT | |
| vortex mixer | Servicebio technology Co., Ltd | MV-100 |
References
- Alqurashi, G. K., et al. The impact of chronic unpredictable mild stress-induced depression on spatial, recognition and reference memory tasks in mice: Behavioral and histological study. Behav Sci. 12 (6), 166 (2022).
- Yu, S., Wang, L., Jing, X., Wang, Y., An, C. Features of gut microbiota and short-chain fatty acids in patients with first-episode depression and their relationship with the clinical symptoms. Front Psychol. 14, 1088268 (2023).
- Duda, P., Hajka, D., Wójcicka, O., Rakus, D., Gizak, A. Gsk3β: A master player in depressive disorder pathogenesis and treatment responsiveness. Cells. 9 (3), 727 (2020).
- Correia, A. S., Vale, N. Tryptophan metabolism in depression: A narrative review with a focus on serotonin and kynurenine pathways. Int J Mol Sci. 23 (15), 8493 (2022).
- Hao, Y., Ge, H., Sun, M., Gao, Y. Selecting an appropriate animal model of depression. Int J Mol Sci. 20 (19), 4827 (2019).
- Willner, P., Towell, A., Sampson, D., Sophokleous, S., Muscat, R. Reduction of sucrose preference by chronic unpredictable mild stress, and its restoration by a tricyclic antidepressant. Psychopharmacology (Berl). 93 (3), 358-364 (1987).
- Nakase, S., Kitayama, I., Soya, H., Hamanaka, K., Nomura, J. Increased expression of magnocellular arginine vasopressin mrna in paraventricular nucleus of stress-induced depression-model rats. Life Sci. 63 (1), 23-31 (1998).
- Wu, X., et al. Involvement of kynurenine pathway between inflammation and glutamate in the underlying etiopathology of cums-induced depression mouse model. BMC Neurosci. 23 (1), 62 (2022).
- Zhang, C., et al. Minocycline ameliorates depressive behaviors and neuro-immune dysfunction induced by chronic unpredictable mild stress in the rat. Behav Brain Res. 356, 348-357 (2019).
- Ma, J., Wang, R., Chen, Y., Wang, Z., Dong, Y. 5-HT attenuates chronic stress-induced cognitive impairment in mice through intestinal flora disruption. J Neuroinflammation. 20 (1), 23 (2023).
- Nollet, M. Models of depression: Unpredictable chronic mild stress in mice. Curr Protoc. 1 (8), e208 (2021).
- Becker, M., Pinhasov, A., Ornoy, A. Animal models of depression: What can they teach us about the human disease. Diagnostics (Basel). 11 (1), 123 (2021).
- Petkovic, A., Chaudhury, D. Encore: Behavioural animal models of stress, depression and mood disorders. Front Behav Neurosci. 16, 931964 (2022).
- Okine, T., Shepard, R., Lemanski, E., Coutellier, L. Sex differences in the sustained effects of ketamine on resilience to chronic stress. Front Behav Neurosci. 14, 581360 (2020).
- Fitzgerald, P. J., et al. Sex- and stress-dependent effects of a single injection of ketamine on open field and forced swim behavior. Stress. 24 (6), 857-865 (2021).
- Doron, R., Burstein, O. The unpredictable chronic mild stress protocol for inducing anhedonia in mice. J Vis Exp. (140), e58184 (2018).
- De Vry, J., Schreiber, R. The chronic mild stress depression model: Future developments from a drug discovery perspective. Psychopharmacology (Berl). 134 (4), discussion 371-347 349-350 (1997).
- Tong, J., et al. Antidepressant effect of helicid in chronic unpredictable mild stress model in rats. Int Immunopharmacol. 67, 13-21 (2019).
- Liu, H., et al. Tnf signaling pathway-mediated microglial activation in the pfc underlies acute paradoxical sleep deprivation-induced anxiety-like behaviors in mice. Brain Behav Immun. 100, 254-266 (2022).
- He, L. W., et al. Optimization of food deprivation and sucrose preference test in sd rat model undergoing chronic unpredictable mild stress. Animal Model Exp Med. 3 (1), 69-78 (2020).
- Ma, W., Wu, B., Gao, X., Zhong, R. Association between frailty and cognitive function in older chinese people: A moderated mediation of social relationships and depressive symptoms. J Affect Disord. 316, 223-232 (2022).
- Geng, C., et al. Systematic impacts of chronic unpredictable mild stress on metabolomics in rats. Sci Rep. 10 (1), 700 (2020).
- Holmes, T. H., Rahe, R. H. The social readjustment rating scale. J Psychosom Res. 11 (2), 213-218 (1967).
- Zhang, M., et al. Shuxie-1 decoction alleviated cums -induced liver injury via il-6/jak2/stat3 signaling. Front Pharmacol. 13, 848355 (2022).
- Antoniuk, S., Bijata, M., Ponimaskin, E., Wlodarczyk, J. Chronic unpredictable mild stress for modeling depression in rodents: Meta-analysis of model reliability. Neurosci Biobehav Rev. 99, 101-116 (2019).
- Hu, C., et al. Re-evaluation of the interrelationships among the behavioral tests in rats exposed to chronic unpredictable mild stress. PLoS One. 12 (9), e0185129 (2017).
- Li, Y., et al. Increased hippocampal fissure width is a sensitive indicator of rat hippocampal atrophy. Brain Res Bull. 137, 91-97 (2018).
- Hu, R. L. B. G., et al. Effects of the Mongolian medicine Zadi-5 on monoamine neurotransmitters in the brain of rats with chronic stress depression model. Info Traditional Chinese Med. 34 (06), 5-8 (2017).
- Zhou, Y., Cong, Y., Liu, H. Folic acid ameliorates depression-like behaviour in a rat model of chronic unpredictable mild stress. BMC Neurosci. 21 (1), 1 (2020).
- Zhuang, Y., Zeng, R., Liu, X., Yang, L., Chan, Z. Neoagaro-oligosaccharides ameliorate chronic restraint stress-induced depression by increasing 5-ht and bdnf in the brain and remodeling the gut microbiota of mice. Mar Drugs. 20 (11), 725 (2022).
- Socała, K., et al. The role of microbiota-gut-brain axis in neuropsychiatric and neurological disorders. Pharmacol Res. 172, 105840 (2021).
- Song, J., Kim, Y. K. Animal models for the study of depressive disorder. CNS Neurosci Ther. 27 (6), 633-642 (2021).
- Abelaira, H. M., Réus, G. Z., Quevedo, J. Animal models as tools to study the pathophysiology of depression. Braz J Psychiatry. 35 Suppl 2, S112-S120 (2013).
- Strekalova, T., et al. Chronic mild stress paradigm as a rat model of depression: Facts, artifacts, and future perspectives. Psychopharmacology (Berl). 239 (3), 663-693 (2022).
- Markov, D. D. Sucrose preference test as a measure of anhedonic behavior in a chronic unpredictable mild stress model of depression: Outstanding issues. Brain Sci. 12 (10), 1287 (2022).
- Czéh, B., Fuchs, E., Wiborg, O., Simon, M. Animal models of major depression and their clinical implications. Progress in Neuro-Psychopharmacology and Biological Psychiatry. 64, 293-310 (2016).
- Gururajan, A., Reif, A., Cryan, J. F., Slattery, D. A. The future of rodent models in depression research. Nat Rev Neurosci. 20 (11), 686-701 (2019).
- Markov, D. D., Novosadova, E. V. Chronic unpredictable mild stress model of depression: Possible sources of poor reproducibility and latent variables. Biology (Basel). 11 (11), 1621 (2022).
- Willner, P. The chronic mild stress (cms) model of depression: History, evaluation and usage. Neurobiol Stress. 6, 78-93 (2017).
- Lages, Y. V. M., Rossi, A. D., Krahe, T. E., Landeira-Fernandez, J. Effect of chronic unpredictable mild stress on the expression profile of serotonin receptors in rats and mice: A meta-analysis. Neurosci Biobehav Rev. 124, 78-88 (2021).
- Willner, P., et al. Validation of chronic mild stress in the wistar-kyoto rat as an animal model of treatment-resistant depression. Behavioural Pharmacology. 30 (2 and 3), 239-250 (2019).
- Slattery, D. A., Cryan, J. F. Modelling depression in animals: At the interface of reward and stress pathways. Psychopharmacology (Berl). 234 (9-10), 1451-1465 (2017).
- Sterley, T. L., et al. Social transmission and buffering of synaptic changes after stress. Nat Neurosci. 21 (3), 393-403 (2018).
- Brechbühl, J., et al. Mouse alarm pheromone shares structural similarity with predator scents. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (12), 4762-4767 (2013).
- Beck, R. C., Self, J. L., Carter, D. J. Sucrose preference thresholds for satiated and water-deprived rats. Psychol Rep. 16, 901-905 (1965).
- Hawkins, P., Golledge, H. D. R. The 9 to 5 rodent - time for change? Scientific and animal welfare implications of circadian and light effects on laboratory mice and rats. J Neurosci Methods. 300, 20-25 (2018).
- Daut, R. A., Ravenel, J. R., Watkins, L. R., Maier, S. F., Fonken, L. K. The behavioral and neurochemical effects of an inescapable stressor are time of day dependent. Stress. 23 (4), 405-416 (2020).
- Hu, R. L. B. G., et al. Experimental research on nutmeg wuwei pills against of depression model rats behavior and hippocampus monoamine neurotransmitters. Chinese J Exp Traditional Medical Formulae. 21 (11), 146-149 (2015).
- Hu, R. L. B. G., et al. Effects of Rou kou Wuwei Pill on the learning and memory abilities and the expression of BDNF and TrkB in hippocampus of depression rats. Chinese J Traditional Chines Med Pro. 32 (8), 3797-3800 (2017).
