이 비디오에서는 장 줄기 세포를 격리하기 위해 성인 Drosophila 장의 해부와 단일 세포 해리 및 FACS에 적합한 미드 구트 컬렉션을 강조합니다.
Protocol
이 프로토콜은 Tauc 외에서발췌 ., 노화 중 줄기 세포 행동을 연구하기 위해 FACS에 의해 성인 Drosophila Midguts에서 장 줄기 세포를 분리, J. Vis. Exp. (2014). 참고: 이 프로토콜이 FAC 정렬에 의해 ISC를 분리하는 데 처음으로 사용되는 경우, 다음 컨트롤은 처음에 FACS 매개 변수를 제대로 설정하기 위해 필수입니다 : 야생 유형에서 …
Materials
Forceps: Dumont, Inox Biologie #5
Fine Science Tools
11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)
Sefar
3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap
Corning
352235
Polymax 1040
Heidolph
543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)
Sigma
A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA
Invitrogen
15400-054
Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry
Life Technologies
S34857
RNAlater Stabilization Solution
Life Technologies
AM7023
Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation